道地藥材老翹的總黃酮提取工藝研究

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目的:探索從老翹中提取總黃酮的最正確工藝。方法:以總黃酮含量為指標(biāo),應(yīng)用正交測(cè)驗(yàn),優(yōu)化老翹總黃酮的提取工藝。結(jié)果:總黃酮最正確工藝為:20倍量70%乙醇在80℃下回流提取2小時(shí)。結(jié)論:該工藝簡(jiǎn)樸可行,是提取老翹總黃酮的有效途徑。

老翹;總黃酮;提取工藝

R282.5B1007-8517(2022)24-0056-01

StudyonextractiontechnologyoftotalflavonoidsfromgrownForsythiaSuspensa

MaXue-mei,MaWen-bing

(CollegeofChemicalEngineeringandEnviroment,NorthUniversityofChina,ShanxiTaiyuan030051)

Abstract:ObjectiveTostudyandoptimizetheextractiontechnologyofthetotalflavonoidsfromgrownForsythiaSuspensa.MethodsTheorthogonaldesignwasusedtooptimizetheextractiontechnologywiththecontentofthetotalflavonoidsasanindex.ResultsTheoptimumextractingtechnologywasasfollow:withtwentytimes70%ethanol,extractedfortwohoursat80℃.ConclusionThismethodcanbeappliedtotheextractionofthetotalflavonoidsfromgrownForsythiaSuspensabecauseitissimpleandfeasible.

Keywords:grownForsythiaSuspensa;Totalflavonoids;Extractiontechnology

連翹為木犀科(Oleaceae)連翹屬(Forsythia)植物連翹(Forsythiasuspense(Thunb.)Vahl)的枯燥果實(shí)。連翹藥材商品分為“青翹”和“老翹”,果實(shí)初熟尚帶綠色時(shí)采收稱(chēng)為青翹,果實(shí)熟透顏色發(fā)黃時(shí)采收稱(chēng)為老翹[1]。現(xiàn)代藥理說(shuō)明其有抗菌、強(qiáng)心、利尿、鎮(zhèn)吐等作用,是大量中藥制劑的主要原料,藥用價(jià)值明顯。因此,眾多學(xué)者對(duì)其舉行了化學(xué)成分和活性研究,說(shuō)明其提取物有確定的抗氧化活性[2-3]。黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)自然抗氧化劑,具有除掉人體中超氧離子自由基、抗衰弱和鞏固機(jī)體免疫力的生理活性[4-5]。因此,測(cè)定老翹中黃酮總含量并優(yōu)化其提取工藝有重要意義,為連翹資源的綜合利用供給理論依據(jù)和技術(shù)參考。

1儀器與試藥

1.1儀器TU-1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);XMTF-1000-2型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海預(yù)康科技有限公司);JJ200細(xì)致電子天平(常熟雙杰測(cè)試儀器廠(chǎng));DFT-100手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺大德中藥機(jī)械有限公司)。

1.2試藥老翹2022年3月購(gòu)自山西省太原市仁和大藥房;蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉和硝酸鋁均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1總黃酮的測(cè)定[6]

2.1.1對(duì)照品溶液的制備細(xì)致稱(chēng)取120℃枯燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg,置50ml容量瓶中,用60%乙醇溶解并定容得到濃度為0.2mg/ml對(duì)照品溶液,備用。

2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制細(xì)致量取對(duì)照品溶液各0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml分別置于25ml容量瓶中,再依次參與1ml5%亞硝酸鈉溶液,搖勻,放置6min后參與1ml10%硝酸鋁溶液,搖勻,放置6min后參與4%氫氧化鈉溶液1ml,再加30%乙醇定容,搖勻,放置15min后在510nm處測(cè)定吸光值。以吸光度值為y軸,蘆丁濃度(mg/ml)為x軸,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。得到回歸方程為Y=14.4288X+0.0068,r=0.9993,線(xiàn)性范圍3.91-43.60μg/ml。

2.1.3樣品溶液的制備切實(shí)稱(chēng)取陰干粉碎的老翹10g,于500ml三頸圓底燒中,以確定濃度的乙醇作為提取溶劑,操縱提取液溫度,利用索氏提取器減壓回流提取。提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮成膏狀后于60℃真空枯燥箱中枯燥至恒重,切實(shí)稱(chēng)取枯燥粉末20mg用60%乙醇溶解并定容于10ml容量瓶中。依照2.1.2項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度,代入回歸方程中計(jì)算總黃酮的含量,并計(jì)算總黃酮的收率:總黃酮的收率(%)=(提取液中總黃酮濃度×提取液體積)/對(duì)應(yīng)的原料重量×100%

2.2單因素測(cè)驗(yàn)

2.2.1提取溶劑濃度對(duì)總黃酮收率的影響

圖1乙醇濃度對(duì)總黃酮收率的影響

由圖1可看出,隨著乙醇濃度的增加黃酮收率呈上升趨勢(shì)。用70%-90%乙醇提取得率較高,80%的得率最高。當(dāng)乙醇濃度高于80%時(shí),提取液顏色加深并且總黃酮得率開(kāi)頭下降。這可能是由于提取溶劑極性裁減使提取液中脂溶性物質(zhì)增加,使總黃酮含量相對(duì)下降。同時(shí)用70%和90%乙醇提取的總黃酮得率接近,因此80%乙醇提取效果最好。

2.2.2提取時(shí)間對(duì)總黃酮收率的影響

圖2提取時(shí)間對(duì)總黃酮收率的影響

由圖2可看出,隨著提取時(shí)間的增加,總黃酮收率也隨之增加。當(dāng)提取時(shí)間達(dá)成2h以后,總黃酮收率增加趨勢(shì)不明顯,且提取液顏色顯著加深,可能是由于提取時(shí)間的增加使雜質(zhì)溶出量也增加。從總黃酮得率來(lái)看,提取時(shí)間為2h,2.5h和3h得率較高且較為接近。因此,選擇2h為最正確提取時(shí)間。

2.2.3提取溫度對(duì)總黃酮收率的影響

圖3提取溫度對(duì)總黃酮收率的影響

由圖3可看出,總黃酮收率隨溫度升高而增大。提取溫度在60℃和70℃時(shí)的總黃酮收率較低。當(dāng)溫度高于70℃,總黃酮收率隨溫度增大而明顯升高。提取溫度在80-100℃之間總黃酮收率變化不大,考慮到乙醇沸點(diǎn)低于80℃且高溫會(huì)破壞黃酮類(lèi)化合物的穩(wěn)定性。因此選中最正確提取溫度為80℃,提取過(guò)程中保持該溫度不變。

2.2.4料液比對(duì)總黃酮收率的影響

圖4料液比對(duì)總黃酮收率的影響

由圖4可看出開(kāi)頭隨著料液比的增大總黃酮收率增加,當(dāng)料液比為1:25時(shí)達(dá)成最大,持續(xù)增大料液比總黃酮收率下降。料液比的增加會(huì)造成后續(xù)操作(如濃縮純化)的難度和本金增加。綜合考慮認(rèn)為1:20為最正確料液比。

正交測(cè)驗(yàn)考察采用L9(3??3)正交表考察最正確工藝條件。正交測(cè)驗(yàn)因素水平安置見(jiàn)表1,測(cè)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表1

正交測(cè)驗(yàn)因素水平表

水平A提取時(shí)間t/hB乙醇濃度(%)C料液比(g:ml)11.560%1:152270%1:2032.580%1:25

表2

L9(3??3)正交測(cè)驗(yàn)結(jié)果

測(cè)驗(yàn)號(hào)ABC黃酮收率(%)11112.0521222.2731332.3642122.1552232.3962312.5173131.9483222.5893312.26K16.686.146.82K27.057.247.00K36.787.136.69k12.222.04