細(xì)胞培養(yǎng)基培訓(xùn)資料比較全面可以有個(gè)初步了解詳解演示文稿

細(xì)胞培養(yǎng)基培訓(xùn)資料比較全面可以有個(gè)初步了解詳解演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有100頁\編輯于星期日（優(yōu)選）細(xì)胞培養(yǎng)基培訓(xùn)資料比較全面可以有個(gè)初步了解現(xiàn)在是2頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞學(xué)簡(jiǎn)介什么是細(xì)胞？

能進(jìn)行獨(dú)立繁殖的有膜包圍的生物體的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。一般由質(zhì)膜、細(xì)胞質(zhì)和核（或擬核）構(gòu)成，是生命活動(dòng)的基本單位。現(xiàn)在是3頁\一共有100頁\編輯于星期日維持細(xì)胞體外生存的必要條件嚴(yán)格的無菌無毒環(huán)境體外培養(yǎng)的細(xì)胞缺乏對(duì)微生物和有毒物質(zhì)的防御能力適合的營(yíng)養(yǎng)條件高質(zhì)量的細(xì)胞培養(yǎng)基和血清是細(xì)胞培養(yǎng)成功的基本條件適宜的生存環(huán)境恒定適宜的溫度、pH值、氣相環(huán)境（二氧化碳的濃度）現(xiàn)在是4頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)設(shè)備CO2培養(yǎng)箱細(xì)菌霉菌培養(yǎng)箱過濾設(shè)備烘箱高壓滅菌設(shè)備水浴鍋磁力攪拌器離心機(jī)

酸缸液氮罐

精密天平倒置顯微鏡

pH計(jì)酶標(biāo)儀

電導(dǎo)率儀滲透壓儀

細(xì)胞計(jì)數(shù)板超凈臺(tái)培養(yǎng)皿等相關(guān)耗材生物安全柜現(xiàn)在是5頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)流程

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)流程現(xiàn)在是6頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)流程

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)流程現(xiàn)在是7頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基組要成分①基本培養(yǎng)基②血清③細(xì)胞培養(yǎng)試劑（抗生素細(xì)胞解離，生長(zhǎng)因子等）④平衡鹽溶液現(xiàn)在是8頁\一共有100頁\編輯于星期日培養(yǎng)基必須的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)水超純水、細(xì)胞培養(yǎng)注射用水（本公司所采用的為細(xì)胞培養(yǎng)注射

用水）氨基酸必需氨基酸：組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸。

條件性必需氨基酸：谷氨酰胺、精氨酸、半胱氨酸、酪氨酸非必需氨基酸：丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨

酸、絲氨酸。維生素生物合成的輔助因子，機(jī)體自身不能合成：如生物素、葉酸、核黃素、

維生素B12。血清

提供額外的營(yíng)養(yǎng)以及提供生長(zhǎng)、附著因子pH指示劑

可使細(xì)胞產(chǎn)生類似于苛爾蒙的反應(yīng)，在做苛爾蒙的研究或者生產(chǎn)中應(yīng)去

掉酚紅指示劑，避免產(chǎn)生干擾?，F(xiàn)在是9頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典培養(yǎng)基的應(yīng)用BME(BasalMediumEagle):

是由Eagle發(fā)明的，是最簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基，只有11種氨基酸和鹽及一些維生素。最先用于培養(yǎng)小鼠的L細(xì)胞和人類HeLa細(xì)胞，現(xiàn)在廣泛用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)EMEMorMEM(Eagle’sMinimumEssentialMedium):

是BME的升級(jí)版，氨基酸濃度是BME的兩倍，適用于更多的細(xì)胞現(xiàn)在是10頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典培養(yǎng)基應(yīng)用DMEM(Dulbecco’sModificationofEagle’sMedium)

是Dulbecco改進(jìn)的MEM.氨基酸和維生素濃度是BME的4倍.最先葡萄糖的濃度是1g/L，稱為低糖DMEM,后來增加到4.5g/L，稱為高糖DMEM，廣泛用于各種細(xì)胞培養(yǎng)?，F(xiàn)在是11頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典培養(yǎng)基應(yīng)用M199(Medium199):

是一種比較古老的，配方復(fù)雜的，含有核苷酸，核酸等成分的培養(yǎng)基。最初用于雞胚肌細(xì)胞的培養(yǎng)，還用于各種細(xì)胞的維持和病毒生產(chǎn)現(xiàn)在是12頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典培養(yǎng)基應(yīng)用RPMI1640(RoswellParkMemorialInstitute#1640):

是McCoy’s5A的改進(jìn)版，含有高濃度的肌醇。廣泛用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。如人類白細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞等血液來源的細(xì)胞現(xiàn)在是13頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用Ham’sF10(Ham’sNutrientMixtureF10):

由Ham發(fā)明，用于人類2倍體細(xì)胞和倉鼠細(xì)胞的培養(yǎng)。Ham’sF12(Ham’sNutrientMixtureF12):F10的升級(jí)版，含有更多的維生素，肌醇，氨基酸。用于培養(yǎng)大鼠，兔子和雞胚細(xì)胞，還用于中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞以及肺細(xì)胞的培養(yǎng)現(xiàn)在是14頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典細(xì)胞培養(yǎng)基的應(yīng)用IMDM

是由Iscove改良的Dulbecco培養(yǎng)基，較DMEM增加了幾種非必需氨基酸和一些維生素，IMDM為高葡萄型培養(yǎng)基，可用于雜交瘤細(xì)胞的篩選培養(yǎng)，也可作為無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基現(xiàn)在是15頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用DMEM/F12

是DMEM和F12按1:1比例配制而成，是神經(jīng)生物學(xué)最常用的基本培養(yǎng)基，也是無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)液，IMDM非常適合于迅速增殖，高密度細(xì)胞的培養(yǎng)，包括Jurkat細(xì)胞，COS-7，和巨噬細(xì)胞。IMDM支持小鼠B淋巴細(xì)胞，來自骨髓的造血組織，脂多糖刺激的B細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞，和各種雜交細(xì)胞的生長(zhǎng)。與血清一起使用時(shí)，它支持多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，包括骨髓，雜交瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng).現(xiàn)在是16頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用McCoy5A

是McCoy等人在1959年研制，是一種專門為培養(yǎng)肉瘤細(xì)胞研制的培養(yǎng)基，除適用于原代細(xì)胞、組織活檢細(xì)胞和淋巴細(xì)胞培養(yǎng)外，還適用于較難培養(yǎng)的細(xì)胞，如皮膚，牙齦，睪丸，小鼠腎臟，大網(wǎng)膜，腎上腺，肺，脾，大鼠胚胎和其他組織的原代生長(zhǎng)，以及活體組織的體外移植。現(xiàn)在是17頁\一共有100頁\編輯于星期日經(jīng)典培養(yǎng)基用途匯總MEM:僅含12種必須氨基酸，谷氨酰胺和8種維生素廣泛應(yīng)用于細(xì)胞系的培養(yǎng)，是DMEM的前身。BME：刪除了一些必須氨基酸，增添了一些非必須氨基酸。DMEM:2xMEM的成分，有高糖、低糖之分，廣泛用于哺乳細(xì)胞的培養(yǎng)。RPMI1640:最初針對(duì)淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)而設(shè)計(jì)M199:廣泛用于病毒學(xué)，疫苗生產(chǎn)和組織移植培養(yǎng)。Ham'sFmixs：可在血清含量較少的情況下培養(yǎng)細(xì)胞?，F(xiàn)在是18頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基形式（按外觀）即用型(1X)液體培養(yǎng)基:直接用培養(yǎng)基濃縮液(10Xor50X):用前需要稀釋成1×

干粉培養(yǎng)基DPM(DryPowderMedia):

需要在水中溶解,加入碳酸氫鈉,調(diào)pH值,然后過濾才可以使用.

高級(jí)顆粒技術(shù)培養(yǎng)基AGT(AdvancedGranulationTechnologyTM):

比DPM形式的培養(yǎng)基更容易溶解的顆粒狀的培養(yǎng)基.

AGT是完全為工業(yè)產(chǎn)量的用戶開發(fā)的,pH提前調(diào)好，所有的成分都提前混合好,只需要加水溶解和過濾。現(xiàn)在是19頁\一共有100頁\編輯于星期日干粉培養(yǎng)基與液體即用型培養(yǎng)基對(duì)比現(xiàn)在是20頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基類型（按成分）傳統(tǒng)培養(yǎng)基要添加血清(5-10%)的培養(yǎng)基高級(jí)培養(yǎng)基（Advancedmedium）濃縮了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和其他成分的培養(yǎng)基,只需要<2%的血清(減少50-90%)無血清培養(yǎng)基(無血清培養(yǎng)基/無蛋白培養(yǎng)基/化學(xué)定義的培養(yǎng)基)使用時(shí)無須再添加血清,主要用于生物產(chǎn)品生產(chǎn),干細(xì)胞研究等現(xiàn)在是21頁\一共有100頁\編輯于星期日專用培養(yǎng)基針對(duì)角質(zhì)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、造血細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、CHO細(xì)胞、293細(xì)胞、各類昆蟲細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、羊水細(xì)胞等的無血清培養(yǎng)基現(xiàn)在是22頁\一共有100頁\編輯于星期日（SFM,PFM和CDM培養(yǎng)基）的區(qū)別Serum-FreeMedium（SFM）成分更加清晰消除因血清批次不同而帶來的不確定性–保持實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性易于純化和下游處理優(yōu)化特殊細(xì)胞及其功能的培養(yǎng)條件越來越多的無血清培養(yǎng)基用非動(dòng)物/人來源的原料制造有利于精確闡述細(xì)胞功能提高生產(chǎn)力更好控制生理反應(yīng)專門針對(duì)角質(zhì)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、造血細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、CHO細(xì)胞、293細(xì)胞、各類昆蟲細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、羊水細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基無需加入血清可能包含降解的蛋白或者蛋白塊蛋白含量保持在易于純化的最小狀態(tài)優(yōu)化特殊細(xì)胞培養(yǎng)條件現(xiàn)在是23頁\一共有100頁\編輯于星期日Protein-FreeMedia(PFM)

無蛋白(不同的廠商有不同的說明)包含起源于動(dòng)物或者植物的不明確的提取物Chemically-DefinedMedia(CDM)

無蛋白和不明確的成分所有的成分都有一個(gè)明確的結(jié)構(gòu)，可以提供性能一致的產(chǎn)品,減少批次間的差別現(xiàn)在是24頁\一共有100頁\編輯于星期日

培養(yǎng)基的保存與運(yùn)輸干粉：24個(gè)月，2～8℃避光保存，可在室溫情況下運(yùn)輸.液體：12個(gè)月，所有的培養(yǎng)基都必須在2～8℃，避光保存，不能冷凍.現(xiàn)在是25頁\一共有100頁\編輯于星期日血清產(chǎn)品簡(jiǎn)介

血清－血清的作用提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。（如氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核算衍生物、胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素、類固醇激素、纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等）提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激

素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。起酸堿度緩沖液作用。提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害?，F(xiàn)在是26頁\一共有100頁\編輯于星期日動(dòng)物血清的種類.胎牛血清(FBS):fetalbovineserum直接胚胎心臟取血，胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。.新生牛血清(NBS):newborncalfserumornewbovineserum

出生小于于十四天.小牛血清（CS)：calfserum

出生小于一年.捐獻(xiàn)血清:特殊飼養(yǎng)的，專門用來進(jìn)行血清提取的牛.其他血清:

horse,chicken,goat,lamb（羊）,porcine（豬）,rabbit現(xiàn)在是27頁\一共有100頁\編輯于星期日血清的缺點(diǎn)

1、對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)抑制另一類細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。

2、血清含有對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。

3、動(dòng)物個(gè)體不同，血清產(chǎn)地、批號(hào)不同，每批質(zhì)量差異甚大，其成分不能保持一致。

4、取材中可能帶入支原體、病毒，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。

5、血清的使用使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難，其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成。大規(guī)模生產(chǎn)中，血清來源越來越困難，價(jià)格昂貴，是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。

現(xiàn)在是28頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基相關(guān)試劑平衡鹽及緩沖液細(xì)胞消化試劑pH調(diào)節(jié)試劑營(yíng)養(yǎng)添加劑抗生素細(xì)胞凍存液現(xiàn)在是29頁\一共有100頁\編輯于星期日平衡鹽及緩沖溶液PBSPBS是生物學(xué)研究和組織培養(yǎng)中常用的一種緩沖溶液。例如，細(xì)胞或組織的運(yùn)輸，細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)的稀釋，溶液的配制，容器，包括細(xì)胞的清洗等，但不能用于細(xì)胞及組織塊的消化。DPBS配方中無鈣鎂離子，不會(huì)中和胰酶及EDTA活性，用于貼壁和團(tuán)塊細(xì)胞的消化解離，細(xì)胞解離前的清洗?，F(xiàn)在是30頁\一共有100頁\編輯于星期日HBSSHBSS可用于多種細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，如細(xì)胞解離前的清洗，細(xì)胞或組織的運(yùn)輸，細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)的稀釋，溶液的配制等。含鈣和鎂的HBSS配方一般用作運(yùn)輸培養(yǎng)基或試劑配制，無鈣鎂的HBSS用于細(xì)胞解離前的清洗，不會(huì)降低胰酶的活性現(xiàn)在是31頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞消化試劑0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

胰蛋白酶是一種胰腺絲氨酸蛋白酶，具有底物特異性，解離消化作用強(qiáng)，被用于組織培養(yǎng)中貼壁細(xì)胞的傳代。但細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中存在的二價(jià)陽離子，如鈣和鎂等可以抑制解離。EDTA可螯合二價(jià)離子，從而增強(qiáng)胰蛋白酶的作用?，F(xiàn)在是32頁\一共有100頁\編輯于星期日影響胰酶消化細(xì)胞的因素胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca2+、Mg2+離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH8.0,溫度37℃其作用能力最強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。現(xiàn)在是33頁\一共有100頁\編輯于星期日臺(tái)盼藍(lán)試劑臺(tái)盼藍(lán)染色是一種廣為接受的用于死細(xì)胞染色法。臺(tái)盼藍(lán)被正常的活細(xì)胞排斥

而能被喪失活性的細(xì)胞吸收，并呈現(xiàn)藍(lán)色。

現(xiàn)在是34頁\一共有100頁\編輯于星期日pH調(diào)節(jié)試劑NaHCO3（7.5%）碳酸氫鈉是常用的緩沖體系的一部分，用來維持培養(yǎng)環(huán)境中生理pH值之間,大多數(shù)細(xì)胞適宜在條件下生長(zhǎng)，為了維持培養(yǎng)環(huán)境的Ph，多采用在培養(yǎng)基中加入碳酸鹽等緩沖劑的方法，細(xì)胞生長(zhǎng)過程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)，不斷產(chǎn)生CO2，溶解的CO2與HCO3-達(dá)到平衡，從而使培養(yǎng)基的pH降低，在溶液中存在如下反應(yīng)：H2O+CO2←→H2CO3←→H++HCO3-抵消二氧化碳產(chǎn)生的作用可通過增加碳酸鹽的濃度來解決：NaHCO3←→Na++HCO3-HCO3-的增加可使H2O+CO2←→H2CO3←→H++HCO3-的反應(yīng)向左邊進(jìn)行直至pH在7.4左右達(dá)到平衡?，F(xiàn)在是35頁\一共有100頁\編輯于星期日Hepes（1M)

HepesBuffer是用于細(xì)胞培養(yǎng)基中的一種生物緩沖劑，在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的pH值，Hepes(25mM)可以作為碳酸氫鹽緩沖液的替代品，或者作為碳酸氫鹽緩沖液的添加物（10-15mM），以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制.現(xiàn)在是36頁\一共有100頁\編輯于星期日幾種平衡鹽系統(tǒng)中NaHCO3、Hepes、CO2的用量

現(xiàn)在是37頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)添加劑BSA（V）（7.5%）牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin,BSA）是牛血清中的一種球蛋白，又稱第五組分（需要注意的是，第五組分并不是BSA的一種組份，而是EdwinJ.Cohn教授早期從血液中通過特定的分離技術(shù)得到5種組份，其中第五種就是白蛋白），CAS號(hào)為9048-46-8，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在westernblot中作為封閉試劑。血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用。在動(dòng)物細(xì)胞無血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用?，F(xiàn)在是38頁\一共有100頁\編輯于星期日牛血清白蛋白提取工藝現(xiàn)在是39頁\一共有100頁\編輯于星期日牛血清白蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用以流感病毒為例作為流感病毒分離培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)添加劑替代牛血清添加牛血清白蛋白生長(zhǎng)添加劑不會(huì)影響TPCK-胰酶促轉(zhuǎn)染的效率，保持了TPCK-胰酶的活性，促進(jìn)病毒的復(fù)制，同時(shí)對(duì)后期的血凝及血凝試驗(yàn)不會(huì)產(chǎn)生干擾，人和動(dòng)物血清中存在非特異性血凝抑制素，它們是游離在血清中類似病毒受體的唾液酸殘基，能與病毒血凝素分子上的受體結(jié)合，會(huì)競(jìng)爭(zhēng)抑制病毒與紅血球的結(jié)合，因而造成假陽性，因此HI試驗(yàn)必須用受體破壞酶處理血清。

現(xiàn)在是40頁\一共有100頁\編輯于星期日牛血清白蛋白使用注意事項(xiàng)牛血清白蛋白（7.5%）保存于2-8℃，避免與強(qiáng)氧化劑及強(qiáng)酸接觸。在流感病毒分離培養(yǎng)時(shí),牛血清白蛋白（7.5%）用量為每500ml細(xì)胞培養(yǎng)基添加

12.5ml，終濃度0.2%?，F(xiàn)在是41頁\一共有100頁\編輯于星期日抗生素產(chǎn)品青鏈霉素慶大霉素兩性霉素B慶大霉素、兩性霉素B青鏈霉素、兩性霉素B現(xiàn)在是42頁\一共有100頁\編輯于星期日青鏈霉素青霉素（10000U/ml）鏈霉素（10000ug/ml）青鏈霉素是廣譜抑菌劑，對(duì)革蘭氏陰性和陽性微生物有抗菌性，青霉素影響細(xì)菌細(xì)胞壁合成的終止步驟，在轉(zhuǎn)肽反應(yīng)步驟抑制多肽鏈的延伸，青鏈霉素的有效濃度為100u/ml；鏈霉素為100ug/ml1ml青鏈霉素試劑可添加100ml細(xì)胞培養(yǎng)基中使用保存條件：-20℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融現(xiàn)在是43頁\一共有100頁\編輯于星期日慶大霉素慶大霉素（0.5mg/ml）or（50mg/ml）慶大霉素是一種廣譜細(xì)菌培養(yǎng)抗生素，在抗菌濃度下，它對(duì)病毒和哺乳細(xì)胞沒有毒性，對(duì)革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌以及支原體有抗菌活性，被用于長(zhǎng)期病毒和組織培養(yǎng)研究。主要是通過與50S核糖體亞基的L6蛋白結(jié)合，干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)合成，它的有效濃度是5ug/ml，在大于300ug/ml時(shí)具備細(xì)胞毒性。每ml慶大霉素試劑添加100ml細(xì)胞培養(yǎng)基中使用保存條件：15-30℃現(xiàn)在是44頁\一共有100頁\編輯于星期日兩性霉素B兩性霉素B(250ug/ml）兩性霉素B溶液是一種對(duì)真菌有抗菌活性的抗生素。將其作為一種抗真菌、抗酵母菌以及抗霉菌制劑使用，它通過與固醇結(jié)合、干擾敏感真菌的細(xì)胞膜滲透性。通常的有效濃度是2.5ug/ml。每ml兩性霉素B試劑可添加100ml細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品。保存條件：-20℃，避光保存，避免反復(fù)凍融

現(xiàn)在是45頁\一共有100頁\編輯于星期日慶大霉素、兩性霉素B慶大霉素（0.5mg/ml）、兩性霉素B（250ug/ml）慶大霉素/兩性霉素B溶液針對(duì)革蘭氏陰性和陽性菌以及真菌和酵母菌具備廣譜抗菌活性，它常被作為抗真菌、抗酵母菌、抗霉菌或抗細(xì)菌制劑。每ml慶大霉素、兩性霉素B試劑可添加100ml細(xì)胞培養(yǎng)基中使用保存條件：-20℃避免反復(fù)凍融，避光保存現(xiàn)在是46頁\一共有100頁\編輯于星期日青鏈霉素、兩性霉素B青霉素（10000u/ml）鏈霉素（10000ug/ml）兩性霉素B(25ug/ml）青霉素/鏈霉素/兩性霉素B針對(duì)革蘭氏陰性和陽性菌以及真菌和酵母菌具備廣譜抗菌活性，它常被作為抗真菌、抗酵母菌、抗霉菌或抗細(xì)菌制劑。每ml青鏈霉素、兩性霉素B可添加于100ml細(xì)胞培養(yǎng)基中使用保存條件：-20℃，避光保存，避免反復(fù)凍融現(xiàn)在是47頁\一共有100頁\編輯于星期日關(guān)于抗生素使用的建議由于細(xì)菌和酵母等的污染很容易觀察到，污染細(xì)胞的及時(shí)清理就大大減少了支原體、病毒的污染機(jī)會(huì)。潛在的支原體、病毒的污染會(huì)帶來很大的危害。這些微生物的存在會(huì)影響細(xì)胞的理化性質(zhì)，從而使研究者得到錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在嚴(yán)重的情況下，甚至使一個(gè)實(shí)驗(yàn)室數(shù)年的研究白白浪費(fèi)。由于過濾技術(shù)的提高和超凈臺(tái)質(zhì)量的改進(jìn)，在規(guī)范的細(xì)胞培養(yǎng)操作過程中引進(jìn)污染的機(jī)會(huì)已經(jīng)被大大降低了。所以比較合理的建議是，在常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)中不要使用抗生素。只有在培養(yǎng)污染源很多（比如組織培養(yǎng)），或者培養(yǎng)非常珍貴的細(xì)胞株時(shí)才使用抗生素。現(xiàn)在是48頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞凍存液細(xì)胞凍存液由相應(yīng)培養(yǎng)基、特級(jí)胎牛血清和細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)DMSO（二甲基亞砜）組成，經(jīng)過改良和優(yōu)化，產(chǎn)品含符合細(xì)胞凍存的獨(dú)特配方，保護(hù)細(xì)胞免收冰晶河溶質(zhì)損傷，能有效地提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率和活力，助科研工作者擺脫程式繁瑣、操作復(fù)雜、微生物污染可能性高的凍存調(diào)配工作，專注于下游的研究。保存條件：-20℃，避免反復(fù)凍融現(xiàn)在是49頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞凍存程序選擇指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞1000r/min5分鐘離心去上清，（貼壁細(xì)胞消化后離心，懸浮細(xì)胞直接離心）棄上清，用細(xì)胞凍存液混懸沉淀細(xì)胞，將細(xì)胞懸液濃度調(diào)整到106-107個(gè)/ml分裝于凍存管中進(jìn)行程序降溫：4℃30min，-20℃30-60min，-80℃超低溫冰箱過夜后轉(zhuǎn)移到液氮罐內(nèi)，長(zhǎng)期凍存?，F(xiàn)在是50頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)凍存前確認(rèn)細(xì)胞未被污染，分析細(xì)胞系的可靠性。選擇合適的冷凍速度和冷凍溫度，以免在凍存過程中損傷細(xì)胞常溫條件下DMSO對(duì)細(xì)胞有毒副作用，故應(yīng)將凍存液在4℃條件下放置40-60min后使用。凍存管放入液氮罐時(shí)，小心液氮濺出。

現(xiàn)在是51頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞復(fù)蘇程序現(xiàn)在是52頁\一共有100頁\編輯于星期日

如何選擇培養(yǎng)基現(xiàn)在是53頁\一共有100頁\編輯于星期日

YOCON細(xì)胞培養(yǎng)基現(xiàn)在是54頁\一共有100頁\編輯于星期日現(xiàn)在是55頁\一共有100頁\編輯于星期日現(xiàn)在是56頁\一共有100頁\編輯于星期日現(xiàn)在是57頁\一共有100頁\編輯于星期日現(xiàn)在是58頁\一共有100頁\編輯于星期日現(xiàn)在是59頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞或細(xì)胞系常用的培養(yǎng)基現(xiàn)在是60頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞或細(xì)胞系常用培養(yǎng)基現(xiàn)在是61頁\一共有100頁\編輯于星期日

YOCON細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)工藝現(xiàn)在是62頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品在流感病毒分離上的應(yīng)用流感病毒分離所需培養(yǎng)基及試劑DMEM(高糖，含L-谷氨酰胺，不含丙酮酸鈉）胎牛血清0.05%胰酶+0.02%EDTA青鏈霉素（10000u/ml，10000ug/ml）慶大霉素（50mg/ml）Hepes（1M）BSA(v)7.5%TPCK-胰酶（2mg/ml）HBSS

現(xiàn)在是63頁\一共有100頁\編輯于星期日相關(guān)試劑用量現(xiàn)在是64頁\一共有100頁\編輯于星期日病毒CPE反應(yīng)現(xiàn)在是65頁\一共有100頁\編輯于星期日病毒液的收獲當(dāng)75%～100%細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí)進(jìn)行收獲，收獲之前可以將細(xì)胞放于-70℃冰箱，凍融1～2次，以提高收獲標(biāo)本的病毒滴度。即使無細(xì)胞病變也應(yīng)該于接種后第7天收獲。收獲病毒液時(shí)，先溫和搖動(dòng)細(xì)胞瓶數(shù)次，然后用10mL的無菌移液管吸取病毒液置于15mL無菌離心管中，混勻病毒。收獲的病毒液可以進(jìn)行紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)，如沒有紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，應(yīng)將收獲病毒培養(yǎng)液再M(fèi)DCK細(xì)胞傳代2-3次。如果有必要，可再通過血凝抑制實(shí)驗(yàn)鑒定分離物，并將分離物保存在-70℃或-70℃以下?，F(xiàn)在是66頁\一共有100頁\編輯于星期日

質(zhì)控及檢測(cè)能力先進(jìn)的檢測(cè)儀器標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)操作流程每個(gè)批產(chǎn)品的監(jiān)測(cè)和留樣符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)環(huán)境現(xiàn)在是67頁\一共有100頁\編輯于星期日

產(chǎn)品相關(guān)質(zhì)控方法出處pH依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄VIHpH測(cè)定法.無菌依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄XIH無菌檢查（2）直接接種法，進(jìn)行細(xì)菌真菌的檢測(cè)。內(nèi)毒素依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中凝膠半定量法，利用鱟試劑來檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素。支原體檢測(cè)依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅫB支原體檢查法中培養(yǎng)法現(xiàn)在是68頁\一共有100頁\編輯于星期日SP2/0毒性檢測(cè)依據(jù)《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中SP2/0生長(zhǎng)曲線，倍增時(shí)間的測(cè)定滲透壓依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄IXG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法中（1）測(cè)量溶液的冰點(diǎn)下降來間接測(cè)定其滲透壓摩爾濃度。凝膠電泳圖譜依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版三部附錄F電泳法第四法聚丙烯酰胺凝膠電泳法。蛋白總量依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2010年版二部附錄ⅦM蛋白質(zhì)含量測(cè)定法第五法（考馬斯亮藍(lán)法Bradford）現(xiàn)在是69頁\一共有100頁\編輯于星期日為達(dá)到質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)采取的措施現(xiàn)在是70頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基類產(chǎn)品質(zhì)控項(xiàng)目現(xiàn)在是71頁\一共有100頁\編輯于星期日培養(yǎng)基質(zhì)控項(xiàng)目現(xiàn)在是72頁\一共有100頁\編輯于星期日培養(yǎng)基質(zhì)控項(xiàng)目現(xiàn)在是73頁\一共有100頁\編輯于星期日抗生素產(chǎn)品質(zhì)控項(xiàng)目現(xiàn)在是74頁\一共有100頁\編輯于星期日緩沖液類產(chǎn)品現(xiàn)在是75頁\一共有100頁\編輯于星期日其他試劑質(zhì)控項(xiàng)目現(xiàn)在是76頁\一共有100頁\編輯于星期日其他試劑質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)在是77頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品使用常見問題匯總Hank's平衡鹽溶液(HBSS)要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's平衡鹽溶液(HBSS)和Earle's平衡鹽溶液(EBSS)有什么本質(zhì)的功能差別？

HBSS和EBSS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks液就可以了?，F(xiàn)在是78頁\一共有100頁\編輯于星期日為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值會(huì)越來越偏堿性？培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值。

現(xiàn)在是79頁\一共有100頁\編輯于星期日L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時(shí)間后會(huì)降解，但是確切的降解率一直沒有最終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性?，F(xiàn)在是80頁\一共有100頁\編輯于星期日什么情況下要求培養(yǎng)基中不能含有酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中用作批H值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基?，F(xiàn)在是81頁\一共有100頁\編輯于星期日如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞？

用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000個(gè)/毫升，在0.1毫升細(xì)胞懸液中加0.1

毫升0.4％的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺(tái)盼蘭，因而染成藍(lán)色細(xì)胞是死細(xì)胞?，F(xiàn)在是82頁\一共有100頁\編輯于星期日鈣鎂離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么？鈣鎂離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子.

現(xiàn)在是83頁\一共有100頁\編輯于星期日購買的細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？

研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯(cuò)誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80°C太久。

現(xiàn)在是84頁\一共有100頁\編輯于星期日為什么大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基中要含有丙酮酸鈉？丙酮酸鈉作為細(xì)胞培養(yǎng)的一種能源物質(zhì)。它往往被加到低葡萄糖組分的培養(yǎng)基中（1.0g/L葡萄糖），也有時(shí)添加到較高的葡萄糖配方中（4.5g/L)。提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的碳源，在沒有葡萄糖時(shí)，細(xì)胞可代謝丙酮酸鈉產(chǎn)生丙酮酸進(jìn)行能量合成。現(xiàn)在是85頁\一共有100頁\編輯于星期日培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？

答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培養(yǎng)液需在2－8℃避光保存；含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。現(xiàn)在是86頁\一共有100頁\編輯于星期日細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？

答：如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該自然溶解培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。嚴(yán)格意義上要避免細(xì)胞培養(yǎng)基冷凍，會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)?，F(xiàn)在是87頁\一共有100頁\編輯于星期日HEPES在細(xì)胞培養(yǎng)過程中起什么作用？HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變化。在開放式培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時(shí)可以維持pH7.0左右。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES。現(xiàn)在是88頁\一共有100頁\編輯于星期日血清使用時(shí)一定需要滅活么？實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或完全沒有作用，甚至因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量?，F(xiàn)在是89頁\一共有100頁\編輯于星期日培養(yǎng)液pH下降很快可能原因有哪些？其解決辦法是什么？通常細(xì)胞生長(zhǎng)得非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快。此時(shí)可以及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊、NaHCO3

緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。（1）按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％。（2）改用不依賴CO2培養(yǎng)液。（3）松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。（4）在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks鹽配制的培養(yǎng)液。（5）如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌?，F(xiàn)在是90頁\一共有100頁\編輯于星期日無血清培養(yǎng)基消化貼壁細(xì)胞時(shí)，用什么終止消化試劑反應(yīng)？

通常用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行貼壁細(xì)胞傳代時(shí)，可添加商品化的蛋白酶抑制劑或含有鈣鎂離子的商品化試劑進(jìn)行終止反應(yīng)?，F(xiàn)在是91頁\一共有100頁\編輯于星期日怎樣對(duì)病毒分離用的鼻咽拭子樣本進(jìn)行處理？

WHO規(guī)定用力將含有鼻咽拭子的采樣管置于漩渦振蕩器中進(jìn)行混合振蕩，振蕩后將鼻咽拭子貼緊采樣管內(nèi)壁進(jìn)行擠壓，將拭子含有的病毒采樣液全部擠壓到采樣管中，取出拭子，每ml采樣液中添加慶大霉素試劑（50mg/ml）0.2ml，室溫下放置15min，1000rpm，離心5min，取上清液200ul進(jìn)行接種，其余上清液-80℃凍存?，F(xiàn)在是92頁\一共有100頁\編輯于星期日流感病毒陽性分離率低的原因？

采樣方法及部位（咽部后壁,用力采集）采集拭子（高采集率及高釋放率）采樣液（恒定的pH值，滲透壓，穩(wěn)定劑）運(yùn)送溫度（4℃）樣本處理（污染物，保存溫度）轉(zhuǎn)染率（轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞的數(shù)量）轉(zhuǎn)染的細(xì)胞狀態(tài)（MDCK細(xì)胞狀態(tài)差）病毒生長(zhǎng)液（病毒生長(zhǎng)液配制問題）現(xiàn)在是93頁\一共有100頁\編輯于星期日為什么分離普通流感病毒在細(xì)胞培養(yǎng)法中需添加TPCK-胰酶，而雞胚法不需要添加？維持液中加適量胰酶的目的是為了提高流感病毒在細(xì)胞中的復(fù)制能力。絕大多數(shù)流感病毒只有血凝素（H）是裂解型的才具有感染性。細(xì)胞培養(yǎng)不像雞胚，它的維持液中不含有蛋白水解酶，無法將病毒粒非