外界因素對酶活性的影響

外界因素對酶活性的影響第1頁/共12頁外界因素對酶活性的影響

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解外界因素對酶活性及酶促反應(yīng)速度的影響。2.加深對酶特性的認(rèn)識(shí)。

二、實(shí)驗(yàn)原理酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)，它極易受外界條件的影響而改變它的構(gòu)象及性質(zhì)，因而也必然會(huì)影響到它的催化活性。酶對溫度、pH、酶濃度及某些離子濃度等變化很敏感。第2頁/共12頁(一)pH值對酶活性的影響酶的活性受環(huán)境pH的影響極為顯著，通常各種酶只有在一定的pH范圍內(nèi)才能表現(xiàn)它的活，一種酶表現(xiàn)其最高活性時(shí)的pH值稱為該酶的最適pH。高于或低于最適pH值時(shí)，酶的活性降低。酶的最適pH值受酶的純度、底物的種類和濃度、緩沖液的種類和濃度以及環(huán)境溫度等條件影響。

(二)溫度對酶活性的影響每種酶都有其最適溫度，高于或低于此溫度酶的活性都降低。一般而言，酶處于過高的溫度環(huán)境中，會(huì)使酶活性永久地喪失；而處于極低溫度的環(huán)境中只會(huì)使酶活性受到抑制，一旦溫度適宜，酶又會(huì)全部或部分地恢復(fù)其活性。第3頁/共12頁(三)酶濃度對酶促反應(yīng)速度的影響在其它條件不變的情況下，若反應(yīng)物濃度大大高于酶濃度時(shí)，則反應(yīng)速度隨酶濃度增加而增加，兩者間成正比關(guān)系，即：V=k[E]

但若反應(yīng)底物濃度較低，而且酶的濃度足夠高時(shí)，增加酶濃度，反應(yīng)速度基本不變。

(四)離子對酶活性的影響就唾液淀粉酶而言，低濃度Cl一可以增加酶活性，高濃度的Cl一或者低濃度的Cu2+則會(huì)抑制酶的活性，而低濃度的Na+、SO42-等對酶活性沒有影響。不同的酶對不同的離子具有不同的效應(yīng)。第4頁/共12頁

三、實(shí)驗(yàn)操作

(一)pH對酶活性的影響1．緩沖溶液的配制取6只潔凈的三角燒瓶，按表1編號(hào)和加試劑：表1.磷酸氫二鈉一檸檬酸緩沖溶液的配制

三角燒瓶編號(hào)123456pH值5.46.26.87.07.48.00.2mol／L磷酸氫二鈉(m1)

11.1513.22

15.45

16.47

18.17

19.45

0.1mol／L檸檬酸(m1)

8.85

6.78

4.55

3.53

1.83

0.55第5頁/共12頁2.pH對酶活性的影響

取6支潔凈試管，分別編號(hào)后，按表2操作：表2pH對酶活性的影響管號(hào)

123456pH值

5.46.26.87.07.48.0緩沖液量(m1)

333333含NaCl的0.5％淀粉(m1)

222222稀釋100倍唾液(m1)

222222充分搖勻

37℃保溫，lmin后，用滴管從3#管中吸l滴反應(yīng)液，放白瓷板用碘液檢驗(yàn)(1滴)。以后每隔1min檢驗(yàn)一次。當(dāng)3#管反應(yīng)液遇碘液呈淡黃色時(shí)，立即向6支管中加碘液

碘液(滴)

222222充分搖勻?qū)嶒?yàn)結(jié)果

第6頁/共12頁(二)溫度對酶活性的影響取3支潔凈試管，按表3操作：

表3溫度對酶活性的影響管號(hào)

123pH6.8磷酸緩沖液(m1)

222含NaCl的O.5％淀粉液(m1)

222稀唾液1：50(m1)111立即處理溫度0℃100℃37℃

放置15min分別從l、2、3支試管中取出一滴在白瓷板上用碘液檢驗(yàn)結(jié)果

改變處理溫度至

37℃37℃37℃作用時(shí)間

15min再分別從1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液檢驗(yàn)結(jié)果

第7頁/共12頁(三)酶濃度對酶活性的影響

1．取3支潔凈試管，編號(hào)，按表4加入淀粉液，緩沖液，加畢后放人37℃恒溫水浴中保溫5min。表4酶濃度對酶活性的影響

管號(hào)

含NaCl的O．5％淀粉液

pH6.8的緩沖液

稀釋唾液

褪色時(shí)間

105010013ml

2ml

1ml23ml

2ml1ml33ml

2ml1ml第8頁/共12頁

2．保溫后，快速加不同濃度的稀釋唾液，搖勻，立即放入37℃恒溫水浴中。計(jì)時(shí)，并每隔1min從各管中取出1滴，用碘液檢驗(yàn)，記錄從加進(jìn)酶液至碘液檢驗(yàn)為橙黃色所需時(shí)間。第9頁/共12頁(四)離子對酶活性的影響取3支潔凈試管，編號(hào)后按表5操作：表5離子對酶活性的影響管號(hào)

1231％NaCl(m1)

10.1％CuSO4(m1)

1蒸餾水(m1)

1O．1％淀粉液(m1)

333100倍稀釋唾液(m1)

11137℃恒溫15min，然后冷卻

碘液(滴)

222結(jié)果

第10頁/共12頁五、實(shí)驗(yàn)建議(1)因各人的唾液淀粉酶活性有所差異，若某一碘液檢驗(yàn)結(jié)果為全