已中標標書二附院

女女19713民族每年工作時間（月6電 聯(lián)系人電單 名 亞類說明20111—20131238.0000摘要Kca3.1Kca3.15 備注（計算依據(jù)與說明費（5）（2）（1）（2）5. 其他經(jīng)費資助（含部門匹配字目前研究證實13：在病理狀態(tài)下，腎臟的各種固有細胞如：系膜細胞、腎小管上皮細胞、足細胞、固有成纖維細胞、血管平滑肌細胞、內(nèi)皮細胞都可以向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化，轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細胞（myofibroblasts，b）球硬化的發(fā)生、發(fā)展。腎臟疾病早期b大量增殖提示預(yù)后不良?；闹匾罁?jù)。FSP1（Fibroblast-specificprotein1,FSP1）是鈣結(jié)合蛋白S100的一ECM管已采用系統(tǒng)抑制、EM拮抗劑,、TGF-β信號通路調(diào)節(jié)劑、以及-1αall中電導鈣激活鉀通道[intermediateconductanceCa2+-activatedK+-channel(IK/kca3.1/ N4編碼，位于第19對上，含有428個氨基酸。kca3.1對胞內(nèi)Ca2+高度敏感,它的開放概率隨胞內(nèi)鈣濃度的升高而急劇升高,其最大半激活鈣濃度為95nmol。正常情況下kca3.1通kca3.1通道特異性抑制劑，1μmolTRAM-34能抑制kca3.1電流80%以上。TRAM-85與轉(zhuǎn)分化，研究最多的是血管平滑肌細胞[9]和紅細胞[6]，近來被認為可能成為防治血管僵但有關(guān)kca.1在腎臟的研究只有極少量。i[12發(fā)現(xiàn)腎患者ka3.1通道可調(diào)控細胞膜上的氯離子分泌，從而影響細胞容量變化。gic等[13發(fā)現(xiàn)ka3.1通bFG誘導的成纖維細胞上kca3.1的表達呈現(xiàn)8-12大鼠腎臟上kca3.1表達呈現(xiàn)20TRM-34抑制或敲出kca3.1后，纖維化程度明顯減輕，細胞形態(tài)保持完好，無細胞凋亡，α-、-1I和IIIT-β148%α-陽性細胞數(shù)量明顯減少49%Ras/Raf/MEK/ER信號途[14kca3.1通道抑制劑可以抑制6、C43、26%、32、32%所有這些研究都在提示我們：kca.1通道可能在炎癥、凋亡、細胞增殖和轉(zhuǎn)分化等多個靶點起著調(diào)控腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化的作用，kca3.通道極有可能成為防治進行性纖維增殖性疾病，如腎間質(zhì)纖維化的靶目標。系膜細胞和腎小管上皮細胞是腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化過程中非常重要的兩種腎臟固有細胞。系膜細胞約占腎小球固有細胞總數(shù)的30%～40%,ECM沉積和TF-β1等細胞因子的重要來源。但抑制系膜細胞1是否會抑制系膜細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)分化，以及進一步改善腎小球硬化程度，獻檢索國內(nèi)、外未有相關(guān)。腎臟固有成纖維細胞和系膜細胞來源的TGF-β1在bFGF防治腎間質(zhì)纖維化作用，國內(nèi)、外未見相關(guān)。kca3.1通道在正常和增殖的系膜細本課題擬采用免疫熒光與激光共聚焦相結(jié)合、RT-PCR與膜片鉗技術(shù)相結(jié)合、細胞王玉,鄒萬忠,李曉玫.腎小球腎炎中系膜細胞α-平滑肌肌動蛋白的表達與細胞表型轉(zhuǎn)化的關(guān)系[J].中華腎臟病1998,14(4):206-210.YamaguchiY,IwanoM,SuzukiD,NakataniK,KimuraK,HaradaK,KuboA,AkaiY,ToyodaM,KanauchiM,NeilsonEG,SaitoY.Epithelial-mesenchymaltransitionasapotentialexnationforpodocytedepletionindiabeticnephropathy.AmJKidneyDis.2009;54(4):653-664.ZeisbergEM,PotentaSE,SugimotoH,ZeisbergM,KalluriR.Fibroblastsinkidneyfibrosisemergeviaendothelial-to-mesenchymaltransition.JAmSocNephrol2008;ReidyK,SusztakK.Epithelial-mesenchymaltransitionandpodocytelossindiabetickidneydisease.AmJkidneyDis.2009;54(4):653-6TrinhNT,PrivéA,MailléE,No?lJ,BrochieroE.EGFandK+channelactivitycontrolnormalandcysticfibrosisbronchialepitheliarepair.AmJPhysiolLungCellMolPhysiol.2008;295(5):L866-80. VandorpeDH,XuC,ShmukleBE,OtterbeinLE,TrudelM,SachsF,GottliebPA,BrugnaraC,AlperSL.HypoxiaactivatesaCa2+-permeablecationconductancesensitivetocarbonmonoxideandtoGsMTx-4inhumanandmousesickleerythrocytes.PLOSone.2010;5(1):1-，川解剖2005；13（4）：11-4，MaR.PluznickJL,SansomSC.Ionchannelsinmesangialcells:function,malfunction,orfiction.Physiology(Bethesda).2005;20(2):102-111TharpDL,WamhoffBR,WulffH,RamanG,CheongA,BowlesDK.LocaldeliveryoftheKCa3.1blocker,TRAM-34,preventsacuteangiosty-inducedcoronarysmoothmusclephenotypicmodulationandlimitsstenosis.AeteriosclerThrombvascularBiol.K?hlerR,KaisthaBP,WulffH.VascularKCa-channelsastherapeutictargetsinhypertensionandrestenosisdisease.ExpertOpinTherTargets.2010;14(2):143-55.AtagaKI,SmithWR,DeCastroLM,SwerdlowP,SaunthararajahY,CastroO,VichinskyE,KutlarA,OrringerEP,RigdonGC,StockerJW.EfficacyandsafetyoftheGardoschannelblocker,senicapoc(ICA-17043),inpatientswithsicklecellanemia.Blood2008;111:3991-7AlbaqumiM,SrivastavaS,liZ,ZhdnovaO,WulffH,ItaniO,WallaceDP,SkolnikEY.Kca3.1potassiumchannelarecriticalforcAMP-dependentchloridesecretionandcystgrowthinautosomal-dominantpolycystickidneydiseasekidneyInt2008;74(6):740-9GrgicI,KissEva,KaisthaBP,BuschC,KlossM,SautterJ,MüllerA,KaisthaA,SidtC,RamanG,WulffH,StrutzF,Gr?neHJ,K?hlerR,HoyerJ.Renalfibrosisisattenuatedby GrgicI,WulffH,EichlerI,FlothmannC,K?hlerR,HoyerJ.BlockadeofT-lymphocyteKCa3.1andKv1.3channelsasnovelimmunosuppressionstrategytopreventkidneyallograftrejection.TransntProc.2009;41(6):2601-原代培養(yǎng)系膜細胞和小管上皮細胞，隨機分為正常組、TGF-β1誘導組、TGF-1+TRAM-34TGF-β1+TRAM-85MTT法和流式細胞術(shù)觀察細胞活性Kca3.1通道在各組腎小管上皮細胞和Kca3.1通道開放頻率、Kca3.1通道開放頻率、電流幅值變化與細胞增殖的相關(guān)性；Kca3.1通道阻滯劑對腎間質(zhì)纖維化的干預(yù)作用。Kca3.1在正常與增殖的腎小管上皮細胞和系膜細胞上的表kca3.1kca3.1Kca3.1觀察Kca3.1通道在腎小管上皮細胞和系膜細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中的作用和相關(guān)分RT-Western-southern-β1+TRAM-85組。SD5分鐘。將大鼠轉(zhuǎn)移入超凈工作臺，取腰部切口迅速取出腎臟，置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中并除系膜細胞培養(yǎng)鑒定：腎皮質(zhì)切碎后依次經(jīng)目、 的培養(yǎng)瓶中，置濕化孵箱培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%滅活小牛的RPMI-1640，3～4天后腎小球貼壁率達80%左右作首次換液，20天左右可見細胞長滿瓶底。胰酶消化80100網(wǎng)篩上，用生理鹽水沖洗后收集置入離心管中。離心后用胰蛋白酶重懸沉淀，加入含有10%胎牛RPMI-1640中止消化后離心，棄上清。加入約3mlRPMI-1640懸浮沉淀，分離腎小管72小時后首次換液。約第6-7天細胞生長基本融合成單1FCSRPMI-164024hG010μg/mlTGF-β150μl72hMTT964h490nm標儀上OD值。（PIRT-PCRWestern-blotKca3.1mRNA24hTRizol1mlRNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)。由GenBank數(shù)據(jù)庫中獲得引物序列,設(shè)計Kca3.1及β-actin引物序列，采用PrimerExpresion2.0軟件(AppliedBiosystemInc)進行計算機輔助設(shè)計。Western-Blot(4).用免疫熒光結(jié)合激光共聚焦方法檢測kca3.1接種于培養(yǎng)瓶中的各組細胞，75%TritonX-1005min5%BSA30minkca3.12h,空白對照加抗體稀釋液；然后FITC30min，PBS，PI1min，吹干，甘油封片。洗滌，共聚焦熒光顯微鏡觀察細胞結(jié)構(gòu)，掃描圖像。由GenBank數(shù)據(jù)庫中獲得引物序列,設(shè)計Ⅰ、Ⅲ、IV型collgen、FN、α-SMA、FSP1β-actin引物序列，方法同前。PBS100μLMEKRas/Raf/MEK/ERKp38MAPKKca3.1均開放時間、平均關(guān)閉時間、膜電位、電流幅值的變化。然后再分別加入TRAM-34和Clampfit8.0UUO2ml。關(guān)腹。所有手術(shù)后大鼠單籠喂養(yǎng)，青霉素13萬單位腹腔注射抗，連續(xù)3天。手224hHEMassonRT-PCRwestern-blotIVcollgen、FN、α-SMA、FSP1kca3.1mRNA所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示，SPSSfor11.1，p＜0.05 RT-PCRWestern-Blot方法檢測Ⅰ、Ⅲ、IVcollgen、FN分泌和α-SMA、FSP1表達的變化細胞上RT-PCR和Western-blot檢測Kca3.1mRNA水平和蛋白表達細胞上用免疫熒光與激kca3.1組細胞中的分布細胞上膜片鉗全細胞技Kca3.1流幅值等的變化Kca3.1表達：RT-PCRwestern-blotkca3.1慢性腎臟病(CKD)患者每年以7%的速度在增加根據(jù)2007年國際腎臟病學會料,全世界有超過5億人患有不同的腎臟疾病,每年超過百萬人死于及并發(fā)的心腦血管疾病CKD已成為繼心腦血管病腫瘤之后的又一嚴重人類健康的疾病。,會造成了巨大的經(jīng)濟負擔。多數(shù)患者在發(fā)展為終末期腎病前可以得到正確的診斷,但遺憾的是目前還沒有切實有效的治療完全慢性腎臟疾病導致的腎功能進行性下降。目前得到認可的方法仍然是侯凡凡教授所提倡的血管緊張素系統(tǒng)angiotentem,RAS）的阻滯，但是該方法存在系統(tǒng)抑制劑應(yīng)用的副作用如血流kca3.1通道抑制劑TRM-34的類似物IC-17043用于防治鐮刀形紅細胞性貧血3看到了kca3.1a一個嶄新的治療領(lǐng)域。1項國家自然科學基金、51項西安交通大學創(chuàng)新基金的研究工作，且已取得一定成績，數(shù)十篇在國內(nèi)。同時本課題組成員均為多年從事扎實，動手能力強，掌握著本領(lǐng)域的研究動態(tài)。中的共同途徑”這一概念，國內(nèi)、外未見。Kca3.1在腎小管上皮細胞和系膜細胞上的表達、定位及其電生理學特性，國內(nèi)、外未有。首次從體內(nèi)、外不同角度觀察中電導鈣激活鉀通道kca3.1在腎小管上皮細胞和系膜細胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中的作用和可能分子信號機制，國內(nèi)、外未見。2011-01——2011-12Kca3.1通2012-01——2012-12Kca3.1通Kca3.1通道變化與細胞活性、α-SMA、FSP12013-01——2013- UUO明確中電導鈣激活鉀通道kca3.1kca3.13.kca3.1培養(yǎng)和博士生2-3名 形式在國際相關(guān)基礎(chǔ)和臨床腎臟病血液凈化學，以及國內(nèi)由中華醫(yī)學會承辦的中華系列上。2013年結(jié)題。化的保護作用并主持或參與國家自然科學基金1項(NO. 攻關(guān)項目資助5項（NO.2006K16-G15（1、(NO.2004K17-G29)（NO.2003K11-G7G7，kca3.1通道與骨髓間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化的研究，實驗正在進行中。 電活動的影響和定位研究，參與文章近十篇，并于2004年獲陜西省科學技術(shù)一等獎（全身麻醉中樞作用部位及相關(guān)基礎(chǔ)理論與臨床電生理學研究NO：04-1-028-R7電流的研究，數(shù)篇；采用激光捕獲技術(shù)、RT-PCR等初步研究鈣通道α1C亞單位等在心臟的表達。數(shù)篇實驗所需的一切設(shè)備。目前已擁有分子生物學、細胞培養(yǎng)室、免疫組織化學室、同位素室常規(guī)病理室已建立原位雜交PCR重組激光共聚焦膜片鉗等技術(shù)，多種實驗。該中心配備有教授、、博士及實驗等工作人員20余名，對在此驗中心和第四實驗動物部提供所需一般試劑均由西安交通大學醫(yī)學院分子生，女，1971年生，學歷，博士，。中華康復學會泌尿?qū)W分會委員。1996-1999年在第四攻讀，獨立完成導師徐禮鮮教授國家自然科學基金項目（NO.）的大部分內(nèi)容，參與近十篇，并于2004年獲陜西省科學技術(shù)一等獎（NO.04-1-028-R7全身麻醉中樞作用部位及相關(guān)基礎(chǔ)理論根素對急性腎缺血再灌注損傷有保護作用，已“葛根素對腎缺血-再灌注時腎小管2005，5（26：454—成（N0.,111210余篇，主編論著《血液凈化現(xiàn)代治療學（陜西科學技術(shù)）1部，在已第四學報，2007，28(20)：1859-1861，桂保松，王莉，，郭蕊軍，。不同血液凈化方式透析效果及對營養(yǎng)狀態(tài)的影響。西安交通大學學報(醫(yī)學版)，2006，27（4：414-416治療作用。臨床內(nèi)科，2006，23（5：322-324，周琳，，馬力群，張星映，，張紅利。黃芪當歸合劑對大鼠缺血性腎損傷的保護研究中國中西醫(yī)結(jié)合急救，2006，1（13：9—12c-FOS（醫(yī)學版，2005，5（26：454—456的保護研究中國中西醫(yī)結(jié)合急救，2002，4（9：194—196，20091（1：157-常39例。實用，2009，25（16：2673-2674，馬力群王莉張星映尿毒癥患者的抑郁狀態(tài)及其相關(guān)因素分析中國臨床康復，8（75758，2003；24（6：631-響臨床麻醉學，2000；16（2：83-85薛榮亮，，徐禮鮮。苯二氮罩類藥物對鼠中樞杏核仁神經(jīng)元電活動的影響中華麻醉440響.中華麻醉學,1998,18∶538-徐禮鮮，，，，。安氟醚和異氟醚吸入麻醉在間腦的定位研究中華醫(yī)學，1999；79（6：473-475響第四學報，1999；20（2：110-11331（NO.，科技進步二等獎各1項20余篇。主編、參編著作4部。已培養(yǎng)生7名。，已文章姚綱練，廖婷婷，周琳，，袁浩錚，桂保松。氧化苦參堿對慢性腎臟病患者MMP-9TIMP-1[J].（醫(yī)學版）,2008,29(1):84-廖婷婷，姚綱練，周琳，袁浩錚，，桂保松。氧化苦參堿對慢性腎臟病患者TGF-β1Col[J].（醫(yī)學版）,2008,29(2):233-姚綱練，寧寧，高登峰，桂保松。氧化苦參堿在大鼠腎間質(zhì)纖維化進程中的保護作用[J].西安，2007；28（5：325-，2006；28（4：267-，2002；1（：341姚綱練程秦娣馬力群張星映免疫吸附治療狼瘡性腎炎西安醫(yī)學學報20022（2電鏡、細胞培養(yǎng)、PCR等多種實驗技術(shù)?？蒲心芰姡莆湛蒲屑夹g(shù)和腎臟病領(lǐng)域11（已結(jié)題。目前已發(fā)， 已：，，2009，8（：1579王莉，，桂保松，歐妍，郭蕊軍。血液透析聯(lián)合血液灌流改善慢性腎功能不全脂質(zhì)代謝，200925（16：267-，24（4：21桂保松，王莉，王亮琪，郭蕊軍，周琳，。應(yīng)用新型枸櫞酸鹽濃縮抗凝血液透析液安全性評估。西安醫(yī)學學報，2002，23（1：79-82，，（生理學專業(yè)。2004年7月于第四獲醫(yī)學博士 年7月至今在第四基礎(chǔ)部生理學教研室任實驗師主要從事心臟生理方面研究。熟悉膜片鉗技術(shù)和動物實驗技術(shù)國內(nèi)外12篇在本課題中負責膜片鉗實驗。已文章2003;19(4):337-，，，，張鵬，槐勇，裴建明.U50,488H對大鼠血壓的影響及機制．醫(yī)學，郭海濤，，，，，裴建明.U50,488H對正常及缺氧心肌細胞L型鈣電流的作用.,2004;29(8):700-702SunX,MaS,ZangYM,LuSY,GuoHT,BiH,WangYM,MaH,MaXL,PeiJM.VasorelaxingeffectofU50,488Hinpulmonaryarteryandunderlyingmechanisminrats.LifeSci,2006Apr18;78(21):2516-22PeiJM,SunX,GuoHT,MaS,ZangYM,LuSY,BiH,WangYM,MaH,MaXL.depressespulmonarypressureinratssubjectedtochronichypoxia.JCardiolPharmacol,2006;47(4):594-8歐妍，女，主治醫(yī)師。2007前參與國家自然科學基金1項。近期4篇。在本實驗中承擔Western-Blot等已文章2005,25(11):1400-1404.OuY,NiuXL,RenFX,etal.Isolationofcardiacconductionsystemofratheartlasercapturemicrodissection.JouralofMedicalcollegesof.2005,20(6):327-歐妍，，等.激光捕獲技術(shù)在心房細胞定位分離中的應(yīng)用大學學報(醫(yī)學歐妍，，韓振華等.大鼠心臟結(jié)后延伸連接蛋白轉(zhuǎn)錄表達的定量研究第醫(yī)大學學寧寧，女，1980年10月生，主治醫(yī)師，在讀博士。1998-2005年在西安通大學醫(yī)學院七年制班學習，2005年畢業(yè)獲內(nèi)科學，同年留校工作。2009年起攻讀博士PCR金項目1項。參與5篇。在本實驗中承擔RT-PCR等實驗工作。已文章寧寧,桂保松,,馬力群,張星映,朱丹.甲磺酸帕珠沙星注射液治療急性細菌52例 國新藥2005;14(9):1190-1192朱丹,寧寧,高登峰,周琳,安雪芬,桂保松。維甲酸對腎間質(zhì)纖維化大鼠腎間質(zhì)結(jié)締組織生長因子中國血液凈化2006；529812005；26（5：457-鼠腎間質(zhì)巨噬細胞浸潤的影響西安交通大