動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物(2016年)

動物細胞工程動物體細胞核移植技術(shù)

離體的植物組織細胞可以培養(yǎng)成完整的植株，而動物細胞的全能性會隨著動物細胞分化程度的提高而受到限制?？寺游飳嶋H是通過核移植來實現(xiàn)的。動物體細胞核移植技術(shù)

將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。

一、概念用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物可分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植動物體細胞核移植技術(shù)

二、體細胞核移植過程（高產(chǎn)奶牛為例）電激處理使供體核進入受體卵母細胞構(gòu)建重組胚胎卵母細胞采集、培養(yǎng)MⅡ期卵母細胞供體牛供體細胞注入去核卵母細胞代孕母牛克隆牛體細胞培養(yǎng)去核卵母細胞去核胚胎移植去核注核重組細胞供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期）去核無核卵母細胞注入細胞融合重組細胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體克隆動物物理或化學(xué)法激活（遺傳物質(zhì)基本與供體相同）動物體細胞核移植技術(shù)

二、體細胞核移植過程（高產(chǎn)奶牛為例）動物體細胞核移植技術(shù)三、有關(guān)內(nèi)容1、卵母細胞采集后要在體外培養(yǎng)到__________,然后通過__________的方法去除細胞核。再將經(jīng)過_________的供體細胞后注入去核的卵母細胞（電激等促進融合）而構(gòu)成重組細胞。然后用物理或______法激活受體細胞，使其完成細胞分裂和發(fā)育過程，構(gòu)建成重組胚胎。最后將胚胎經(jīng)_________到代孕的雌性動物體內(nèi)。MⅡ中期顯微操作細胞培養(yǎng)化學(xué)胚胎移植4、原理：________的全能性5、克隆動物的遺傳物質(zhì)與_______基本相同，而細胞質(zhì)的DNA來自于__________細胞核供體卵母細胞動物細胞培養(yǎng)、核移植和胚胎移植卵細胞大,易操作；卵細胞易激發(fā)細胞核的全能性2、核移植過程包含的技術(shù)手段有：3、取卵細胞作受體細胞的原因：四、體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育2、保護瀕危物種，增加動物的存活數(shù)量3、可作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、克隆動物細胞、組織、器官可作為移植的供體了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等體細胞核移植技術(shù)存在的問題1、胚胎移植－動物幼體產(chǎn)出概率＜10％2、克隆動物存在著健康問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。3、克隆動物的食品安全性問題存在爭議附錄資料：不需要的可以自行刪除兒童孤獨癥早期篩查名稱問題自閉癥、孤獨癥、kanner綜合征嬰兒精神分裂廣泛性發(fā)育障礙：孤獨癥、阿斯伯格綜合征、雷特綜合征、退化性精神病、不能分類的廣泛性發(fā)育障礙孤獨癥譜系障礙（ASD）：包括孤獨癥、阿斯伯格綜合征、未分類的廣泛性發(fā)育障礙。孤獨癥的主要表現(xiàn)1、交流障礙2、語言障礙3、狹隘興趣和重復(fù)刻板行為孤獨癥的語言障礙

不會說話或說話遲，是就診首位原因半數(shù)以上患兒終身無語？（15%）語言倒退自言自語、聽不懂或無意義的語言電視廣告語言語言刻板、重復(fù)、鸚鵡式語言你我（人稱代詞）不分自我中心的話題語言倒退與孤獨癥09年的一項研究表明語言技能喪失是孤獨癥兒童特有的現(xiàn)象15%的孤獨癥譜系障礙兒童顯示出語言喪失孤獨癥的交流障礙不（少）看不點頭不（少）指不搖頭不（少）應(yīng)不尋求安慰不（少）說該怕不怕不參照不該怕卻怕不炫耀該笑（哭）不笑（哭）孤獨癥的交流障礙缺乏目光對視，“目中無人”獨自嬉玩，不合作通常不怕陌生人不喜歡擁抱或避免與他人接觸無恰當(dāng)?shù)纳眢w語言，例如點頭搖頭極少微笑、難相處與父母的依戀情感障礙或延緩不恰當(dāng)、奇怪的或延遲的交流或情感反應(yīng)孤獨癥的刻板行為種類繁多，各個兒童不同時期表現(xiàn)不一重復(fù)動作（看手、轉(zhuǎn)圈、搖晃等）重復(fù)行為（開關(guān)、撕紙、看電視廣告、天氣預(yù)報、同一首歌、天線寶寶）重復(fù)刻板語言強迫行為（睡眠、路線、排便、座位）強迫思維（重復(fù)問題、難以擺脫的痛苦）對某些物件或事情（科學(xué)事實）不尋常興趣孤獨癥兒童的智力半數(shù)以上正?；虺?yōu)秀機械記憶力音樂、繪畫和藝術(shù)能力科學(xué)領(lǐng)域的興趣和能力，少數(shù)在某一或幾方面有特殊能力智障學(xué)者現(xiàn)象智力正常范圍兒童智力結(jié)構(gòu)顯著異常，通常PIQ>VIQ孤獨癥兒童的感覺異常聽知覺敏感，喜愛某些聲音，對另一些聲音特別恐懼觸覺異常，表現(xiàn)在對物件的好惡痛覺異常，多不怕痛視覺異常：對特別圖像的喜好或厭惡、喜歡斜視、倒視本體覺異常：喜歡坐車、怕坐電梯、喜旋轉(zhuǎn)。運動一般十分靈活孤獨癥的其他表現(xiàn)多數(shù)兒童多動明顯，來回跑動不知疲倦少數(shù)兒童有癲癇不聽話、違拗、攻擊、自傷、沖動、固執(zhí)、激動等行為多見，可能與父母教育方式有關(guān)日常生活自理能力差孤獨癥的診斷沒有特異性實驗室診斷手段CT,MRI,SPECT,PET,腦電圖，染色體等檢查有助于鑒別診斷根據(jù)典型臨床表現(xiàn)孤獨癥診斷不難診斷可根據(jù)DSM-Ⅳ或ICD-10為標準CHAT,CARS,ABC是國內(nèi)常用篩查量表ADI-R,ADOS是診斷“金標準”，新的篩查量表如SRS考慮了譜系障礙的問題孤獨癥篩查的重要性孤獨癥流行病學(xué)研究：發(fā)病率的變遷1/110孤獨癥的病因?qū)W研究：尚未明了，遺傳主導(dǎo)、環(huán)境改變表型孤獨癥的診斷現(xiàn)況：自由診，年齡偏大孤獨癥的治療研究：尚無藥物，但可治早期合理系統(tǒng)化干預(yù)訓(xùn)練，絕大部分兒童會有不同程度改善，一部分孩子可能獲得基本痊愈或基本具備自主生活、學(xué)習(xí)和工作能力（痊愈率為3%~25%）早期篩查的必要性大多數(shù)孤獨癥兒童的父母開始肯定的擔(dān)心與尋求幫助是在2歲時90%的兒童在24月以內(nèi)表現(xiàn)異常，50-60%在12月以內(nèi)表現(xiàn)異常；出現(xiàn)癥狀到引起父母擔(dān)心的時間間隙達1年，從父母開始擔(dān)心到被轉(zhuǎn)診評估的時間間隙至少1年以上孤獨癥篩查的意義早期篩查早期診斷早期訓(xùn)練已證明：始于2歲以內(nèi)的早期開展高強度科學(xué)行為干預(yù)，可以顯著改善ASD的預(yù)后擴大公眾對孤獨癥的認識形成合適、完善的孤獨癥患兒康復(fù)指導(dǎo)公共服務(wù)體系構(gòu)建一個和諧的社會、提高我國人口素質(zhì)AAP指南建議在健康兒童保健中心對18-24月齡進行ASD篩查初級保健工作者在9個月常規(guī)保健中，關(guān)注嬰兒的目光接觸、與母親交往能力，建立多級的預(yù)警機制，以期早發(fā)現(xiàn)對于1歲左右存在可疑危險因素的兒童都應(yīng)該給予干預(yù)和隨訪，不必追求一個精確的診斷有研究報道：1、在2歲以下診斷的ASD相對比較穩(wěn)定，尤其是孤獨癥診斷比ASD診斷更穩(wěn)定；2、在隨訪時不再被診斷為ASD和孤獨樣癥狀較輕、較高認知、較多語言能力、沒有刻板行為、接收更多ABA訓(xùn)練時間有關(guān)。孤獨癥早期特征性癥狀分享注意缺陷假裝游戲缺陷早期社會交流損害一歲以內(nèi)孤獨癥表現(xiàn)特點極端的氣質(zhì)與行為，如易怒、令人擔(dān)憂的被動眼神接觸差對聲音反應(yīng)差，特別是對叫名字時互動游戲的企圖差注視物體的興趣強于注視人的興趣對需求和分享時的手指指示延遲或缺乏反復(fù)的咿呀發(fā)聲少快樂情緒的分享和互動性表達的缺乏孤獨癥的高危特征表現(xiàn)6月齡后：逗弄時不表現(xiàn)快樂，眼睛很少注視人10月齡：對叫自己名字沒反應(yīng)，聽力正常12月齡：對于任何言語指令沒有反應(yīng)，沒有咿呀學(xué)語，沒有手勢語言，不能進行目光跟隨；對于動作模仿不感興趣16月齡：不說任何詞匯，對語言反應(yīng)少，不理睬別人說話18月齡：不能用手指指物或用眼睛追隨他人手指指向，沒有展示盒給與行為24月齡：沒有自發(fā)的雙詞短語任何年齡：出現(xiàn)語言功能倒退或社交技能倒退孤獨癥篩查量表的選擇一級篩查工具用于在普通人群中發(fā)現(xiàn)ASDs可疑人群CHAT、M-CHAT、CHAT-23、CAST等二級篩查工具用于在ASDs可疑人群中排除其他發(fā)育障礙協(xié)助診斷ASDS/ABC/ASSQ/CARS/GADS/STAT/SCQ/ASQCHAT量表14個條目A部分9個：由父母回答B(yǎng)部分5個：由專業(yè)人員觀察評定適用年齡：18-24月齡幼兒特異性高、敏感性低：可有效地發(fā)現(xiàn) ASD兒童，不適合作為篩查工具在常規(guī)體檢中使用M-CHAT23個條目問卷范圍增寬：增加了感覺運動異常、模仿、對名字的反應(yīng)等內(nèi)容條目；由父母或帶養(yǎng)人完成使用年齡：用于16-48月齡幼兒敏感性：0.85；特異性0.93有研究認為，單獨使用M-CHAT進行一般人口篩查時其陽性預(yù)測值與CHAT類似，漏篩比例也相當(dāng)高，但是當(dāng)與電話訪視結(jié)合使用后其漏篩率明顯降低建議：將M-CHAT與電話訪視結(jié)合使用來進行孤獨癥早期篩查CHAT-23（香港）包含2個部分A部分：M-CHAT問卷漢化版（23條目）B部分：CHATB部分觀察項目（4條目）診斷標準：A部分：23項中有6項陽性或7項核心項目中2項陽性B部分：4項中有2項陽性使用年齡：智齡在18-24個月兒童早期篩查工具特點父母問卷優(yōu)點：操作簡單，容易評分，易于推廣缺點：父母是否閱讀和理解每個問題，是否以設(shè)計者的意圖區(qū)解釋問題，因此這些主觀性因素可能影響評定結(jié)果檢查者評定量表優(yōu)點：直接采用結(jié)構(gòu)化、互動性的方式觀察孤獨癥的核心癥狀，提供的信息不僅可以確定孤獨癥的可能，也可以提供與干預(yù)有關(guān)的信息。缺點：使用者需要接受培訓(xùn)，費時費力，不利于大面積推廣篩查工具選擇的參考因素：時間、經(jīng)濟、服務(wù)負擔(dān)、服務(wù)類型、評定人員臨床經(jīng)驗與受訓(xùn)經(jīng)歷等。孤獨癥早期系統(tǒng)監(jiān)測監(jiān)測是一個動態(tài)的過程，常規(guī)體檢時進行；重點：主動詢問與觀察孤獨癥高危指標，關(guān)注與回應(yīng)父母對兒童發(fā)育的擔(dān)憂培訓(xùn)兒童保健醫(yī)師具備識別孤獨癥早期癥狀的能力進行科普宣傳，提高父母與兒童養(yǎng)育人員對孤獨癥的認識，早期識別孤獨癥的行