實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察

實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察第1頁/共15頁實(shí)驗(yàn)細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察第2頁/共15頁

細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察目的要求染色劑和染色的原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序思考題第3頁/共15頁目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片掌握細(xì)菌的一般染色發(fā)和革蘭氏染色進(jìn)一步熟練掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù)觀察和識別細(xì)菌細(xì)胞的特殊構(gòu)造第4頁/共15頁染色劑和染色原理Ⅰ微生物染色的基本原理，是借助物理和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。化學(xué)因素如：正負(fù)離子之間的相互吸引等染色劑染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型：1.酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。2.堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。3.中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。4.單純?nèi)旧哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudanb)的染料。第5頁/共15頁染色劑和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表：第6頁/共15頁實(shí)驗(yàn)材料涂片染色用的細(xì)菌培養(yǎng)物１.大腸桿菌（Escherichiacoli)24h的斜面培養(yǎng)物。

２.枯草桿菌（Bacillussubtilis)12—16h的斜面培養(yǎng)物。載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。示范片１.蘇云金芽孢桿菌（Bacillusthuringiensis）的芽孢；

２.膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillusmucillaginosus）的莢膜；３.枯草芽孢桿菌的鞭毛。第7頁/共15頁實(shí)驗(yàn)程序Ⅰ

（細(xì)菌染色的方法和步驟）細(xì)菌染色的方法:

１.單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。２.復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、細(xì)胞染色法等。染色技術(shù)的一般過程

涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗干燥鏡檢第8頁/共15頁實(shí)驗(yàn)程序Ⅱ

（簡單染色的方法和步驟）簡單染色法（一般染色法）１.菌種：牙垢細(xì)菌２.涂片３.干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。４固定５.染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色１分鐘。６.水洗：傾去染液，用自來水細(xì)流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。７干燥：空氣中自然干燥。８鏡檢：在油鏡下觀察牙垢中的各種細(xì)菌形態(tài)并繪圖。第9頁/共15頁實(shí)驗(yàn)程序Ⅲ

（革蘭氏染色的方法和步驟）革蘭氏（Gram）染色法1.涂片2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.

鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。第10頁/共15頁實(shí)驗(yàn)程序Ⅳ

（莢膜染色的方法和步驟）莢膜染色法（示范）：莢膜薄，易變形，因此在涂片過程中不能用加熱固定。1.

取斜面培養(yǎng)72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌涂片，自然干燥，自然固定。2.染色：在已自然晾干的涂面上，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色2min，以20%硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗1次，晾干。3.鏡檢：油鏡觀察示范片并繪圖（菌體紅色，莢膜無色）。第11頁/共15頁實(shí)驗(yàn)程序Ⅴ

（鞭毛染色的方法和步驟）菌液的制備及涂片：菌種應(yīng)預(yù)先連續(xù)傳代5—6代。1.接種：先在斜面底部加入0.5—1mL無菌水，取活化的枯草桿菌1—2環(huán)菌苔，接種于無菌水中，300C培養(yǎng)15—18h。2.制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數(shù)環(huán)，移入1mL與菌種同溫的無菌水中，在280C溫箱中保溫10min。3.鞭毛涂片：先用懸滴法觀察其運(yùn)動性，若運(yùn)動性很強(qiáng)，即可涂片。涂片后自然干燥、固定。染色：染色液必須新配制，涂片必須充分晾干才能染色。

1.先用剛過濾的鞭毛染色液A染7.5—8min左右。

2.傾去A液，再加鞭毛染色液B液染3—5min，水洗，自然干燥。３.用Ｃ液石炭酸