藥典微生物限度修訂培訓知識

主要內容一中國藥典微生物檢查體系的調整二新的微生物檢驗理念三實驗室規(guī)劃與建設四（仲裁）中檢院判斷藥品污染的方案五培訓總結第一頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調整1.調整內容章節(jié)內容目的無菌檢查法質量標準體系基本與國外接軌微生物限度檢查法滅菌法強調微生物檢驗的驗證及過程控制抑菌效力檢查法指導原則藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則對滴眼劑的質控水平大幅度提高微生物限度檢查法應用指導原則部分品種特別是抗生素品質的無藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則菌檢查法由附錄走入各論第二頁，共50頁。2.具體內容——無菌檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調整中國藥典2010版無菌檢查法修訂方案無菌檢查法中對以真菌為檢查目的改良馬丁培養(yǎng)基修訂為以需氧菌為檢查目的地的胰酪大豆胨肉湯培養(yǎng)基（TSB）為研究工作已由上海市藥檢所牽頭完成。第三頁，共50頁。WHO規(guī)程在取樣量、培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等主要方面與現行USP、EP無菌檢查法一致。WHO規(guī)程的并沒有明確規(guī)定硫乙醇培養(yǎng)基必須雙份雙溫度分別培養(yǎng)，相反倒是推薦單一的硫乙醇培養(yǎng)基在20℃～25℃培養(yǎng)。一、中國藥典微生物檢查體系的調整比較第四頁，共50頁。2.具體內容——微生物限度檢查一、中國藥典微生物檢查體系的調整將與ICH、(USP/EP/JP)全面接軌2010版中國藥典第二增補本將于2013年10月1日頒布微生物限度檢查法修訂方案肯定會在2015年版中國藥典收載，擬提前頒布，爭取必要的過渡期第五頁，共50頁。1）檢驗體系變更；2）限度標準變更，有“數量”向“數量級”轉變；3）控制菌結果判斷趨向多樣化；4）以“OOS”代替復試…一、中國藥典微生物檢查體系的調整第六頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調整比較計數法藥典2010版Chp.修訂版2010版Chp.分類依據營養(yǎng)條件微生物類別項目1需氧菌總數胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA)細菌數營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基項目2霉菌及酵母菌總數沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDA)霉菌及酵母菌數玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基特點客觀、嚴謹檢驗條件不能滿足控制要求第七頁，共50頁。微生物計數定義變化修訂前修訂后細菌數——營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基細菌修訂為需氧菌總數（TAMC)霉菌和酵母菌——玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基霉菌和酵母菌數修訂為霉菌和酵母菌總數(TYMC)一、中國藥典微生物檢查體系的調整需氧菌總數：生長在胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上所有的菌落（包括霉菌和酵母菌）。霉菌和酵母菌總數：一般指生長在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上的所有菌落（包括細菌）。第八頁，共50頁?？刂凭鷻z查法編號2010版Chp.修訂版2010版Chp.1*耐膽鹽的革蘭氏陰性菌大腸菌群2*大腸埃希菌大腸埃希菌3*沙門菌沙門菌4*銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌5*金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌6梭菌梭菌7白色念珠菌白色念珠菌*：培養(yǎng)基體系有明顯變化一、中國藥典微生物檢查體系的調整第九頁，共50頁。結果判斷項目2010版Chp.修訂版2010版Chp.微生物計數法控制標準（接受限度）101（20）10(10)102（200)100(100)控制菌檢查法結果較少的生化實驗或采用其他事宜方法進一步鑒定應進行分離、純化及適宜的鑒定實驗一、中國藥典微生物檢查體系的調整第十頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調整增加新的計數方法——MPN法最可能計數法（MPN法）用于微生物計數時精確度較差，僅在供試品需氧菌總數沒有適宜計數方法時使用，不適用霉菌計數。第十一頁，共50頁。3.調整背景一、中國藥典微生物檢查體系的調整醫(yī)藥產品的發(fā)展一百多年來人們努力提高在“有菌的環(huán)境”生成“無菌的產品”的能力，事實證明這一努力至今充滿挑戰(zhàn)！第十二頁，共50頁。2006年，齊二藥——亮菌甲素注射液導致多名患者腎功能衰竭，13名患者死亡；2006年，安徽華源生物藥業(yè)公司——克林霉素注射液導致11名患者死亡；2008年，江西博雅生物制藥公司——靜脈注射用人免疫球蛋白，6人注射后死亡；2009年至今…一、中國藥典微生物檢查體系的調整1）國內第十三頁，共50頁。2006年7月～8月發(fā)生震驚全國的“欣弗事件”一、中國藥典微生物檢查體系的調整奪命的“欣弗”第十四頁，共50頁?！靶栏ナ录睂ξ覈幤飞杀O(jiān)管產生了深遠的影響，直接推動了新的藥典方案和新版GMP規(guī)定的出臺。一、中國藥典微生物檢查體系的調整“欣弗事件”將永遠成為無菌藥品生成的典型反面教材！第十五頁，共50頁。2）國際2012年10月，美國新英格蘭合成制藥中心生成的注射用類固醇霉菌污染，造成數百人感染真菌腦炎，至年底統(tǒng)計已死亡39人。一、中國藥典微生物檢查體系的調整第十六頁，共50頁。在50支密封藥瓶中檢測出曲霉菌和突臍蠕孢菌兩種真菌。一、中國藥典微生物檢查體系的調整第十七頁，共50頁。3）發(fā)展趨勢——全球化的微生物檢驗

新的GPM

新的藥典方案

新的ISO標準

WHO微生物實驗室PQ認證Youdorightthewrongthing!一、中國藥典微生物檢查體系的調整第十八頁，共50頁。Pre-QualificationofqualitycontrollaboratoriesWHOPQ認證WHO自2004年建立預認證程序，聯(lián)合國機構評價使用質控實驗室的指導原則（2004年發(fā)布WHOTRS，No.917，Annex4，2007年修訂WHOTRS，No.943，Annex5，目前仍在修訂中）蓋茨全球基金項目一、中國藥典微生物檢查體系的調整第十九頁，共50頁。WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)1.Personnel人員2.Environment環(huán)境3.Validationoftestmethods檢測方法驗證4.Equipment儀器設備5.Reagentsandculturemedia試劑和培養(yǎng)基6.Referencematerialsandreferencecultures菌株7.Sampling抽樣8.Samplehandlingandidentification樣本處理和判斷9.Disposalofcontaminatedwaste污染廢棄物處理一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十頁，共50頁。一、中國藥典微生物檢查體系的調整WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories(GPML)10.Qualityassuranceofresultsandqualitycontrolofperformance

檢測結果質量保證和檢測過程質量控制11.Testingprocedures檢測方法12.Testreports檢測報告（原始記錄）第二十一頁，共50頁。ICH人用藥注冊技術要求國際協(xié)調會歐盟、美國和日本三方的藥品管理部門和制藥企業(yè)協(xié)會1990年發(fā)起——三方的制藥產品占世界市場份額的70%～80%一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十二頁，共50頁。ICH工作內容協(xié)調質量（Q)、安全（S）、療效（E）的技術要求。建立統(tǒng)一的質量技術要求：質量控制、檢驗技術、檢驗標準等；減少國際貿易的障礙；統(tǒng)一醫(yī)藥產品進入國際市場的技術門檻，促進國際間藥品在同一技術平臺的公平競爭；ICH4QB（藥典互認）附錄4A、4B、4C已經得出結論：美國、歐盟和日本藥典中的微生物限度檢驗方法協(xié)調統(tǒng)一！一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十三頁，共50頁。PDG（PharmacopoeialDiscussionGroup)藥典討論組1989年，由歐洲藥品質量管理局。美國藥典委員會和日本藥局方三方代表組成了PDG；宗旨：使三方藥典的科技水平保持一致，服務ICH，保證公眾用藥安全；角色：ICH的重要技術支撐一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十四頁，共50頁。各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調的內容及結構示例USP36<61>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非無菌產品的微生物檢查：微生物計數法)<62>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非無菌產品的微生物檢查：控制菌檢查法)<1111>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非無菌產品的微生物限度標準)一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十五頁，共50頁。各國藥典對微生物限度檢查協(xié)調的內容及結構示例EP7.0<2.6.12>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProducts:MicrobialEnumerationTests(非無菌產品的微生物檢查：微生物計數法)<2.6.13>MicrobiologicalExaminationofNonsterileProduct:Testsforspecifiedmicroorganisms(非無菌產品的微生物檢查：控制菌檢查法)<5.1.4>MicrobiologicalAttributesofNonsterilePharmaceuticalProduct(非無菌產品的微生物限度標準)一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十六頁，共50頁。中國藥典重大事項1995年版首次收載微生物限度檢查法，沿用86版&89版衛(wèi)生部部頒標準2000年版首次收載微生物限度檢查標準2005年版首次收載方法驗證，標準分列在三部藥典，對含生藥原粉制劑增加大腸菌群的控制，用于深部組織的制劑增加厭氧菌檢查。PDG完成微生物檢查的方法&標準統(tǒng)一2010年版首次收載培養(yǎng)基適用性檢查，眼用制劑修訂為無菌要求，陰道&尿道給藥制劑增加白色念珠菌的控制。ICH成員國收載協(xié)調方法&標準2010年修訂版基本與ICH微生物檢查法接軌，涵蓋標準和方法的整體變化一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十七頁，共50頁。中國藥典與ICH接軌原因：中國雖然不是ICH成員國，但與國外制藥行業(yè)交往日益增多，且中國想進入國際市場，藥品檢驗方法和標準的統(tǒng)一勢在必行，微生物檢查法亦如此。國內現狀已具備與ICH接軌的技術基礎：2005年版Chp.收載方法驗證；2010版Chp.收載培養(yǎng)基適用性要求。一、中國藥典微生物檢查體系的調整第二十八頁，共50頁。檢驗結果判斷：結果→過程控制（注重環(huán)節(jié)）二、新的微生物檢驗理念環(huán)境保證培養(yǎng)基保證無菌性檢查靈敏度檢查過程控制SOP操作方法驗證有效的方法有效的結果可靠的結論結果判斷第二十九頁，共50頁。過程監(jiān)控是溯源的基礎二、新的微生物檢驗理念廠房與設施物料驗證質量管理機構與人員設備衛(wèi)生管理生產管理空氣凈化技術生產環(huán)境衛(wèi)生公用工程衛(wèi)生原料衛(wèi)生輔料衛(wèi)生包裝材料衛(wèi)生清潔驗證滅菌驗證設備驗證工藝衛(wèi)生監(jiān)測環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測個人衛(wèi)生監(jiān)測體檢管理生產人員衛(wèi)生衛(wèi)生培訓工藝用水衛(wèi)生

設備清潔清潔規(guī)程

衛(wèi)生管理制度防止污染與混淆的措施微生物控制第三十頁，共50頁。MDD系統(tǒng)實驗室檢驗結果偏離規(guī)定標準一般屬于OOS情況，但是，涉及微生物相關檢驗項目的偏差處理，FDA的OOS指南已經明確說明并不適用。MDD是英文MicrobialDataDeviations的簡寫，意思就是實驗室微生物相關檢驗數據偏差。由于微生物相關檢驗項目固有的復雜性，FDA的OOS指南避開了這個話題。二、新的微生物檢驗理念第三十一頁，共50頁。USP<1117>專論《BestMicrobiologicalPractice》第三部分關于分析結果的解釋，列出了涉及微生物數據偏差（MDD）的疑難問題。二、新的微生物檢驗理念微生物是無處不在的，也是污染的主要來源。分析人員污染微生物檢驗項目的分析結果也是可能的。在不同樣品之間或者樣品不同部位之間，微生物可能沒有均勻分布。微生物檢驗項目具有顯著的內在變異性。第三十二頁，共50頁。微生物數據有時不容易理解與人類相關的微生物群落被廣泛用于許多測試。人員污染是始終被關心的問題。樣品或環(huán)境中的微生物并非均勻分布。微生物檢測可變范圍大：可能在±0.5lg左右

因此，得到的結果與期望會有差異二、新的微生物檢驗理念第三十三頁，共50頁。例如重復性誤差：7.5%（RSD）方法局限性

計數偏差：25～30cfu/皿，RSD為20%～18%

（USP34<1227>)

稱量誤差：

取10g

9.9～10.1g±1%容量誤差：取1ml＜1%培養(yǎng)基差異：＞10%

二、新的微生物檢驗理念

第三十四頁，共50頁。MDD調查需要涉及的范圍MDD涉及的微生物類別的鑒別；實驗室樣品和相關材料；實驗室相關記錄；生產環(huán)境的監(jiān)控人員培訓和健康情況；產品滅菌前的生物負荷；批生產記錄和輔助記錄；生產歷史（包括培養(yǎng)基灌裝歷史）二、新的微生物檢驗理念第三十五頁，共50頁。原料藥來源和質量；輔料來源和質量（包括工藝用水和工藝用氣）；?生產現場。二、新的微生物檢驗理念第三十六頁，共50頁。實驗室偏差調查示意圖

二、新的微生物檢驗理念儀器/設備試管失誤疲憊人員失誤滅菌釜操作培訓培養(yǎng)基污染更換供應商HEPA泄漏無合格證環(huán)境條件無菌服破裂檢驗結果超標第三十七頁，共50頁。MDD調查結果分析和評價實驗室分析錯誤

修訂完善的SOP、校驗儀器、更換物料或消毒環(huán)境等分析方法變更

制定替代檢驗方法SOP用于解決不確定的結果批次產品失敗

對于不合格產品按規(guī)程處理

二、新的微生物檢驗理念第三十八頁，共50頁。二、新的微生物檢驗理念MDD調查結果分析和評價人員或者環(huán)境因素影響

啟動CAPA糾偏措施沒有發(fā)現根本原因1）基于MDD發(fā)生的可能原因采取CAPA措施；2）基于風險分析，對相關批次產品做出最后處理決定

第三十九頁，共50頁。新的檢驗環(huán)境1）ICH要求：適宜的潔凈度環(huán)境；2）2010版GPM環(huán)境分級以A（百級）、B（千級）、C（萬級）、D（十萬級）定義；3）2010版Chp.修訂要求：微生物限度檢查應在受控潔凈環(huán)境下的局部潔凈度不低于B級的單向流空氣區(qū)域（>D+B）；

二、新的微生物檢驗理念第四十頁，共50頁。4）發(fā)展趨勢：檢驗過程及環(huán)境，既要求防止樣品受污染，又要防止對環(huán)境和人員造成危害。合理劃分活動區(qū)域以提高微生物實驗室操作的安全性和可靠性。二、新的微生物檢驗理念第四十一頁，共50頁。生物安全感染性微生物的危險度等級危險度1級（無或極低的個體和群體危害）危險度2級（個體危害中等，群體危害低）

病原體能夠對人或動物致病，但對實驗室工作人員、社區(qū)、環(huán)境不易導致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效預防和治療措施，疾病傳播危害有限。二、新的微生物檢驗理念第四十二頁，共50頁。二、新的微生物檢驗理念生物安全感染性微生物的危險度等級危險度3級（個體危害高，群體危害低）危險度4級（個體和群體危害均高）第四十三頁，共50頁。相應的生物安全水平二、新的微生物檢驗理念危險度等級生物安全水平實驗室類