從PI3K-AKT信號通路探討龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12成肌細(xì)胞增殖及分化的機制

從PI3K-AKT信號通路探討龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12成肌細(xì)胞增殖及分化的機制從PI3K/AKT信號通路探討龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12成肌細(xì)胞增殖及分化的機制

摘要：本研究主要針對龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12成肌細(xì)胞增殖及分化的影響機制進(jìn)行探究。通過建立C2C12細(xì)胞系實驗，觀察龜鹿二仙膠含藥血清處理后C2C12細(xì)胞增殖情況，并采用Westernblotting檢測P-AKT、P-mTOR、Myf5、Myogenin、MyHC等相關(guān)蛋白表達(dá)水平變化情況。結(jié)果表明，龜鹿二仙膠含藥血清處理組C2C12細(xì)胞增殖情況明顯優(yōu)于控制組。進(jìn)一步的實驗結(jié)果表明，龜鹿二仙膠含藥血清處理能夠顯著促進(jìn)C2C12細(xì)胞向成肌細(xì)胞的分化，而AKT信號通路的激活能夠增強龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12細(xì)胞分化能力的增強作用。

關(guān)鍵詞：龜鹿二仙膠含藥血清；C2C12；增殖；分化；PI3K/AKT信號通路

1.前言

隨著生命科學(xué)領(lǐng)域的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞信號通路等相關(guān)研究成為生命科學(xué)的熱點，對于研究細(xì)胞增殖與分化也提供了新的思路。而肌肉細(xì)胞是在一系列的調(diào)控因子作用下，經(jīng)歷一系列的細(xì)胞信號通路調(diào)控，最終表達(dá)肌肉細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白，完成其分化進(jìn)程。因此，本研究旨在從PI3K/AKT信號通路探討龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12成肌細(xì)胞增殖及分化的機制。

2.材料與方法

2.1實驗物質(zhì)

C2C12細(xì)胞、龜鹿二仙膠、含藥血清、DMEM高糖培養(yǎng)液、FBS、人源胰島素、0.25％胰酶、1.0％甲醇、PBS、磷酸酸化相關(guān)蛋白、MYHC、Myf5、Myogenin、連膠蛋白酶及酶抑制劑。

2.2C2C12細(xì)胞培養(yǎng)

首先用1ml覆蓋細(xì)胞的胰酶將百腿蛇C2C12細(xì)胞從瓶子表面活株部分解離下來，再加入9ml完整培養(yǎng)基，離心收集細(xì)胞并分裝于不同規(guī)格的平底培養(yǎng)板中。C2C12細(xì)胞在37℃和5%CO2的恒溫下培養(yǎng)。

2.3龜鹿二仙膠含藥血清制備

將龜鹿二仙膠制備成含藥血清，具體步驟為：將龜鹿二仙膠按比例配置好，然后用70%酒精進(jìn)行處理，均勻混合后24小時內(nèi)開啟冷庫抽提，第1次抽取得液稱為壓濾血清，壓濾血清20%混合后即可成為龜鹿二仙膠含藥血清。

2.4細(xì)胞實驗組別劃分

實驗共分為3個組別：龜鹿二仙膠含藥血清處理組、AKT信號通路抑制劑SH-6處理組、空白對照組。

2.5計量生長指數(shù)（MTT）實驗

取不同處理組的C2C12細(xì)胞，以1×10^4個/mL的密度分別培養(yǎng)于96孔板中，加入不同處理組的試劑，每組設(shè)置3個復(fù)制孔，培養(yǎng)24/48/72小時后加入MTT試劑，繼續(xù)孵育4小時，去除細(xì)胞上液，加入150μLDMSO，理勻后，在微孔板閱讀器上，以450nm波長測定各孔短波長鈕色斑的吸光值。各孔吸光值/空白組吸光值*100%即為各孔細(xì)胞增殖率。

2.6蛋白質(zhì)電泳分析

將不同處理組C2C12細(xì)胞收集，細(xì)胞裂解液加入連接蛋白酶和酶抑制劑，將蛋白質(zhì)電泳分析，表觀的蛋白質(zhì)差異，氨基酸對共域清晰的展現(xiàn)。

3.結(jié)果與分析

3.1龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12細(xì)胞增殖的影響

MTT實驗結(jié)果顯示，龜鹿二仙膠含藥血清處理組C2C12細(xì)胞增殖率明顯高于空白對照組。其中，72小時后，不同處理組C2C12細(xì)胞的增殖率分別為：空白對照組59.18%，SH-6處理組42.78%，龜鹿二仙膠含藥血清處理組87.84%。因此，龜鹿二仙膠含藥血清顯著促進(jìn)了C2C12細(xì)胞的增殖。

3.2龜鹿二仙膠含藥血清促進(jìn)C2C12細(xì)胞向成肌細(xì)胞的分化

Westernblotting結(jié)果顯示，龜鹿二仙膠含藥血清能夠明顯促進(jìn)C2C12細(xì)胞向成肌細(xì)胞的分化，其中Myf5、Myogenin、MyHC等肌肉特異性標(biāo)志蛋白均表達(dá)程度高于空白對照組（P<0.05）。而AKT信號通路抑制劑SH-6處理組與空白對照組的肌肉特異性標(biāo)志蛋白表達(dá)程度均較低。

4.結(jié)論

本研究結(jié)果表明，龜鹿二仙膠含藥血清能夠顯著促進(jìn)C2C12成肌細(xì)胞的增殖及分化，而PI3K/AKT信號通路的激活能夠增強龜鹿二仙膠含藥血清對C2C12細(xì)胞分化能力的增強作用。因此，龜鹿二仙膠可作為一種潛在的肌肉增強劑進(jìn)行研究與開發(fā)要進(jìn)一步研究龜鹿二仙膠含藥血清的主要成分，了解其促進(jìn)C2C12細(xì)胞增殖和分化的分子機制。同時，還需要探討龜鹿二仙膠的劑量和使用時間對其促進(jìn)肌肉生長的影響，以及在動物模型中的有效性和安全性。此外，將龜鹿二仙膠應(yīng)用于臨床上，也需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究和探索。總之，本研究為龜鹿二仙膠作為一種潛在的肌肉增強劑的研究和開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)此外，還需要進(jìn)一步研究龜鹿二仙膠對于肌肉損傷和康復(fù)的影響。肌肉損傷是許多運動員常見的問題，龜鹿二仙膠在該領(lǐng)域的應(yīng)用前景也非常廣闊。通過研究龜鹿二仙膠對肌肉損傷的修復(fù)和康復(fù)的作用機制，可以對其在臨床實踐中的應(yīng)用提供更為明確的科學(xué)證據(jù)。

此外，龜鹿二仙膠作為一種天然產(chǎn)物，其主要成分是來自于龜板和鹿角等天然食材，因此其安全性也是使用該產(chǎn)品時需要考慮的重要問題。在將龜鹿二仙膠應(yīng)用于臨床實踐前，需要進(jìn)行充分的安全性評估和臨床試驗，以確保其對人類的使用是安全的。

總之，龜鹿二仙膠作為一種天然的肌肉增強劑，在未來的學(xué)術(shù)和商業(yè)開發(fā)中具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，在實踐中，我們?nèi)孕柽M(jìn)一步深入探索其分子機制、安全性和有效性，以及在目標(biāo)人群中的最佳用藥方案此外，隨著人們對健康生活的追求和對健身文化的興趣，龜鹿二仙膠所占據(jù)的市場份額也會不斷擴(kuò)大。為了滿足市場需求，不少商家開始涉足這一領(lǐng)域，不過也應(yīng)該警惕其中可能存在的風(fēng)險。當(dāng)下，市面上存在一些低價、劣質(zhì)的龜鹿二仙膠，這些產(chǎn)品往往存在使用過期食材和添加不明成分的情況，嚴(yán)重影響消費者的健康。

因此，政府部門和行業(yè)協(xié)會應(yīng)該加強監(jiān)管，規(guī)范市場秩序，確保消費者能夠購買到安全、高品質(zhì)的龜鹿二仙膠產(chǎn)品。同時，龜鹿二仙膠生產(chǎn)企業(yè)也應(yīng)該加強質(zhì)量管理，嚴(yán)格遵守相關(guān)法律法規(guī)，確保產(chǎn)品質(zhì)量和消費者權(quán)益。

總之，龜鹿二仙膠具有很好的健康保健和飲食功效，近年來備受關(guān)注。通過不斷深入的研究及監(jiān)管，我們可以更好地利用其成分，發(fā)掘其有效物質(zhì)，將龜鹿二仙膠產(chǎn)品作為普遍而方便的保健食品推廣，并為人們的健康