革蘭陽性菌分類生物學特性及鑒定課件

革蘭陽性菌分類生物學特性及鑒定內(nèi)容革蘭陽性球菌革蘭陽性桿菌API鑒定系統(tǒng)細菌分類工具書《伯杰氏細菌系統(tǒng)分類學手冊》（Bergry’sManualofSystematicBacteriology）—細菌分類的標準Springer-Verlag公司2001年春出版《手冊》，第二版五卷本是最新版本葡萄球菌科葡萄球菌屬（Staphylococcus）孿生球菌屬(Gemella)其他屬乳桿菌科片球菌屬（平面球菌）(Pediococcus)其他屬氣球菌科氣球菌屬(Aerococcus)乏養(yǎng)菌屬(Abiotrophia)狡詐球菌屬(Dolosicoccus)其他屬費克藍姆氏菌屬(Facklamia)球鏈菌屬(Globicatella)明串珠菌科明串珠菌屬(無色藻菌屬)(Leuconostoc)其他屬鏈球菌科鏈球菌屬(Streptococcus)乳球菌屬(Lactococcus)BXIV門I綱II亞目第I科微球菌屬(Micrococcus)口腔球菌屬(Stomatococcus)其他屬微球菌科G+球菌觸酶+-微球菌屬鏈球菌屬葡萄球菌屬口腔球菌屬腸球菌屬孿生球菌屬片球菌屬明串珠菌屬氣球菌屬其他屬葡萄球菌屬微球菌屬口腔球菌屬常見觸酶陽性菌屬觸酶陽性常見菌屬鑒別菌屬GLUO/F氧化酶桿菌肽0.04U/片呋喃唑酮100ug/片葡萄球菌屬發(fā)酵-RS微球菌屬氧化+SR口腔球菌屬-SS葡萄球菌屬分類35個種、17個亞種分為凝固酶陽性和陰性的葡萄球菌主要鑒定試驗

觸酶血漿凝固酶新生霉素敏感試驗

DNA酶

CatalasePOSStaphylococcusCatalaseNEG注意事項：

1、細菌、試劑新鮮

2、血瓊脂上菌落不宜作此試驗

3、陰、陽性對照凝固酶試驗（Coagulase）玻片法：結(jié)合凝固酶（凝集因子）纖維蛋白原—纖維蛋白試管法：游離凝固酶凝血酶原—凝血酶類物質(zhì)DNA酶

原理：DNA酶水解DNA長鏈，形成數(shù)個單核苷酸組成的單核苷酸鏈。長鏈DNA被酸沉淀、單核苷酸溶于酸而出現(xiàn)透明環(huán)。操作：將待測菌點種于DNA瓊脂平板上，35℃培養(yǎng)24-48h，在細菌生長物上加試劑（菌落浸沒）試劑：1mol/L鹽酸注意事項：培養(yǎng)基表面凝固水烤干避免細菌蔓延狀生長表皮葡萄球菌菌落特點：菌落相對較小，2.5～6.0mm，取決于不同菌株，通常不產(chǎn)生色素，某些菌株產(chǎn)生黏液性常黏附在瓊脂表面腐生葡萄球菌菌落特點：菌落5～8mm大小，完整，有光澤，不透明、光滑，比前面提到菌種菌落較凸起，約一半菌株產(chǎn)色素，奶油、黃-橙色。腐生葡萄球菌頭葡萄球菌孔氏葡萄木糖葡萄鏡下特點：G+C、葡萄狀排列葡萄球菌生物學特性凝固酶陽性葡萄球菌鑒別試驗菌名凝固酶觸酶溶血硝酸鹽海藻糖半乳糖苷酶金黃色葡菌球菌金黃色亞種+++++-金黃色萄淘球菌厭氧亞種+-+---施氏葡萄球菌聚集亞種++++-ND中間葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-ND水獺葡萄球菌++++++豬葡萄球菌d+-++-凝固酶陰性葡萄球菌鑒別試驗菌名色素溶血堿性磷酸酶吡咯烷酮酶脲酶Β葡萄糖苷酶VP新生霉素多粘菌素B表皮葡萄球菌-(d)+-+(d)+SR溶血葡萄球菌d(+)-+-d+SS里昂葡萄球菌d(+)-+d++Sd腐生葡萄球菌d---+d+RS木糖葡萄球菌d-dd-+dRS頭狀葡萄球菌-(d)----dSS孔氏葡萄球菌-(d)----dRS人葡萄球菌d---+-dSS鑒定流程菌落觀察：金黃色、黃色或白色，溶血或不溶血涂片染色：G+球菌、單個、成雙，葡萄狀排列觸酶試驗

+

+凝固酶試驗

-金葡菌中間葡萄豬葡萄施氏葡萄海豚葡萄水獺葡萄

葡萄糖O/F

CNS微球菌屬+-微球菌屬分類微球菌屬共9個菌種代表菌為藤黃微球菌微球菌屬生物學特性菌落特點：血平板上小、圓形、凸起、光滑不透明菌落，可產(chǎn)生黃色、粉紅色菌落。鏡下：GC+、多為四聯(lián)、八疊狀排列藤黃微球菌菌落：BA上菌落小于葡萄球菌，呈圓形、突起、光滑、不透明黃色菌落鏡下：G+球菌體比葡萄球菌大，單個成雙，四聯(lián)八疊排列、包裹狀不規(guī)則固塊生化反應：觸酶+氧化酶+

，膽汁七葉苷精氨酸雙水解酶枸櫞酸鹽硝酸鹽均陰性血瓊脂：Micrococcusluteus

營養(yǎng)瓊脂：Micrococcusluteus

革蘭染色：Micrococcusluteus

粘液口腔球菌粘液口腔球菌生物學特性菌落特點：多為粘液狀，無色至白色，牢固粘附于瓊脂表面鏡下：G+大球菌，成雙或成對排列生化反應：觸酶大多陰性，少數(shù)弱陽性，氧化酶為陰性、可在含5%NaCl的營養(yǎng)瓊脂上生長可形成莢膜革蘭染色：stomatococcusmucilaginosus

觸酶陰性革蘭陽性球菌鏈球菌屬腸球菌屬孿生球菌屬片球菌屬明串珠菌屬氣球菌屬鏈球菌屬Lancefield血清學分群：A、B、C、D、F、G等18個群溶血：α、β、γ分類生物學特性菌落特點：灰暗色、扁平、干燥，溶血或不溶血鏡下形態(tài)：G+球菌，單個、成雙或短鏈排列鏈球菌屬主要鑒定試驗溶血桿菌肽試驗

CAMP試驗

Optochin試驗

PYR試驗血清凝集桿菌肽（Bacitracin）試驗操作：K-B法貼桿菌肽紙片（直徑6mm，0.04U/片），常規(guī)培養(yǎng)18-24h結(jié)果判讀：抑菌圈>10mm敏感。CAMP試驗：原理：細菌具有“CAMP”因子，能促進葡萄球菌β溶血素的活性，使兩種細菌在劃線處呈現(xiàn)箭頭形透明溶血區(qū)。操作：血平板上待測菌與金葡菌垂直劃線，劃線之間留出0.5-1cm,不能相接。無乳鏈球菌金葡菌Optochin敏感試驗

原理：Optochin（乙基氫化去甲奎寧的商品名）可干擾肺炎鏈球菌葉酸的生物合成，抑制該菌的生長故肺炎鏈球菌對其敏感，而其他鏈球菌對其耐藥。結(jié)果判定抑菌圈>14mm為肺炎鏈球菌注意事項1、做敏感試驗的平板不能在CO2環(huán)境下培養(yǎng)，因其可使抑菌圈縮小。2、同一血瓊脂平板可同時測定幾株菌株，但不要超過4株菌。3、紙片可保存于冰箱中，一般可保存9個月。但如果已知敏感的肺炎鏈球菌檢測為耐藥時，紙片應廢棄。PYR試驗原理細菌產(chǎn)生吡咯烷酮酰肽酶（PEP）、水解L-吡咯烷酮β-萘酚酰胺（PYR）基質(zhì)，釋放β-萘酚酰胺與試劑N，N-二甲氨基肉桂醛反應，產(chǎn)生桃紅色為陽性。操作：將被檢菌株接種上述試驗平板上，35℃過夜培養(yǎng)后，加入一滴PYR試劑于菌落上，1min后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷菌落出現(xiàn)桃紅色為陽性，即水解PYR陽性，若菌落呈黃褐色是陰性。PYR商品化產(chǎn)品血清分群診斷：A、B、C、D、F、GA群鏈球菌(化膿鏈球菌)主要鑒定要點

β溶血

桿菌肽敏感

PYR試驗陽性陰性陽性PYR試驗β溶血桿菌肽敏感臨床標本培養(yǎng)后混雜在口腔正常菌群中的化膿鏈B群鏈球菌（無乳鏈球菌）主要鑒定要點

β溶血

CAMP試驗陽性馬尿酸鈉試驗陽性CAMP試驗陽性β溶血

C群鏈球菌（似馬鏈球菌獸疫鏈球菌馬鏈球菌等

）馬尿酸鈉陰性6.5%氯化鈉陰性血清學分型C群桿菌肽耐藥主要鑒定要點馬鏈球菌β溶血

D群鏈球菌

（非腸球菌，牛鏈球菌等）主要鑒定要點膽汁七葉苷陽性6.5%氯化鈉陰性牛鏈球菌α溶血C、F、G群鏈球菌的鑒定：常需要血清學方法肺炎鏈球菌生物學特性菌落特點：血平板上菌落細小、α溶血、

圓形、表面光滑、灰白色、邊緣整齊，

開始扁平、以后中心塌陷，呈臍窩狀。鏡下形態(tài)：菌體矛頭狀成雙排列生化反應：Optochin敏感，膽汁溶菌試驗陽性。肺炎鏈球菌臍窩狀菌落粘液狀菌落肺炎鏈球菌Optochin敏感膽汁溶菌試驗陽性2號清亮陽性1號渾濁陰性肺炎鏈球菌乳膠凝集試驗陽性陰性對照陽性肺炎鏈球菌干點凝集試驗streptococcuspneumoniaeoxoiddryspot草綠色鏈球菌菌群試驗a甘露醇山梨醇VP精氨酸七葉苷變異鏈球菌群+++-+唾液鏈球菌群--+-+緩癥鏈球菌群-----咽峽炎鏈球菌群-b-b+b-+

草綠色鏈球菌的鑒定鑒

定

流

程觸酶試驗-G+球菌α溶血

β溶血

γ溶血

+Optochin試驗

-+膽汁溶菌試驗

-肺鏈牛鏈球菌及其他+CAMP試驗-

桿菌肽敏感PYR試驗陽性血清學分型

其他鏈球菌無乳鏈化膿鏈腸球菌屬分類正式命名的菌種有16個，分屬在5個群。生物學特性菌落特點：血平板上呈灰白、隆起、細小，α溶血或β溶血。鏡下形態(tài)：G+球菌,單個、成雙、短鏈。生化反應膽汁七葉苷試驗（+）6.5％NaCl生長試驗（+）PYR試驗（+）血清學分類屬D群糞腸球菌腸球菌屬分群試驗Ⅰ群Ⅱ群Ⅲ群Ⅳ群Ⅴ群甘露醇產(chǎn)酸++--+山梨糖產(chǎn)酸+----精氨酸水解-++--腸球菌屬Ⅰ群菌種的關鍵性試驗試驗鳥腸球菌淺黃腸球菌病臭腸球菌蒼白腸球菌假鳥腸球菌棉子糖腸球菌解糖腸球菌阿拉伯糖+----+-棉子糖-+++-++丙酮酸鹽+++-++-腸球菌屬Ⅱ群菌種的關鍵性試驗a試驗糞腸球菌屎腸球菌鉛黃腸球菌鶉雞腸球菌蒙氏腸球菌亞碲酸鹽+--c--動力--+c+c-EFRORSRRSMGP-b-++-色素--+-+甲基葡萄糖吡喃糖苷(Methyl廿D-GlucopyranosideMGP)產(chǎn)酸試驗1、配制含有10g／LMGP和0．006％溴甲酚紫的牛心浸液，分裝試管每管2ml，121℃滅菌10min。2、接種細菌(血平板上取數(shù)個菌落或過夜肉湯1滴)，孵育35℃1天，必要時可孵7天3、肉湯由紫變黃色表示陽性。幾個關鍵性試驗RapidMGPMedium(5h)Enterococcusgallinarum

(ATCC?49573)MGP+Enterococcusfaecalis(ATCC?29212)MGP--

sensitivity100%specificity96.5%依羅霉素(EfrotomycinEFRO)敏感試驗1、溶解100mgEFRO于0.1ml二甲亞砜中，再加蒸餾水9.9ml，取10μl至每1片濾紙片，置室溫暗處5～6h。2、大量接種細菌于胰酶大豆胨平板，放EFRO紙片，孵育35℃18~24h。3、出現(xiàn)任何抑菌環(huán)表示EFRO敏感。腸球菌屬Ⅲ群菌種的關鍵性試驗試驗豕腸球菌耐久腸球菌小腸腸球菌殊異腸球菌鼠腸球菌丙酮酸鹽---+-阿拉伯糖-----棉子糖--v+-蔗糖--++-MGP---+-EFRONDSSRND腸球菌屬Ⅳ群菌種的關鍵性試驗試驗驢腸球菌盲腸腸球菌硫磺色腸球菌山梨醇-+-色素--+丙酮酸鹽-+-MGP--+腸球菌屬Ⅴ群菌種與漫游球菌的鑒別菌種阿拉伯糖棉子糖丙酮酸鹽MGP動力鴿腸球菌+++--河流漫游球菌---++觸酶陰性其它屬的生物學特性革蘭陽性球菌臨床分布:Mohnarin2006-2007占31.3%;Mohnarin2008占31.68%;Mohnarin2009占30.59%;葡萄球菌64%腸球菌24%鏈球菌

10%其他2%2008年G+菌分布2009年G+菌分布葡萄球菌63.8%腸球菌22.8%鏈球菌10%其他3.4%革蘭陽性桿菌常見菌屬棒桿菌屬(Corynebacterium)李斯特氏菌屬(Listeria)丹毒絲菌屬(Erysipelothrix)分支桿菌屬(Mycobacterium)奴卡氏菌屬(Nocardia)紅球菌屬(Rhodococcus)產(chǎn)單核李斯特菌生物學特性菌落特點：BA上小、圓形、灰白色，產(chǎn)生狹窄β溶血環(huán)，營養(yǎng)瓊脂上圓形、光滑、透明鏡下形態(tài)：G+短小桿菌，多成雙排列生化反應：觸酶+4℃生長CAMP+

L.monocytogenesβ狹窄溶血環(huán)L.Monocytogenes豬紅斑丹毒絲菌生物學特性菌落特點：BA上形成兩種菌落，光滑型菌落細小、圓形、凸起有光澤；粗糙型菌落大，表面顆粒狀、邊緣卷發(fā)狀；延長培養(yǎng)時間可見α溶血鏡下形態(tài)：G+短小桿菌，單個、短鏈，或長絲狀生化反應：觸酶陰性氧化酶陰性液化明膠

H2S+ErysipelothrixrhusiopathiaeErysipelothrixrhusiopathiae(Gram,culture)快速生長分支桿菌（非結(jié)核分支桿菌）生物學特性最常見菌種有：偶發(fā)分支桿菌、膿腫分支桿菌、龜分支桿菌菌落特點：快速生長的分枝桿菌區(qū)別于結(jié)核分枝桿菌，它們在血平板和麥康凱平板上3-7天便可生長，單個菌落、菌落分為粗糙型和光滑型鏡下形態(tài)：G+桿菌、直或微彎曲生化反應：抗酸染色陽性星型奴卡氏菌生物學特性菌落特點：BA上菌落粗糙、干燥，黃色或深黃色，有時帶有“泥土”味道鏡下形態(tài)：G+

絲狀生化反應：抗酸染色陽性（1%硫酸脫色）37℃5%CO2條件下，星型奴卡菌在沙保弱或普通培養(yǎng)基，2-6天內(nèi)生長成肉眼可見的黃色或橘黃色菌落革蘭陽性菌，具有弱抗酸性（1%硫酸脫色）是它的特點馬紅球菌生物學特性菌落特點：BA上1-2mm菌落，繼續(xù)培養(yǎng)可見大、粘液樣淡橘紅色到粉紅色菌落鏡下形態(tài)：G+桿菌，多型性生化反應：觸酶+，氧化酶-，不分解任何糖類，CAMP+馬紅球菌粘液樣菌落CAMP試驗：（中間為金葡菌，兩側(cè)為馬紅球菌，羊血平皿。）

Rhodococcusequi(culture,Gram)

需氧革蘭陽性芽孢桿菌炭疽芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌地衣芽孢桿菌炭疽芽孢桿菌是最大的革蘭氏陽性桿菌兩端截平在動物或人體標本中單個或短鏈狀排列有明顯莢膜培養(yǎng)后呈長鏈如竹節(jié)狀無鞭毛在有氧和溫度適宜（25℃

～30℃）環(huán)境下易形成橢圓形芽孢位于菌體中央折光性強生物學特性需氧或兼性厭氧菌生長要求不高最適溫度為30℃～35℃普通瓊脂培養(yǎng)基上形成灰色扁平干燥粗糙型菌落邊緣呈卷發(fā)狀血平板上不溶血或弱溶血液體培養(yǎng)基中生長卷繞成團呈絮狀沉淀物液體澄清無菌膜炭疽芽孢桿菌鏡下形態(tài)Bacillusanthracis產(chǎn)毒株在含有0.7%碳酸氫鈉營養(yǎng)瓊脂上

5%～7%CO2環(huán)境孵育過夜可產(chǎn)生莢膜形成黏液型菌落無毒株為粗造型能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖有些菌株能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能分解淀粉不發(fā)酵鼠李糖、半乳糖等能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽明膠液化V-P試驗不定不產(chǎn)生吲哚和硫化氫不利用枸櫞酸鹽不分解尿素卵磷脂酶陽性觸酶陽性明膠液化硝酸鹽還原枸櫞酸鹽硫化氫尿酶卵磷脂酶吲哚觸酶鞭毛芽孢形態(tài)位置＋＋－－－＋－＋－橢圓中央葡萄糖麥芽糖海藻糖甘油水楊酸鼠李糖淀粉半乳糖＋＋＋＋w＋w－＋－發(fā)酵糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣w遲緩炭疽芽孢桿菌生化反應炭疽桿菌的抗原分為兩類細菌性抗原包括菌體多糖抗原、莢膜多肽抗原和芽胞抗原炭疽毒素外毒素復合物人的主要傳染源為病畜和死畜主要傳播途徑為攝入污染食物或皮膚接觸引起肺皮膚腸炭疽病均可并發(fā)敗血癥和炭疽性腦膜炎被列為生物恐怖武器潛在性病原菌臨床意義炭疽芽孢桿菌是人畜共患急性傳染病——炭疽病的病原菌皮膚炭疽蠟樣芽孢桿菌革蘭氏陽性大桿菌生長6小時后形成圓形芽胞位于菌體中心或次末端不突出菌體菌體兩端不平整多成鏈狀排列引起食物中毒的菌株多為周毛菌有動力不形成莢膜生物學特性需氧或兼性厭氧營養(yǎng)要求不高普通營養(yǎng)瓊脂生長良好最適溫度為35℃菌落較大灰白色不透明常沿劃線蔓延擴展成片如同白蠟血瓊脂平板菌落淺灰色毛玻璃樣伴草綠色溶血或呈β-溶血蠟樣芽孢桿菌鏡下形態(tài)β-溶血顯色平板卵黃培養(yǎng)基上培養(yǎng)3h后尚未見細菌集落但能看到卵磷脂分解形成白色渾濁環(huán)——燭光反應液體培養(yǎng)基