實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)與使用方法

實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)與使用方法第一頁，共39頁。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?/p>

了解顯微鏡的構(gòu)造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用技術(shù)和保養(yǎng)措施學(xué)會(huì)簡(jiǎn)易臨時(shí)玻片的制作方法和生物繪圖方法

第二頁，共39頁。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容在顯微鏡下練習(xí)觀察動(dòng)、植物玻片標(biāo)本。制作洋蔥鱗葉內(nèi)表皮細(xì)胞臨時(shí)裝片，進(jìn)行顯微鏡操作練習(xí)。在顯微鏡下觀察池塘水樣中的微小生物。第三頁，共39頁。三、相關(guān)知識(shí)與實(shí)驗(yàn)原理要知道的幾個(gè)重要的分辨率人眼：0.2mm/250mm光學(xué)顯微鏡：0.2um電子顯微鏡：0.2nm第四頁，共39頁。

顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。1.光學(xué)顯微鏡普通生物顯微鏡由3部分構(gòu)成：①照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。②光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成，是顯微鏡的主體。③機(jī)械裝置：用于固定材料和觀察方便，包括鏡臺(tái)(載物臺(tái))、調(diào)節(jié)器和、物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)等。

尼康E-600顯微鏡

顯微鏡概述第五頁，共39頁。普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造目鏡粗準(zhǔn)焦螺旋鏡筒細(xì)準(zhǔn)焦螺旋轉(zhuǎn)換器物鏡鏡臂聚光器反光鏡鏡座第六頁，共39頁。2.熒光顯微鏡

尼康E800熒光DIC顯微鏡

熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍(lán)色）

第七頁，共39頁。3.激光共聚焦掃描顯微鏡

LCSM照片藍(lán)色為細(xì)胞核，綠色為微管

第八頁，共39頁。4.暗視野顯微鏡

darkfieldmicroscope聚光鏡中央有擋光片，視野背景是黑的，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，物體邊緣是亮的。可觀察4~200nm的微粒子，分辨率比普通顯微鏡高50倍。第九頁，共39頁。把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對(duì)比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處。環(huán)形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。5.相差顯微鏡第十頁，共39頁。第十一頁，共39頁。Fourtypesoflightmicroscope●

Bright-fieldmicroscope:theimageobtainedbythesimpletransmissionoflightthroughacellinculture●Dark-fieldmicroscope:thecellappearsasabrightobjectagainstadarkbackground●Phase-contrastmicroscope:visualizinglivingcells●Differential-interference-contrastmicroscope:visualizinglivingcells第十二頁，共39頁。

普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造可分為兩部分：一為機(jī)械裝置，二為光學(xué)系統(tǒng)。機(jī)械裝置由鏡座、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺(tái)、推動(dòng)器、粗動(dòng)螺旋和微動(dòng)螺旋等組成。光學(xué)系統(tǒng)由目鏡、物鏡、聚光器、光源、濾光片、虹彩光圈等組成第十三頁，共39頁。組成光學(xué)放大系統(tǒng)照明系統(tǒng)機(jī)械和支架系統(tǒng)物鏡光源折光鏡聚光鏡濾光片目鏡顯微鏡的結(jié)構(gòu)第十四頁，共39頁。普通光學(xué)顯微鏡基本構(gòu)造第十五頁，共39頁。光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)：1.照明燈(Lamp)2.聚光器(Condenser)3.載物臺(tái)和切片夾(Mechanicalstageandspecimenretainer)4.推進(jìn)器(Mechanicalstageadjustmentknob)5.物鏡(Objectives)6.粗細(xì)螺旋(Courseandfinefocusknob)7.目鏡(Oculars)8.照相機(jī)等接口(Connectiontocamera,etc.)第十六頁，共39頁。1.物鏡

物鏡(objective)是光學(xué)顯微鏡成像系統(tǒng)中決定其分辨率或叫分辨本領(lǐng)的最關(guān)鍵部件。

物鏡標(biāo)識(shí)第十七頁，共39頁。2.目鏡目鏡的作用是把物鏡放大的實(shí)象再放大一級(jí)，并把物象映入觀察者的眼中，實(shí)質(zhì)上目鏡就是一個(gè)放大鏡。顯微鏡的分辨率能力是由物鏡的數(shù)值孔徑所決定的，而目鏡只是起放大作用。對(duì)于物鏡不能分辨出的結(jié)構(gòu)，目鏡放的再大，也仍然不能分辨出。3.聚光鏡聚光鏡裝在載物臺(tái)的下方。小型的顯微鏡往往無聚光鏡，在使用數(shù)值孔徑0.40以上的物鏡時(shí)，則必須具有聚光鏡。聚光鏡不僅可以彌補(bǔ)光量的不足和適當(dāng)改變從光源射來的光的性質(zhì)，而且將光線聚焦于被檢物體上，以得到最好的照明效果。第十八頁，共39頁。顯微鏡的光學(xué)原理成像原理

光路：光源→虹彩光圈→聚光鏡→通光孔→標(biāo)本（一定要透明）→物鏡→鏡筒→目鏡→眼。第十九頁，共39頁。第二十頁，共39頁。第二十一頁，共39頁。顯微鏡的放大倍數(shù)第二十二頁，共39頁。四、實(shí)驗(yàn)器材

顯微鏡、擦鏡紙、鑷子、小剪、載玻片、蓋玻片、解剖針、表面皿、吸水紙、碘液、清水、香柏油、二甲苯。洋蔥鱗莖，棉花老根橫切玻片標(biāo)本，池塘水樣

第二十三頁，共39頁。五、實(shí)驗(yàn)方法和步驟

（一）顯微鏡的使用1.取鏡和安放

置顯微鏡于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約為3~4cm。鏡檢者姿勢(shì)要端正。

（取、放顯微鏡時(shí)應(yīng)一手握住鏡臂，一手托住底座，使顯微鏡保持直立、平穩(wěn)。切忌用單手拎提；且不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時(shí)睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或紀(jì)錄。）第二十四頁，共39頁。

2.觀察前的準(zhǔn)備工作

(1)觀察者要養(yǎng)成顯微鏡鏡檢的工作習(xí)慣，觀察時(shí)要雙眼同時(shí)睜開，一邊觀察一邊進(jìn)行記錄或描繪。

(2)觀察時(shí)所用的材料、藥品和各種器具要預(yù)先準(zhǔn)備好。

(3)顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它的各個(gè)部件是否完整和正常，并對(duì)載物臺(tái)、目鏡、物鏡以及聚光器上端透鏡進(jìn)行必要的清潔工作。然后進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)。第二十五頁，共39頁。

3.低倍鏡的操作置顯微鏡于固定的桌上，接通電源，打開光源。將標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，調(diào)節(jié)標(biāo)本移動(dòng)螺旋，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使物鏡（10×）與標(biāo)本靠近，眼睛在測(cè)向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開雙眼向物鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，至目的物清晰為止。通過玻片夾推進(jìn)器慢慢移動(dòng)玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部分，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。第二十六頁，共39頁。

4.高倍鏡的操作使用高倍鏡前，必須先用低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)目的物后將它移至視野正中處。旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡觸及載玻片立即停止旋動(dòng)，這說明原來低倍鏡并沒有調(diào)準(zhǔn)，目的物并沒有真正找到，必須用低倍鏡重新調(diào)節(jié)。如果高倍鏡下觀察目的物有點(diǎn)模糊，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到視野清晰。調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺(tái)上升或下降的關(guān)系，防止鏡頭與載玻片強(qiáng)力接觸，損壞鏡頭或載玻片。第二十七頁，共39頁。5.油鏡的操作如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，將目的物移到視野正中。在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。然后再用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微微向上調(diào)（切忌不用粗準(zhǔn)焦螺旋）即可。油鏡觀察完畢，用油鏡紙將鏡頭上的油揩凈，另用擦鏡紙蘸少許二甲苯揩拭鏡頭，再用擦鏡紙揩干。（應(yīng)特別注意不要因在下降鏡頭時(shí)用力過猛，或者調(diào)焦時(shí)誤將粗調(diào)節(jié)螺旋向反方向轉(zhuǎn)動(dòng)而損壞鏡頭及載玻片）第二十八頁，共39頁。6.換片觀察完一個(gè)標(biāo)本后，如果想要再觀察另一標(biāo)本時(shí)，需先將高倍物鏡（或油竟鏡）轉(zhuǎn)回到低倍物鏡，取出標(biāo)本，按放片的方法換上新片，即可觀察。千萬不可在高倍物鏡（或油鏡）下?lián)Q片，以防損壞鏡頭。7顯微鏡使用后的整理

觀察結(jié)束后，調(diào)節(jié)光源到最小再關(guān)掉電源開關(guān)。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使載物臺(tái)下降到最低，取下玻片，擦干凈鏡體，罩上防塵罩，然后放回原處。第二十九頁，共39頁。六、洋蔥鱗葉內(nèi)表皮細(xì)胞臨時(shí)裝片制作取一片干凈的載玻片，用滴管在其中央滴一滴蒸餾水。取洋蔥鱗莖，把它切成八瓣，剝下一片新鮮的肉質(zhì)鱗葉，用刀片在其內(nèi)表面劃一個(gè)邊長(zhǎng)為5mm的正方形，然后用鑷子撕下正方形塊內(nèi)表皮，將其置于載玻片上的水滴中（注意表皮的外面應(yīng)朝上），如果內(nèi)表皮發(fā)生卷曲，應(yīng)細(xì)心用解剖針將其展平．蓋上蓋玻片，注意加蓋玻片時(shí)，應(yīng)該用鑷子夾住蓋玻片一側(cè)，使蓋玻片另一側(cè)邊緣與水滴邊緣相接觸，然后慢慢放下，直到放平為止，這樣可使蓋玻片下的空氣逐漸被水?dāng)D出，以免產(chǎn)生氣泡，影響觀察。如果水太多浸出蓋玻片外，可用吸水紙將多余的水吸去把裝好的片子放在顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍接物鏡觀察，再換用高倍接物鏡觀察細(xì)胞的詳細(xì)結(jié)構(gòu)。

第三十頁，共39頁。第三十一頁，共39頁。七、池塘水樣中微小生物的觀察到綠色池塘中取出水樣，取一潔凈的載玻片，在其中央滴一小滴池塘水樣，蓋上蓋玻片，把裝好的片子放在顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍接物鏡觀察，再換用高倍接物鏡觀察微小生物的形態(tài)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)。第三十二頁，共39頁。八、顯微結(jié)構(gòu)圖的繪制

生物繪圖中繪出的圖要清楚，并正確的表示出形態(tài)構(gòu)造的特點(diǎn)，繪圖注意事項(xiàng)如下：(1)繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。(2)圖的大小及在紙上分布的位置要適當(dāng)。一般畫在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名稱的線條。各引出線條要整齊平列，各部名稱寫在線條右邊第三十三頁，共39頁。(3)畫圖時(shí)先用輕淡小點(diǎn)或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準(zhǔn)確。較長(zhǎng)的線條要向順手的方向運(yùn)筆，或把紙轉(zhuǎn)動(dòng)再畫。同一線條粗細(xì)相同，中間不要有斷線或開叉痕跡，線條也不要涂抹。(4)繪出的圖要正確，觀察時(shí)要把混雜物、破損、重疊等現(xiàn)象區(qū)別清楚，不要把這些現(xiàn)象繪上。(5)圖的明暗及濃淡，應(yīng)用細(xì)點(diǎn)表示，不要采用涂抹方法。點(diǎn)細(xì)點(diǎn)時(shí)，要點(diǎn)成圓點(diǎn)，不要點(diǎn)成小撇。(6)整個(gè)圖要美觀、整潔，還要特別注意準(zhǔn)確性。第三十四頁，共39頁。九、顯微鏡的保養(yǎng)及注意事項(xiàng)（1）油鏡使用完畢，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再取一張擦鏡紙，滴上少量的二甲苯擦拭，然后再取另一張新擦鏡紙將鏡頭上殘留的二甲苯擦凈。否則粘固透鏡的膠質(zhì)會(huì)被二甲苯溶解，日久鏡片易移位脫落。（2）下降聚光器，打開虹彩光圈，使反光鏡垂直于鏡座，以免積聚灰塵。（3）用綢布將鏡身擦拭干凈（切不可用手擦拭），除去灰塵、油污、水汽，以免生銹長(zhǎng)霉。第三十五頁，共39頁。（4）使顯微鏡的各部件恢復(fù)回原位，下降鏡筒，使物鏡呈“八”字形置于載物臺(tái)上，然后將顯微鏡送回鏡箱中。（5）顯微鏡應(yīng)存放在干燥陰涼的地方，不要放在強(qiáng)烈的日光下暴曬，霉雨季節(jié)應(yīng)在顯微鏡箱內(nèi)放置干燥劑（硅膠），如長(zhǎng)時(shí)間不用，則光學(xué)部分應(yīng)卸下放在干燥器中，以免受潮生霉。（6）顯微鏡應(yīng)嚴(yán)禁與揮發(fā)性藥品或腐蝕性藥品放在一起，如碘片、鹽酸、硫酸等藥品。第三十六頁，共39頁