實(shí)驗(yàn)4微生物與免疫學(xué)

第四次實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的生理、消毒滅菌、細(xì)菌的變異主要內(nèi)容：

一、示教：

1、細(xì)菌的生化反應(yīng)2、細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象3、細(xì)菌的變異4、色素5、消毒滅菌器材

6、錄像：微生物發(fā)展史二、操作：

1、藥敏實(shí)驗(yàn)2、劃線分離1、細(xì)菌的生化反應(yīng)（biochemicaltests）

糖發(fā)酵、H2S試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)

根據(jù)細(xì)菌具有不完全相同的酶，分解不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特點(diǎn)，用生物化學(xué)方法來(lái)鑒別細(xì)菌分解代謝（1）糖發(fā)酵（fermentationofsugars）Detectionofgasproduction⑵吲哚試驗(yàn)（IndoleProductionTest）細(xì)菌有色氨酸酶（tryptophanase）,能夠分解色氨酸（tryptophan）產(chǎn)生吲哚（indole），與Ehrlich’sreagent作用生成玫瑰吲哚而呈紅色.

IndoleProductionTest

⑶硫化氫試驗(yàn)（HydrogenSulfideTest）§細(xì)菌能夠分解含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫（H2S，

hydrogensulfide

），H2S可以還原鉛或鐵離子生成黑色的沉淀?！齑嗽囼?yàn)中所用培養(yǎng)基含有含硫氨基酸和FeSO4H2STestpositivenegative§細(xì)菌有尿素酶（urease）分解培養(yǎng)基中的尿素產(chǎn)生堿性的氨（NH3）⑷尿素酶試驗(yàn)（Ureapositiontest）§PH指示劑酚紅（PhenolRed）在堿性PH時(shí)變成深紅色Ureapositiontest2、色素菌苔（1）固體培養(yǎng)基中3、細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象菌落固體培養(yǎng)基1.觀察細(xì)菌的菌落2.分離純培養(yǎng)3.活菌計(jì)數(shù)、鑒定4.菌種保藏沉淀生長(zhǎng)混濁生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)（2）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)微生物基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究

沿穿刺線生長(zhǎng)生長(zhǎng)無(wú)鞭毛細(xì)菌混濁生長(zhǎng)有鞭毛細(xì)菌（3）半固體體培養(yǎng)基中觀察細(xì)菌的動(dòng)力半固體培養(yǎng)基觀察細(xì)菌的動(dòng)力、分類鑒定噬菌體效價(jià)滴定4、細(xì)菌的變異：

菌落（S型）菌落（R型）S－R變異H－O變異5、消毒滅菌器材煮鍋、高壓鍋、干烤箱、濾器、紫外線等操作：1.藥敏實(shí)驗(yàn)2.劃線分離材料：固體平皿培養(yǎng)基1塊/人，紙藥片；菌液（標(biāo)1、標(biāo)2；混合菌液）4人合作：

2人做劃線（混合細(xì)菌）

2人做藥敏（一人做標(biāo)1、另一人做標(biāo)2

）藥敏實(shí)驗(yàn)操作方法：劃滿平板培養(yǎng)基（不間斷）無(wú)菌取菌液1環(huán)（無(wú)菌操作?。┚炙膮^(qū)，每區(qū)各貼一種藥片倒放，貼上標(biāo)簽，寫上4人姓名、班級(jí)日期37℃孵箱培養(yǎng)2341記錄結(jié)果：測(cè)量抑菌環(huán)大小

藥物G＋菌G－菌青霉素慶大霉素氟哌酸安曲南表1：藥敏實(shí)驗(yàn)（測(cè)量單位：mm）劃線分離操作方法：無(wú)菌取菌液1環(huán)（注意無(wú)菌操作?。┗?區(qū)（占1/3），燒接種環(huán)3次將平皿轉(zhuǎn)900化2區(qū)（占1/3）燒接種環(huán)3次將平皿再轉(zhuǎn)900化3區(qū)（占1/