尿培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的學(xué)習(xí)課件

尿培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的學(xué)習(xí)課件第1頁/共30頁臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范第2頁/共30頁臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范尿路感染尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)本驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果觀察和報(bào)告第3頁/共30頁尿路感染概念：綜合癥分類：上尿路感染（如腎盂腎炎）下尿路感染（如膀胱炎）男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時(shí)感染也很常見感染人群：各個(gè)年齡段，好發(fā)于女性，男：女之比為1:10。第4頁/共30頁尿路感染癥狀：發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者的年齡和健康狀況不同而異。診斷方法：細(xì)菌學(xué)檢查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同（表1）第5頁/共30頁表1尿路感染的原因及常見病原菌感染原因主要致病菌感染特點(diǎn)上行感染泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染血行感染直接感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、腸桿菌、普羅威登菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、腸球菌葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌、沙門菌大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌主要為腸道菌群或會(huì)陰部細(xì)菌逆行感染，多見于女性，多為單一細(xì)菌感染，以大腸埃希菌感染最常見多見于留置導(dǎo)尿管、腎盂造瘺術(shù)、尿路結(jié)石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受損的患者，容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認(rèn)為標(biāo)本污染發(fā)生于菌血癥的患者，血液中的細(xì)菌通過血流進(jìn)入腎臟引起感染，比較少見外傷或腎周圍器官發(fā)生感染時(shí)，細(xì)菌直接侵入腎臟引起感染，非常少見第6頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送1.采集指征：（1）有典型的尿路感染癥狀；（2）肉眼膿尿或血尿；（3）尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽性；（4）不明原因的發(fā)熱，無其他局部癥狀；（5）留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；（6）膀胱排空功能受損；（7）泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前。第7頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送2.采集方法：未使用抗生素之前，注意避免污染（1）清潔中段尿：晨尿最好，睡前少飲水，起床后用肥皂水清洗會(huì)陰部，女性應(yīng)用手分開大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排去，中段尿約10～20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。簡(jiǎn)單、易行，最常用很容易污染，應(yīng)囑咐患者正確留取。第8頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送2.采集方法：（2）恥骨上膀胱穿刺：使用無菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”有一定的痛苦，患者難以接受主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集第9頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送2.采集方法：（3）直接導(dǎo)尿：按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰局部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染不提倡使用第10頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送2.采集方法：（4）小兒收集包：無自控能力的小兒很難避免會(huì)陰部菌群污染產(chǎn)生假陽性所以只有在檢驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)才有意義。如果檢驗(yàn)結(jié)果為陽性，應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行分析必要時(shí)可使用恥骨上膀胱穿刺或?qū)蚍羧∧蛞哼M(jìn)行復(fù)檢。第11頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送2.采集方法：（5）留置導(dǎo)尿管:先消毒導(dǎo)尿管外部，按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液防止混入消毒劑注意不能從尿液收集袋中采集尿液。第12頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送3.采集容器：（1）應(yīng)由惰性材料制成；（2）潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏；（3）不含防腐劑和抑菌劑；（4）廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)>50ml（5）盒蓋易于開啟。第13頁/共30頁一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送4.標(biāo)本運(yùn)送：及時(shí)送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得超過2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時(shí)間不得超過8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。第14頁/共30頁二、標(biāo)本驗(yàn)收1.申請(qǐng)單驗(yàn)收：要求除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時(shí)間、收集方式、是否已使用抗生素等，申請(qǐng)單是否填寫完整。2.標(biāo)本驗(yàn)收：（1）標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請(qǐng)單相符；（2）標(biāo)本容器有無溢漏、滲出，是否加蓋；（3）送檢時(shí)間是否超過規(guī)定的標(biāo)本保存時(shí)間。第15頁/共30頁二、標(biāo)本驗(yàn)收3.不合格標(biāo)本處理：（1）對(duì)申請(qǐng)單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)師取得聯(lián)系；（2）對(duì)標(biāo)識(shí)不符、送檢容器不合格、送檢時(shí)間超過規(guī)定時(shí)間的標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。第16頁/共30頁三、實(shí)驗(yàn)室檢查1.直接涂片檢查：無需常規(guī)進(jìn)行涂片檢查。對(duì)于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本：可用無菌吸管吸取尿液5～10ml置無菌試管中，3000～4000r/min離心30min，傾去上清液，取沉渣涂片，行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。第17頁/共30頁三、實(shí)驗(yàn)室檢查2.細(xì)菌培養(yǎng)：（1）普通培養(yǎng)：將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)分別取尿液1μl涂抹接種血平板和麥康凱平板（或中國藍(lán)平板），35～37℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)10μl接種量。（2）特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶颖?，加種一塊巧克力平板，置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)無需做定量培養(yǎng)，可將標(biāo)本離心后取尿沉渣進(jìn)行培養(yǎng)，以提高陽性率。第18頁/共30頁三、實(shí)驗(yàn)室檢查2.細(xì)菌培養(yǎng)（3）普通培養(yǎng)18～24h無菌生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。第19頁/共30頁四、結(jié)果觀察和報(bào)告1.結(jié)果觀察和評(píng)價(jià)：（1）菌落計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，采用1μl接種量者，將菌落數(shù)乘以103

；采用10μl接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102

，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。如菌落生長(zhǎng)過多無法精確計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告>105CFU/ml。第20頁/共30頁四、結(jié)果觀察和報(bào)告1.結(jié)果觀察和評(píng)價(jià)：（2）結(jié)果評(píng)價(jià)：正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染，而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)>105CFU/ml可能為感染;<5×104CFU/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估。第21頁/共30頁表2不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)本來源菌落數(shù)CFU/ml結(jié)果評(píng)價(jià)清潔中段尿?qū)驉u骨上膀胱穿刺<5×104(5~10)×104>5×105>103任意數(shù)目無意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和細(xì)菌鑒定、藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長(zhǎng)無意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng)，其中某種菌落數(shù)≥105者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無意義，報(bào)告標(biāo)本污染3種以內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)都有意義，對(duì)2種主要生長(zhǎng)菌需進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無意義，報(bào)告標(biāo)本污染都有意義，所有細(xì)菌均需做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)第22頁/共30頁四、結(jié)果觀察和報(bào)告2.陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：培養(yǎng)48h無菌落生長(zhǎng)，即為陰性。接種1μl尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)<103CFU/ml”；接種10μl尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)<102CFU/ml”。第23頁/共30頁四、結(jié)果觀察和報(bào)告3.陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：無意義的陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：純培養(yǎng)報(bào)告“革蘭×性×菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)：××CFU/ml”；混合菌生長(zhǎng)報(bào)告“革蘭×性×菌和革蘭×性×菌混合生長(zhǎng)”。有意義的陽性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：報(bào)告菌落計(jì)數(shù)、細(xì)菌種屬名稱及標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。第24頁/共30頁附錄:1.關(guān)于尿培養(yǎng)標(biāo)本的接種：細(xì)菌污染，定量接種、合理評(píng)價(jià)定量接種的方法:直接劃線法和傾注平板法。直接劃線接種法的關(guān)鍵:是應(yīng)保證接種量的準(zhǔn)確性，可使用1μl或10μl的定量接種環(huán)，方法是將接種環(huán)校準(zhǔn)后，以垂直方向持拿，使環(huán)圈剛好浸入尿液表面（不可使尿液碰到環(huán)上方的環(huán)柄），取尿液進(jìn)行接種。無定量接種環(huán)的實(shí)驗(yàn)室，可使用無菌的5μl微量移液器吸取尿液加入平板，再用接種環(huán)劃線接種，將平板菌落數(shù)乘以200，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。第25頁/共30頁附錄：2.關(guān)于尿培養(yǎng)檢驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇：沒有一種平板可以適合所有尿道病原體的生長(zhǎng)，所以應(yīng)該根據(jù)標(biāo)本來源及臨床對(duì)目標(biāo)菌的要求選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。普通培養(yǎng)推薦使用血平板和麥康凱（或中國藍(lán)）平板，不能以血平板代替麥康凱或中國藍(lán)平板。第26頁/共30頁附錄：3.關(guān)于尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)：菌落計(jì)數(shù)>105CFU/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，過松，濫用與浪費(fèi)，過嚴(yán)，漏診。與臨床醫(yī)師密切合作，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)：尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對(duì)菌落數(shù)<5×104CFU/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無意義的陽性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)師聯(lián)系后，第27頁/共30頁附錄：決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)予以注意：（1）使用抗生素治療，細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制；（2）尿液稀釋，尿比重<1.003，營養(yǎng)成分減少，細(xì)菌生長(zhǎng)遲緩；（3）尿pH<5.0或>8.5，細(xì)菌生長(zhǎng)受阻；（4）尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；（5）尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)少；（6）不同種類的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營養(yǎng)要求不同，菌落計(jì)數(shù)有所不同，有文獻(xiàn)推