DB32T 3762.3-2020新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 第3部分：核酸熒光PCR檢測(cè)程序

ICS11.020C2江蘇省地DB32方標(biāo)準(zhǔn)DB/T3762.3—2020TechnicalspecificationsforSARSCoV2detectionPartReal-timefluorescencePCRtestprocedure江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前言BTGB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。江蘇省衛(wèi)生健康委員會(huì)提出。。4.2操作人員資質(zhì)及防護(hù)要求PCR與設(shè)施、設(shè)備與耗材、試劑與材料、樣與核酸提取、擴(kuò)增體系配制與擴(kuò)增、結(jié)果判定。范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求原衛(wèi)生部辦公廳實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則原衛(wèi)生部檢驗(yàn)中心病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南國(guó)家衛(wèi)生健康委定義文件4環(huán)境與設(shè)施4.1實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)及級(jí)別要求二級(jí)實(shí)驗(yàn)室(BSL-2)進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室(BSL-3)的個(gè)人防護(hù)；感染性材料或活病毒在采用可靠的方法滅活后進(jìn)行的核酸檢測(cè)操作應(yīng)在BSL-2進(jìn)行。核酸擴(kuò)增應(yīng)在基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行,臨床檢測(cè)機(jī)構(gòu)基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)滿足B設(shè)備與耗材5.1設(shè)備CR5.2耗材防水靴套、微量移液器及各種配套帶濾芯Tip頭、1.5mLEP管、凍存管、凍存盒。與材料.1試劑PCR2材料消毒劑：75%乙醇；有效氯5500mg/L的消毒液(需每天新鮮配制)；生理鹽水或磷酸鹽緩沖液(PH=7.4)；4%NaOH或含1g/L蛋白酶K的磷酸鹽緩沖液或0.1%二硫蘇糖醇的磷酸鹽緩沖液。理與核酸提取樣本前處理K一步試驗(yàn)。核酸提取.1核酸提取按照核酸提取試劑盒或核酸提取儀操作說(shuō)明進(jìn)行。，連同樣本轉(zhuǎn)運(yùn)盒進(jìn)行盒內(nèi)外消毒后轉(zhuǎn)出生安柜。性手術(shù)衣、脫一次性手術(shù)衣放入中號(hào)垃圾袋，包扎垃圾袋。消毒垃圾袋外表面、核前應(yīng)以塑料袋覆蓋機(jī)器如核酸提取儀、2.4.5將核酸交核酸檢測(cè)人員。樣本轉(zhuǎn)入病毒樣本專用專人保管冰箱。擴(kuò)增體系配制與擴(kuò)增位置和樣本編號(hào)。毒樣本專用專人保管冰箱。儀器上設(shè)置擴(kuò)增參數(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。9結(jié)果判定9.1閾值設(shè)定。9.2質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)9.2.1樣本內(nèi)參基因要求參RNP基因出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線呈S型，且Ct值小于或等于35。9.2.2一般要求9.2.3陰性對(duì)照9.2.4陽(yáng)性對(duì)照SCt于或等于30。9.3結(jié)果判斷個(gè)：a)同一份樣本中新型冠狀病毒2個(gè)靶標(biāo)(ORF1ab、N)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性。9.3.3不確定結(jié)果：在對(duì)照成立下，如果檢