純化水R2A培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證

純化水R2A培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證編號(hào)：FAL-YZ-005.1R2A培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證報(bào)告編制/日期審核/日期評(píng)審會(huì)簽姓名部門職務(wù)評(píng)審意見(jiàn)日期批準(zhǔn)/日期科技發(fā)展目錄序號(hào)內(nèi)容頁(yè)號(hào)1目的32范圍33依據(jù)34職責(zé)權(quán)限35驗(yàn)證方法35.2驗(yàn)證內(nèi)容和結(jié)果3－85.3驗(yàn)證結(jié)論96附件10-12R2A培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證報(bào)告1.目的因2023版藥典純化水檢驗(yàn)用培養(yǎng)基變更,依1105非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查方法,通過(guò)此次實(shí)驗(yàn)對(duì)所更換的R2A瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行適用性檢查，以證明該方法及所采用的培養(yǎng)基適用于純化水微生物限度檢查日常檢測(cè)。2.范圍適用于本公司純化水的微生物限度檢查。3．依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典（2023年版）4.職責(zé)權(quán)限姓名部門分工職責(zé)組長(zhǎng)：組織確認(rèn)或驗(yàn)證工作，批準(zhǔn)方案和報(bào)告負(fù)責(zé)編制方案、實(shí)施、總結(jié)報(bào)告及微生物檢測(cè)負(fù)責(zé)設(shè)備樣品提供,配合實(shí)施方案的工作負(fù)責(zé)微生物檢測(cè)5.驗(yàn)證方法5.1R2A培養(yǎng)基的適用性檢查R2A培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代,試驗(yàn)用菌種應(yīng)采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。菌液制備銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質(zhì)控品,使用前注入1.1ml稀釋液充分溶解后,在漩渦混合器上振蕩混勻,制成1ml(相當(dāng)于10～100cfu/0.1ml)菌懸液。適用性檢查取銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各10～100cfu，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注R2A瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)不少于5天，計(jì)數(shù)；結(jié)果判定被檢定的固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備5.1.6.1儀器設(shè)備設(shè)備名稱設(shè)備編號(hào)設(shè)備狀態(tài)壓力蒸汽滅菌器10-11-53□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)激光塵埃粒子計(jì)數(shù)器Y09-3016□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)溫濕度計(jì)JWS-A3□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)微壓差表B10093624□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)微壓差表B10090070□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)細(xì)菌培養(yǎng)箱SPX-100B-Z□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)霉菌培養(yǎng)箱MLX-150-1□未檢定□己檢定在有效期內(nèi)確認(rèn)人:日期:5.1.6.2操作環(huán)境微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。器具無(wú)菌培養(yǎng)皿：（直徑90mm）1ml注射器5.2計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證當(dāng)建立純化水微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測(cè)定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。菌種及菌液制備同計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查驗(yàn)證方法驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。（1）試驗(yàn)組薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)時(shí)，取1ml純化水，過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入10～100cfu試驗(yàn)菌，過(guò)濾，濾膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基上。（2）菌液組將相當(dāng)于10～100cfu/ml菌懸液置于100mlPH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液過(guò)濾。（3）供試品對(duì)照組取1ml純化水供試液置于100mlPH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，過(guò)濾，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。結(jié)果判斷在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)。5.2.4.試驗(yàn)樣品純化水稀釋液和試劑：PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液器具無(wú)菌培養(yǎng)皿：（直徑90mm）一次性注射器驗(yàn)證用微生物名稱及其編號(hào)菌株名稱編號(hào)銅綠假單胞菌CMCC(B)10104枯草芽孢桿菌CMCC（B）635015.培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)商培養(yǎng)基批號(hào)有效期瓊脂培養(yǎng)基S（R2A瓊脂）青島尼賽欣合生物技術(shù)20231009202310085.2.5驗(yàn)證試驗(yàn)操作5.2.5.1試驗(yàn)菌的制備和稀釋銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質(zhì)控品,使用前注入1.1ml稀釋液充分溶解后,在漩渦混合器上振蕩混勻,制成1ml(相當(dāng)于10～100cfu/0.1ml)菌懸液.再用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液將其稀釋制成10～100cfu/ml的菌懸液。5.2.5.2將試驗(yàn)分為3組A樣品試驗(yàn)組取純化水1ml，置于裝有PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒瓶中或均質(zhì)袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液,用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml沖洗濾膜,最后加入10～100cfu試驗(yàn)菌,每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿,按膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。B菌液組將10-100cfu/ml菌懸液置于裝有100mlPH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的三角燒瓶中或均質(zhì)袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液通過(guò)一張濾膜,平行制備兩個(gè).以測(cè)定所加的菌數(shù)。C供試品對(duì)照組取純化水1ml，置于裝有PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml的三角燒瓶中或均質(zhì)袋中，充分振搖1分鐘。每張濾膜抽濾100ml的供試液,用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100ml沖洗濾膜，平行制備2個(gè)平皿,按膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)測(cè)定供試品的本底菌數(shù)。5.2.5.3培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌在30～35℃下培養(yǎng)不少于5天，將點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。并將結(jié)果記錄于附件5.2.6試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)組的菌的回收率接入菌種菌落計(jì)數(shù)（cfu/皿）回收率試驗(yàn)組供試品對(duì)照組菌液組銅綠假單胞菌平均值枯草芽孢桿菌平均值表中：回收率=（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)－供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值）÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。檢測(cè)人:復(fù)核人:復(fù)核日期:5.3驗(yàn)證結(jié)論5.3.1計(jì)數(shù)性培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)論:試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致。判定R2A瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定?？捎糜诒竟炯兓⑸锵薅葯z查實(shí)驗(yàn)。校正因子(修正系數(shù))校正因子=1/回收率批號(hào):產(chǎn)品試驗(yàn)組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品試驗(yàn)組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄菌種名稱菌液組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對(duì)照組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄供試品供試品對(duì)照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值12測(cè)試人/測(cè)試日期：復(fù)核人/復(fù)核日期：批號(hào):產(chǎn)品試驗(yàn)組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品試驗(yàn)組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄菌種名稱菌液組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對(duì)照組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄供試品供試品對(duì)照組計(jì)數(shù)結(jié)果（cfu/皿）平均值12測(cè)試人/測(cè)試日期：復(fù)核人/復(fù)核日期：批號(hào):產(chǎn)品試驗(yàn)組的微生物生長(zhǎng)檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品