色譜柱的維護(hù)及保養(yǎng)

色譜柱的維護(hù)及保養(yǎng)第一頁，共二十七頁，2022年，8月28日色譜填料的種類及參數(shù)色譜柱評(píng)價(jià)的注意事項(xiàng)色譜柱在使用過程中容易出現(xiàn)的問題及解決辦法色譜柱的保存第二頁，共二十七頁，2022年，8月28日色譜柱是液相色譜儀的心臟

現(xiàn)代高效液相色譜中,不要總是首先埋怨儀器!!!分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇.但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解第三頁，共二十七頁，2022年，8月28日一.色譜填料的種類及性能參數(shù)1.種類填料基質(zhì)

第四頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.填料粒度商品化的填料從1μm~30μm目前常用于分析3μm,5μm,10μm用于半制備10μm,15μm用于制備15μm~40μm

3μm

填料第五頁，共二十七頁，2022年，8月28日

3.

性能參數(shù)

HypersilSinoChrom

第六頁，共二十七頁，2022年，8月28日

HypersilBDS第七頁，共二十七頁，2022年，8月28日

BetasilSpherisorb第八頁，共二十七頁，2022年，8月28日

KromasilLiChrosorb第九頁，共二十七頁，2022年，8月28日不同品牌填料性能參數(shù)比較第十頁，共二十七頁，2022年，8月28日注意事項(xiàng):1.參數(shù)品牌批號(hào)不同分離效果有差異2.

相同粒度球形無定形壓力不同3.

國產(chǎn)進(jìn)口填料壽命不同

如:氟苯法分析氨基酸酯溶性維生素D小結(jié):

1.換不同品牌色譜柱需要重新摸條件

2.能用短柱不用長柱

3.能用進(jìn)口柱不用國產(chǎn)柱第十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日二.色譜柱評(píng)價(jià)注意事項(xiàng)1.盡量減少死體積第十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.色譜柱的評(píng)價(jià)

流動(dòng)相條件

第十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日

流速設(shè)定

柱效N=5.54(tr/tg)2

第十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日三.色譜柱使用過程中易出現(xiàn)的問題及解決辦法1.譜圖分叉首先判斷柱頭是否柱頭塌陷?(按色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告的條件評(píng)價(jià)色譜柱)第十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日修補(bǔ)前后現(xiàn)象

第十六頁，共二十七頁，2022年，8月28日樣品分解第十七頁，共二十七頁，2022年，8月28日現(xiàn)象原因解決辦法柱頭塌陷流動(dòng)相含鹽時(shí),沖洗系統(tǒng)要用20%~50%的甲醇／水不要用純水沖柱,

修補(bǔ)色譜柱柱外死體積檢查進(jìn)樣閥,色譜柱,檢測(cè)器的管路連接有無死體積,

更換密封環(huán)(刃環(huán)).柱頭填料污染嚴(yán)格過濾流動(dòng)相和樣品,

修補(bǔ)色譜柱進(jìn)樣閥密封問題

檢修進(jìn)樣閥樣品分解光分解,氧化分解,溶劑分解采取相應(yīng)措施色譜柱填充不實(shí)色譜柱填充重新裝填色譜柱受到強(qiáng)烈振動(dòng)重新裝填第十八頁，共二十七頁，2022年，8月28日色譜柱的修復(fù)第十九頁，共二十七頁，2022年，8月28日柱頭塌陷修復(fù)辦法擰下柱頭螺帽(最好在臺(tái)虎鉗上)用尖針輕輕除掉柱頭表面的污染填料取少量與色譜柱相同的新填料,調(diào)成漿糊狀(正相用正己烷,反相用甲醇)填實(shí)柱頭(輕輕下壓)更換柱頭過濾板,將柱頭螺帽擰緊(柱頭填料下陷>3mm修復(fù)后效果也不會(huì)理想第二十頁，共二十七頁，2022年，8月28日2.泵壓力升高不要認(rèn)為壓力高就是色譜柱的問題

首先判斷是否是色譜系統(tǒng)管路阻塞?

方法:

(分段檢查在線過濾器→進(jìn)樣閥→色譜柱→

檢測(cè)器→排液管)第二十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日現(xiàn)象原因及解決辦法現(xiàn)象原因解決辦法在線過濾器阻塞溶劑過濾不好或密封圈磨損,用30%硝酸超聲在線過濾器,再用水超聲.進(jìn)樣閥定量管阻塞樣品過濾不好,更換定量管管路阻塞緩沖液中的鹽遇到甲醇結(jié)晶,高壓反沖,加熱或更換管路色譜柱阻塞柱頭濾板阻塞,

緩沖液中的鹽遇到甲醇結(jié)晶,反沖或更換柱頭濾板系統(tǒng)用20%甲醇／水,徹底置換后,接上色譜柱小流量反沖第二十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日四.色譜柱的保存系統(tǒng)及填料儲(chǔ)存溶劑正相系統(tǒng)(CN,NH2,SiO2)正己烷反相系統(tǒng)(C18,C8,C4,CN,NH2)純甲醇或純乙腈特殊填料(手性,專用柱)按說明書要求第二十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日

短期不用必須沖洗干凈后保存.

長期不用每隔2~3個(gè)月沖洗一次防止強(qiáng)烈振動(dòng)第二十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日正相系統(tǒng)換反相系統(tǒng)注意事項(xiàng)

1.

首先用正己烷(硅膠柱)將色譜系統(tǒng)包括正相柱平衡好(保證20分鐘內(nèi)基線平直,無峰出現(xiàn))2.

卸掉硅膠柱,封好保存,3.

將進(jìn)樣閥與檢測(cè)器短路,用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)10分鐘(流速1ml/min).在這期間空撥進(jìn)樣閥三次.4.

換甲醇(或已睛)沖洗系統(tǒng)20分鐘(流速2ml/min).此期間空撥進(jìn)樣閥三次.5.

安上反相色譜柱,流速調(diào)到1ml/min,用甲醇(或已睛)沖洗系統(tǒng),,直到系統(tǒng)平衡.6.

進(jìn)三針標(biāo)準(zhǔn)品,檢驗(yàn)面積﹑保留時(shí)間是否重復(fù),若不重復(fù),繼續(xù)沖洗直到重復(fù).第二十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日反相系統(tǒng)換正相系統(tǒng)注意事項(xiàng)1.首先用甲醇(或已睛)將色譜系統(tǒng)包括反相柱平衡好(保證20分鐘內(nèi)基線平直,無峰出現(xiàn))2.卸掉反相柱,封好保存,3.將進(jìn)樣閥與檢測(cè)器短路,用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)

10分鐘(流速1ml/min).在這期間空撥進(jìn)樣閥三次.4.換正己烷(硅膠柱)沖洗系統(tǒng)20分鐘(流速2ml/min).此間空撥進(jìn)樣閥三次.5.安上硅膠色譜柱,流速調(diào)到1ml/min,用正己烷沖洗系統(tǒng),

直到系統(tǒng)平衡.6.進(jìn)三針標(biāo)準(zhǔn)