血液學(xué)一般檢驗(緒論、第一章)

第一頁，共82頁。1903年美國賓西法尼亞州立醫(yī)院成立了第一個專門的臨床檢驗實驗室1931年，恩斯特·魯斯卡通過研制電子顯微鏡，使生物學(xué)發(fā)生了一場革命。

1950年美國學(xué)者Levey和Jennings發(fā)表第一篇關(guān)于使用質(zhì)控圖的實驗室室內(nèi)質(zhì)控，臨床檢驗實驗室的室內(nèi)質(zhì)控工作正式拉開序幕，該方法至今仍被各臨床實驗室所使用。國外醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)發(fā)展簡史第二頁，共82頁。19世紀70年代，德國學(xué)者Koch創(chuàng)造固體培養(yǎng)基，將細菌從環(huán)境或病人排泄物等標本中分離成單一菌落1959放射免疫分析技術(shù)及1975年單克隆抗體技術(shù)的創(chuàng)立均獲得諾貝爾生物醫(yī)學(xué)獎。

1985年美國PECetus公司人類遺傳研究室的Mullis等發(fā)明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)國外醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)發(fā)展簡史第三頁，共82頁。新中國成立時，檢驗專業(yè)技術(shù)人員4000余人1979年9月成立了中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會，并在WHO的支持指導(dǎo)下，同年成立了衛(wèi)生部臨床檢驗中心國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)發(fā)展簡史

第四頁，共82頁。70年代我國參加了世界衛(wèi)生組織的臨床化學(xué)質(zhì)量評價活動1991年我國衛(wèi)生部部長令：首批淘汰三十五項檢驗項目

1990年后，一些高科技、分子生物學(xué)技術(shù)在檢驗醫(yī)學(xué)方面應(yīng)用迅速增多2000年《中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志》正式更名為《中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志》，檢驗醫(yī)學(xué)作為一個學(xué)科名稱正式確立。國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)發(fā)展簡史第五頁，共82頁。clinicallaboratorytechnologyorscience臨床檢驗

通過實驗室的各種檢查方法，包括感官檢查、理學(xué)檢查、化學(xué)檢查、顯微鏡檢查以及自動化儀器檢查等，對病人的血液、體液、分泌物和排泄物等標本進行檢查、分析，以獲得病原、病理變化及臟器功能狀態(tài)等資料。第六頁，共82頁。醫(yī)院檢驗科臨檢室生化室免疫室血液室基因室微生物室病理室第七頁，共82頁。從手工檢測進行儀器自動化檢測檢驗試劑批量化、專業(yè)化、多樣化檢驗方法標準化實施了全面的質(zhì)量管理和保證床旁檢測（pointofcaretest,POCT）醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)的現(xiàn)狀第八頁，共82頁。臨床檢驗基礎(chǔ)的臨床應(yīng)用

1、為準確診斷、及時治療提供依據(jù)

臨床檢驗的結(jié)果是支持診斷、鑒別診斷、甚至確定診斷的主要依據(jù)例：anemia依據(jù)：血中紅細胞和血紅蛋白量減少leukemia依據(jù)：血象和骨髓象變化腎臟有實質(zhì)性損傷依據(jù)尿液中出現(xiàn)蛋白、細胞、管型tumor？第九頁，共82頁。2、為分析病情、觀察療效、判斷預(yù)后提供依據(jù)

在疾病過程中，血液、體液、分泌物和排泄物也會隨之發(fā)生相應(yīng)的變化3、為預(yù)防疾病提供資料

如血象和腫瘤細胞學(xué)的普查等臨床檢驗的臨床應(yīng)用4、為科學(xué)研究提供醫(yī)學(xué)檢驗數(shù)據(jù)第十頁，共82頁。目視檢查:

直接觀察標本：顏色、透明度、性狀，有無凝塊或寄生蟲理學(xué)檢查:

液體的相對密度、血液比粘度、紅細胞沉降率、紅細胞比積等病理變化臨床檢驗的一般方法（1）第十一頁，共82頁?；瘜W(xué)檢查:

定性和定量檢測標本化學(xué)成分的病理變化顯微鏡檢查:

觀察有型成分的數(shù)量和形態(tài)自動化儀器檢查:

電子技術(shù)、程序控制的發(fā)展臨床檢驗的一般方法（2）第十二頁，共82頁。

理論聯(lián)系實踐實驗技能和方法學(xué)評價檢驗結(jié)果參考值及臨床意義檢驗工作者的醫(yī)德學(xué)習(xí)臨床檢驗的基本要求第十三頁，共82頁。thanks第十四頁，共82頁。血液標本的采集第十五頁，共82頁。一、血液生理血液的組成血液的理化特性血液的功能第十六頁，共82頁。血液血漿血細胞紅細胞白細胞血小板

水：90～92％

血漿蛋白

溶質(zhì)：8～10％小分子物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)激素代謝產(chǎn)物有機物無機鹽（電解質(zhì)）白蛋白球蛋白纖維蛋白原血液的組成及血漿成分第十七頁，共82頁。第十八頁，共82頁。第十九頁，共82頁。血液的功能1

營養(yǎng)2運輸3緩沖

4參與機體免疫參與凝血和抗凝第二十頁，共82頁。二、血液標本的采集第二十一頁，共82頁。全血靜脈全血：G-6-PD、糖化血紅蛋白、基因檢測動脈全血：血氣分析末稍全血：用于細胞計數(shù)、分類、形態(tài)觀察分類第二十二頁，共82頁。血漿：全血去除血細胞,用于血栓止血檢測血清：全血自然凝固后析出的液體,用于生物化學(xué)、免疫學(xué)檢測等分類第二十三頁，共82頁。采血用品第二十四頁，共82頁。1、皮膚采血法：微量檢測(thecollectionofcapillaryblood)

采血部位：耳垂或手指末梢血液標本采集的方法第二十五頁，共82頁。2、靜脈采血法(thecollectionofvenousblood)

用于血沉、免疫、生化等檢測項目部位：以肘部靜脈為主采集方法第二十六頁，共82頁。注血標本法第二十七頁，共82頁。采血的注意事項第二十八頁，共82頁。第二十九頁，共82頁。頭蓋顏色臨床用途標本類型采血量（ml）紅色

血清生化血庫試驗血清3.04.05.07.0綠色快速血漿生化血流變試驗血漿3.04.05.0黃色快速血清生化藥代動力學(xué)試驗血清3.55.0

紫色血液常規(guī)、全血試驗血流變試驗全血2.05.0

淺藍色凝血試驗?zāi)蜃釉囼炑獫{1.82.7

黑色手工血沉試驗全自動血沉試驗全血1.82.4

真空采血管顏色及應(yīng)用第三十頁，共82頁。多管血分配順序黃色紅色紫色黑色綠色淺藍色第三十一頁，共82頁。動脈采血法通常選用橈動脈（方便）、股動脈、肱動脈第三十二頁，共82頁。標本采集時應(yīng)規(guī)范操作，以減少誤差毛細血管采血時應(yīng)避開傷損部位，避免擠壓皮膚，血液應(yīng)自然流出靜脈采血時壓脈帶壓迫時間不宜太長動脈采血后應(yīng)立即與空氣隔絕，阻止血氣交換

標本采集的注意事項注意：嚴禁在靜脈輸液管中采集血液第三十三頁，共82頁。兩種采血方法的應(yīng)用皮膚采血法靜脈采血法缺點限制了重復(fù)實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實驗和追加其他實驗第三十四頁，共82頁。

標本送檢、保存與處理

唯一標識、生物安全原則、盡快運送接收與拒收標本原則;未檢測標本的保存、檢測后標本析保存檢驗后血液標本的處理

第三十五頁，共82頁?？鼓齽┑倪x擇和運用抗凝

用物理或化學(xué)方法除去或抑制血液中的某些凝血因子的活性，以阻止血液凝固，稱為抗凝?？鼓齽?/p>

鈣拮抗劑、肝素。概念第三十六頁，共82頁?？鼓恚盒纬刹菟徕}沉淀使用方法：草酸鈉0.1mol/L和血液1:9優(yōu)點：溶解性好，價廉缺點：對凝血因子保護功能差，影響凝血因子；形成草酸鈣沉淀物，影響自動凝血儀器的使用使用范圍：雙草酸鹽維持紅細胞體積，使血小板聚集、白細胞形態(tài)改變草酸鹽第三十七頁，共82頁。抗凝原理：與鈣離子生成可溶性的鰲合物使用方法：配成109mmol/L的濃度和血液1:9,106mmol/L的濃度和血液1:4優(yōu)點：對凝血因子有很好的保護作用缺點：血液中溶解度低，抗凝作用較弱使用范圍：止血學(xué)檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。╄蹤此徕c第三十八頁，共82頁。抗凝原理：生成可溶性的鰲合物。使用方法：15g/LEDTA和血液1:10。優(yōu)點：對紅細胞和白細胞形態(tài)影響小。缺點：影響血小板的聚集。使用范圍：全血細胞分析和血細胞比容測定，不適用于出凝血實驗和血小板功能乙二胺四乙酸（EDTA）鹽第三十九頁，共82頁。抗凝原理：加強抗凝血酶作用使用方法：肝素鈉1g/L與血液1:10優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫缺點：引起白細胞聚集，使白細胞計數(shù)降低，不利于制備血涂片，價格昂貴使用范圍：紅細胞脆性實驗，科學(xué)研究等肝素第四十頁，共82頁。謝謝第四十一頁，共82頁。血涂片的用途：

血細胞形態(tài)學(xué)檢驗網(wǎng)織紅異常寄生蟲檢驗四、血涂片

血涂片的制備技術(shù)第四十二頁，共82頁。涂片技術(shù)是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將血液樣品制成單層細胞的涂片標本，染色后可對血液中各種細胞形態(tài)進行形態(tài)觀察、細胞計數(shù)、細胞大小測量等工作。實驗原理第四十三頁，共82頁。

1．采血

2．制作涂片

3．干燥涂片

4．標記涂片

5．染色

6．觀察結(jié)果血涂片制備步驟(手工推片法)第四十四頁，共82頁。醫(yī)用一次性采血針酒精棉球鑷子經(jīng)脫脂洗凈的載玻片雙凹片（推片）

實驗器材準備第四十五頁，共82頁。采血前用70％酒精棉球消毒人的指腹第四十六頁，共82頁。采血第四十七頁，共82頁。由于第一滴血中含單核白細胞較多，因此棄去第一滴血第四十八頁，共82頁。推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè)第四十九頁，共82頁。

再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。第五十頁，共82頁。30~45°

兩玻片的角度以30～45°為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進，即涂成血液薄膜。第五十一頁，共82頁。

將推玻片向后稍抽回，當血液充滿推玻片的寬度后，以一定均勻的速度向前方滑動。血涂片的制作第五十二頁，共82頁。均勻厚薄頭體尾邊緣兩側(cè)血涂片質(zhì)量評價注意：血滴大，速度快、角度大----血膜厚第五十三頁，共82頁。第五十四頁，共82頁。染料(天然染料和人工染料）

發(fā)色基團和助色基團使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。五、血細胞常用的染色方法第五十五頁，共82頁。堿性染料：陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核的染料（如亞甲藍、天青）酸性染料：陰離子染料，能釋放質(zhì)子。能結(jié)合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白，嗜酸性顆粒成分等。復(fù)合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料染料的分類第五十六頁，共82頁。物理作用：滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：a、染料的化學(xué)成分：助色基團的存在。堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內(nèi)帶負電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。細胞著色原理第五十七頁，共82頁。b.蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其他活性基團。在游離狀態(tài)時，-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合?；瘜W(xué)作用第五十八頁，共82頁。C.周圍環(huán)境的酸堿度：如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性染料；反之，pH＞pI，則結(jié)合堿性染料?；瘜W(xué)作用第五十九頁，共82頁。染色原理

分兩相進行，第一相是酸性伊紅與細胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性染料天青B與細胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、特異中性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是天青B和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的天青B-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。

瑞氏染色法第六十頁，共82頁。試劑

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml甲醇：有強大的脫水力，可將細胞固定為一定形態(tài)，并使蛋白質(zhì)沉淀為顆粒狀、網(wǎng)狀等結(jié)構(gòu)，增加細胞與染料接觸表面積，提高對染料的吸附作用，增強染色效果。瑞氏染色法第六十一頁，共82頁。試劑

2.磷酸鹽緩沖液（PBS）磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,蒸餾水加到1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。瑞氏染色法第六十二頁，共82頁。a.用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上b.加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1minc.滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色10-15分鐘d.用清水沖洗，待干后油鏡鏡檢瑞氏染色方法第六十三頁，共82頁。染色

待涂片在空氣中完全干燥后，滴加數(shù)滴Wright’s染液蓋滿血膜為止，染色1min。然后滴加等量或稍多緩沖液，使其與染液均勻混合，靜置10～15min。用流水緩緩沖去染液，待干鏡檢。

第六十四頁，共82頁。染色原理

基本成分仍然是伊紅和亞甲藍，改進了染料的質(zhì)量，使細胞核著色好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰，而胞漿和中性顆粒染色較差。試劑

Giemsa染液甲醇純甘油姬姆薩染色法第六十五頁，共82頁。1.甲醇固定干燥血膜3-5min2.將血膜在染液中浸染10-30min3.流水沖洗,待干后鏡檢姬姆薩染色方法第六十六頁，共82頁。瑞氏和姬氏染粉按一定比例混合，用甲醇溶解配制成瑞-姬染液。染色過程和染色原理與瑞氏染色類似。瑞-姬染色第六十七頁，共82頁。新鮮配制的染液偏堿，染色效果較差，應(yīng)貯存一段時間后再用。不能使用肝素抗凝標本玻片必須清潔、干燥、無塵。使用玻片時，只能手持玻片邊緣，切勿觸及玻片表面染色注意事項第六十八頁，共82頁。制作涂片時根據(jù)血細胞比容、血粘度的高低決定應(yīng)采用血滴的大小及推片的角度和速度。血涂片干透后方可固定染色。根據(jù)染液濃度、室溫及細胞多少決定染色時間低倍鏡下觀察血涂片染色質(zhì)量。染色注意事項第六十九頁，共82頁。瑞氏染色對胞漿著色好，胞漿中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性等顆粒染色清晰、色澤純正，細胞核著色不理想姬氏染色對細胞核著色程度適中，染色后細胞核結(jié)構(gòu)清晰，胞質(zhì)染色較差瑞-姬染色使瑞氏及姬氏染色取長補短，優(yōu)勢互補方法學(xué)評價第七十頁，共82頁。染色效果觀察第七十一頁，共82頁。染色效果觀察第七十二頁，共82頁。原理待測標本經(jīng)過適當稀釋（或濃縮）后，充入計數(shù)池，在顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的細胞，再換算成每升標本內(nèi)的細胞數(shù)。方法評價常用于各種細胞成份的計數(shù)，亦可用于其他體液的細胞計數(shù)。

計數(shù)誤差大，不適用于大批量標本檢測。六、血細胞顯微鏡計數(shù)法第七十三頁，