酵母菌大小的測(cè)定和細(xì)胞計(jì)數(shù)課件

實(shí)驗(yàn)二酵母菌大小的測(cè)定和細(xì)胞計(jì)數(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)會(huì)測(cè)微尺和血球計(jì)數(shù)板的使用方法。2、建立對(duì)微生物大小的概念。二、實(shí)驗(yàn)材料1、顯微鏡、物鏡測(cè)微尺、目鏡測(cè)微尺、血球計(jì)數(shù)板、載玻片等。2、麥芽汁培養(yǎng)基、酵母菌。3、吸管、吸水紙等。三、實(shí)驗(yàn)原理(一)酵母菌大小的測(cè)定原理所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的測(cè)微尺來(lái)測(cè)量，先用絕對(duì)長(zhǎng)度的物鏡測(cè)微尺來(lái)校正不表示絕對(duì)長(zhǎng)度的目鏡測(cè)微尺，計(jì)算后者每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度，然后放上待測(cè)的標(biāo)本，用目鏡測(cè)微尺測(cè)定標(biāo)本上微生物細(xì)胞占目鏡測(cè)微尺的格數(shù)，就可計(jì)算該微生物的大小。酵母菌的直徑約8-10μm。(二)酵母細(xì)胞計(jì)數(shù)原理微生物常用的計(jì)數(shù)方法有兩種，即直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。前者利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，能立即得到數(shù)值，但死活細(xì)胞都計(jì)數(shù)在內(nèi)。后者是在乎板上長(zhǎng)成菌落后再計(jì)數(shù)，反應(yīng)較真實(shí)，但費(fèi)時(shí)太長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)是利用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行直接計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)前需對(duì)樣品做適當(dāng)稀釋，按照規(guī)定方法及計(jì)算公式運(yùn)算后，即可得出實(shí)際數(shù)值。

2.目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定(1)取下接目鏡，旋下目鏡上的目透鏡，將目鏡測(cè)微尺放人接目鏡的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透鏡，并裝入鏡筒內(nèi)。(2)將物鏡測(cè)微尺置于顯微鏡的載物臺(tái)上，使有刻度的一面朝上，同觀察標(biāo)本一樣，使具有刻度的小圓圈位于視野中央。(3)先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，待看清物鏡測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺的刻度與物鏡測(cè)微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線。如圖

(4)記錄二條重合線間的目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和物鏡測(cè)微尺的格數(shù)。

3.計(jì)算方式(1)目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度=兩個(gè)重疊刻度間物鏡測(cè)微尺格數(shù)×10／兩個(gè)重疊刻度間目鏡測(cè)微尺格數(shù)(2)以同樣方法，分別在不同倍率的物鏡下測(cè)定測(cè)微尺上每格的實(shí)際長(zhǎng)度。目鏡測(cè)微尺()格=物鏡測(cè)微尺()格目鏡測(cè)微尺每格=()(3)如此測(cè)定后的目鏡測(cè)微尺的尺度，僅適用于測(cè)定時(shí)所用的顯微鏡的目鏡和物鏡的放大倍數(shù)。若更換物鏡、目鏡的放大倍數(shù)時(shí)，必須再進(jìn)行校正標(biāo)定。

4.酵母菌大小的測(cè)定(1)取下物鏡測(cè)微尺，換上酵母菌水浸制片。(2)測(cè)量菌體的長(zhǎng)度和寬度各占目鏡測(cè)微尺幾格，然后換算出菌體的實(shí)際長(zhǎng)度。(3)在同一標(biāo)本上測(cè)定5-10個(gè)菌體，求其平均值。

計(jì)數(shù)室通常有兩種規(guī)格。一種是大方格內(nèi)分為16中格，每一中格又分為25小格；另一種是大方格內(nèi)分為25中格，每一中格又分為16小格。但是不管計(jì)數(shù)室是哪一種構(gòu)造；它們都有一個(gè)共同的特點(diǎn)，即每一大方格都是由16×25=25×16=400個(gè)小方格組成，見圖。2.血球計(jì)數(shù)板的使用(1)用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)酵母菌懸液的酵母菌個(gè)數(shù)。(2)樣品稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計(jì)數(shù)，以每小方格內(nèi)含有4-5個(gè)酵母細(xì)胞為宜，一般稀釋10倍即可。

(3)將血球計(jì)數(shù)板用擦鏡紙擦凈，在中央的計(jì)數(shù)室上加蓋專用的厚玻片。(4)將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余的菌液用吸水紙吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球計(jì)數(shù)室內(nèi)。(5)計(jì)數(shù)時(shí)，如果使用16格×25格規(guī)格的計(jì)數(shù)室，要按對(duì)角線位，取左上、右上、左下、右下4個(gè)中格（即100個(gè)小格）的酵母菌數(shù)。如果規(guī)格為25格×16格的計(jì)數(shù)板，除了取其4個(gè)對(duì)角方位外，還需再數(shù)中央的一個(gè)中格(即80個(gè)小方格)的酵母菌數(shù)。

(6)當(dāng)遇到位于大格線上的酵母菌，一般只計(jì)數(shù)大方格的上方和右方線上的酵母細(xì)胞(或只計(jì)數(shù)下方和左方線上的酵母細(xì)胞)。(7)對(duì)每個(gè)樣品計(jì)數(shù)三次，取其平均值，按下列公式計(jì)算每1ml菌液中所含的酵母菌個(gè)數(shù)。

4.血球計(jì)數(shù)板的清潔血球汁數(shù)板使用后，用自來(lái)水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95％的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其干燥。通過(guò)鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)清洗直到干凈為止。

五、思考題及實(shí)驗(yàn)作業(yè)1.若更換不同放大倍數(shù)的目鏡和物鏡時(shí)，必須用物鏡測(cè)微尺標(biāo)定目鏡測(cè)微尺，這是為什么?2.利用血球計(jì)數(shù)板時(shí)，注入的菌液為什么不能過(guò)多?3.測(cè)定酵母細(xì)胞大小的結(jié)果。(1)接目鏡倍數(shù)是

；低倍鏡倍數(shù)

；高倍鏡倍數(shù)

。(2)低倍鏡下，接目鏡測(cè)微尺

格=物鏡測(cè)微尺

格。目鏡測(cè)微尺每格=

μm。(3)高倍鏡下，接目鏡測(cè)微尺

格=鏡臺(tái)測(cè)微尺

格。