實驗室職業(yè)防護和生物安全課件

實驗室生物安全和職業(yè)防護上海市臨床檢驗中心

1涉及病原微生物實驗室生物安全法律法規(guī)與監(jiān)督管理法律:

中華人民共和國傳染病防治法法規(guī):

病原微生物實驗室生物安全管理條例、醫(yī)療廢物管理條例規(guī)章:

傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動物模型的暫行管理辦法、傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法、人間傳染的病原微生物名錄

標準:《實驗室生物安全通用要求》（GB19489－2008）、《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》（WS233－2002）、《生物安全實驗室建設技術規(guī)范》規(guī)范:

上海市病原微生物實驗室生物安全管理實施細則、上海市一、二級病原微生物實驗室生物安全管理規(guī)范

2重硬件，輕軟件把生物安全當做科學實驗之外的“行政”任務誰來強制執(zhí)行？目前存在的普遍問題3HBV、HCV和HIV職業(yè)感染的相對危險性病毒HBVHCVHIV健康工作者的血清陽轉率（%）3－351－280.12－0.4每ml血中病毒顆粒數(shù)102－10810－10610－103針頭刺傷的傳播概率6－300.75－100－3美國CDC5全球衛(wèi)生保健人員被針刺傷

病種 傳染力 流行率

(中國)

HBV 30%

14%HCV 6%

4.1%HIV 0.3%

<0.1%6健康工作者HIV感染的職業(yè)危險暴露類型經(jīng)皮損粘膜經(jīng)皮損和粘膜未知皮膚報告數(shù)量截至99年6月475210單次HIV暴露的危險性（％）0.30.03<0.037上海市發(fā)生HIV職業(yè)暴露疾控中心

醫(yī)院

婦產(chǎn)科

護士

檢驗科9要求做的幾個要素組成生物安全組織體系生物安全危害評估，明確危害防護等級建立實驗室生物安全防護設施設備建立實驗室生物安全手冊，包含安全行為規(guī)范、安全操作規(guī)程、培訓、健康監(jiān)護、應急處置預案10上海市臨床檢驗實驗室生物安全實施方法實驗室生物安全自我評估,明確防護等級向當?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門上報備案人員培訓，合格頒上崗證當?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門現(xiàn)場檢查當?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門批準11實驗室主要生物危害途徑13不同病原微生物的感染劑量14Aerosolgenerating15操作一次可產(chǎn)生各種嚴重程度微生物氣溶膠的活動17實驗室感染傳播鏈及其控制手段容器中的病原體泄漏預防接種感染途徑/感染劑量傳播個人防護裝備易感宿主規(guī)程/設備潛伏期傳染病監(jiān)測18危害評估的原則病原微生物危害程度不同的實驗活動19《病原微生物實驗室生物安全管理條例》第一類

是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物

第二類

是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物

第三類

是指能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物第四類

是指在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物

21不同的實驗活動的危害對于同一病原微生物而言，從事不同的實驗活動，操作者接觸微生物的數(shù)量、濃度、可能的感染途徑是不同的，一旦暴露，其后果也是不同的對于不同的實驗活動均應進行危害評估，以指導操作者采取合適的生物安全防護

2223生物安全實驗室

操作技術規(guī)范25所有操作人員必須經(jīng)過培訓，通過考核，獲得上崗證書；在開始相關工作之前，應對所從事的病原微生物及相關操作進行危險評估，根據(jù)國家對于各種微生物操作的危險等級劃分和防護要求以及危險評估的結果，制定全面、細致的標準操作規(guī)程和程序文件，對于關鍵的危險步驟設計出可行的防護措施并對這些細節(jié)了然于胸；熟悉各級生物安全實驗室運行的一般規(guī)則，掌握各種儀器、設備、裝備的操作步驟和要點，對于各種可能的危害應非常熟悉；應掌握各種感染性物質(zhì)操作的一般準則和技術要點。生物安全意識至關重要26安全設備（初級屏障）防護服實驗室工作外套手套29安全設備（初級屏障）人員防護設備面部保護眼部保護30安全設備（初級屏障）高壓滅菌鍋洗眼/噴淋裝置31一、BSL-2實驗室32BSL-133BSL-2標準的BSL-2實驗室除了滿足BSL-1的要求以外，在門上增加了生物危險標志、II級生物安全柜。按國標（GB19489-2008）,還要配備高壓蒸汽滅菌器、洗眼器34BSL-2必須強調(diào)對污染的針頭或利器的使用要非常謹慎。對易于通過氣溶膠途徑傳播的微生物、具有增加工作人員暴露氣溶膠或高度飛濺物的程序二級生物安全防護水平微生物操作必需在一級生物安全防護水平的基礎之上，增加生物安全柜、高壓滅菌器、安全離心機罩帽、防濺罩或面罩等。35（一）實驗室的進入未經(jīng)批準，任何人不得進入實驗室工作區(qū)域。兒童不得進入實驗室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險性或感染后可能引起嚴重后果的人員不允許進入實驗室或動物房。BSL-2實驗室門上應標有國際通用的生物危害警告標志，包括通用的生物危險性標志，標明傳染因子、實驗室負責人或其他人姓名、電話、以及進入實驗室的特殊要求。實驗室的門應保持關閉。工作人員進入動物房應當經(jīng)過特別批準。與實驗室工作無關的動物不得帶入實驗室。363738（二）防護要求在實驗室工作時，必須穿著合適的工作服或防護服。在進行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動物的操作時，應戴上合適的手套。手套用完后，應先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實驗材料和動物后，以及在離開實驗室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護設備。嚴禁穿著實驗室防護服離開實驗室工作區(qū)域。不得在實驗室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實驗室工作區(qū)域進食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。在實驗室內(nèi)用過的防護服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。39（三）有關操作的指導原則嚴禁用口吸移液管,嚴禁將實驗材料置于口內(nèi)。嚴禁舔標簽。所有的實驗操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來進行。應限制使用注射針頭和注射器。除了進行腸道外注射或抽取實驗動物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他用途。實驗室應制訂并執(zhí)行處理溢出物的標準操作程序。出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時，必須向實驗室負責人報告。實驗室應如實記錄有關暴露和處理的情況，保存相關記錄。污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學或物理學方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險度評估結果準備專門的污水處理系統(tǒng)。只有保證在實驗室內(nèi)沒有受到污染的文件紙張才能帶出實驗室40針與鋒利器具的防范4142（四）實驗室工作區(qū)的管理原則實驗室應保持清潔整齊，嚴禁擺放和實驗無關的物品。每天工作結束后應清除工作臺面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應立即清除污染。所有受到污染的材料、標本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先清除污染。感染性材料的包裝和運輸應遵循國家和∕或國際的相關規(guī)定。如果窗戶可以打開，則應安裝防止節(jié)肢動物進入的紗窗。43（五）生物安全管理的指導原則實驗室負責人負責制訂和采用生物安全管理計劃以及實驗室安全或/和操作手冊。實驗室應能提供常規(guī)的實驗室安全培訓,并建立制度。實驗室負責人（或生物安全負責人）要將生物安全實驗室的特殊危害告知實驗室人員，同時要求他們閱讀生物安全或/和操作手冊，并遵循標準的操作程序。實驗室內(nèi)應備有可供取閱的安全或/或操作手冊。所有實驗室人員必須經(jīng)過培訓，了解所從事工作的危險、掌握有關的管理規(guī)定和操作程序，通過考核后方可從事相關實驗室工作。應當制訂節(jié)肢動物和嚙齒動物的控制方案。如有必要，應為所有實驗室人員提供適宜的醫(yī)學評估、監(jiān)測和治療，并建立健康檔案。實驗室人員應接受與所操作生物因子或實驗室內(nèi)潛在的因子相關的免疫接種或檢測。44生物安全柜的使用

4546II級生物安全柜的氣流方向474849生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理當發(fā)生少量溢灑時，應用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對生物安全柜及其內(nèi)部的所以物品進行擦洗。工作面消毒后應更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。若發(fā)生大量溢灑，液體會通過生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應該進行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關閉后，可將消毒液倒在工作臺面上，使液體通過格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒和/或高壓滅菌處理。50病毒分離時液體落下消毒用70％酒精擦拭51實驗室儀器設備的使用52儀器相關危險干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出皮下注射針頭意外接種產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出離心機產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂超速離心機管子破裂高速攪拌器，組織勻漿器飛沫、滲漏和容器破裂超聲波破碎機、超聲波清潔器產(chǎn)生氣溶膠、聽力受損、皮炎凍干機（冷凍干燥機）產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染水浴微生物生長，疊氮化鈉和一些金屬形成爆炸復合物53二、離心機的使用離心分類

轉頭轉速（rpm）

微速離心

～15,00

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

54離心可能造成的傷害途徑離心機機械故障實驗器材故障，如離心管等

產(chǎn)生氣溶膠；

操作者失誤。55所有的離心機應處于正常的工作狀態(tài)并具有合格的機械性能，要根據(jù)廠家的說明書進行操作。離心機應放到適宜的位置和高度，以使工作人員能看見離心桶并便于進行各項操作。用于離心的離心管和標本容器應該根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，而且在使用前應檢查有無破損。必須在安全柜內(nèi)打開蓋子。使用轉頭時應注意轉頭蓋與轉頭型號是否匹配。操作病原微生物時，離心桶的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進行。空離心桶配平時應該用蒸餾水或70％乙醇、異丙醇，不應使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應留出一定空隙，以確保離心過程中液體不會溢出，尤其是使用角轉頭時更要注意。應該每天檢查在特定的轉速下，離心杯的內(nèi)表面有無污物。離心轉頭和離心桶應每天檢查有無腐蝕點以及極細的裂縫，以確保安全。離心桶、轉頭和離心機腔每次用后都應該消毒。每次用后，應該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體。56對于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過程中產(chǎn)生的氣溶膠風險。－大型離心機上應加裝負壓罩，以及時吸出離心機排出的氣體，并排至實驗室的過濾通風系統(tǒng)，在BSL-3及以上級別實驗室尤其要注意。－微型離心機則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對安全柜氣流的影響。－如果不能在安全柜內(nèi)離心也無負壓罩，則必須將密封的轉頭在安全柜內(nèi)打開。－所有的離心管必須帶蓋密封，其開啟應在安全柜內(nèi)進行。57雙重鎖定轉頭蓋58生物安全轉頭

樣品瓶外套是轉頭的一部分樣品瓶可于安全柜內(nèi)打開保證漏出的樣品保留在瓶內(nèi)59三、攪拌器、振蕩器、混勻器和超聲波破碎儀的使用使用的管子、蓋子、杯子或瓶子都應該保持完好，無裂隙、無變形。蓋子、墊圈應恰好配套，保持完好。在混勻、振蕩和超聲波破碎過程中，器皿內(nèi)的壓力會增大，含有感染性材料的氣溶膠可能會從容器和蓋子間的空隙逸出。推薦使用塑料的，特別是聚四氟乙烯（PTFE）器皿，因為玻璃可能會破裂，釋放出感染性物質(zhì)，而且可能傷及操作者。當使用勻漿器、振蕩器和超聲波破碎儀時，應有防護裝置，在生物安全柜里操作。使用渦旋振蕩器時，必須在生物安全柜內(nèi)操作，并且操作的容器必須為密閉的，以避免產(chǎn)生氣溶膠和發(fā)生液體濺灑。在操作結束后，應在生物安全柜里開啟容器。操作人員使用超聲波破碎儀時，應有耳部聽力保護裝置。60四、組織研磨器的使用使用玻璃的研磨器時，應戴上手套，手里再墊上一塊柔軟的紗布后操作。塑料（PTFE）的研磨器更安全。組織研磨器應該在生物安全柜里操作和開啟。61五、冰箱和速凍器的使用和保養(yǎng)冰箱、低溫冰箱和固體干冰盒要定期除霜和清掃。其中所有的安瓿、凍存管等在貯存過程中已破裂的要及時拿走。在清掃的過程中應配戴面部保護裝置并戴手套，清掃后，抽屜內(nèi)表面應消毒處理。所有保存在冰箱里的容器等，都應該有清楚的標簽，并且標簽上有內(nèi)容物的科學命名、貯存日期和貯存人姓名。無標簽的和過期的材料應高壓滅菌后丟棄。對于冰箱內(nèi)的儲存物應有詳細的目錄。除非有防爆措施，嚴禁將易燃液體保存在冰箱里，冰箱的門上應張貼這方面的注意事項。62六、凍干機的使用對于高致病性病原微生物應在BSL-3或以上級別實驗室進行凍干。凍干機排出的氣體要經(jīng)過HEPA過濾并將排出管道插入裝有消毒液的容器中。對于凍干高致病性病原微生物產(chǎn)生的冷凝水應收集入消毒液容器中并高壓滅菌處理。凍干機的機艙恢復到室溫后用適宜的消毒液擦拭。63實驗室內(nèi)標本的安全操作（一）標本容器用于裝盛感染性標本的容器可以是玻璃的，但為了保證安全，最好采用塑料制品（根據(jù)實際需要而定）。標本的容器應當堅固，不易破碎，蓋子或塞子蓋好后不應有液體滲漏。所有的標本都應存放在容器內(nèi)。容器應正確地貼上標簽以利于識別，標簽上應有樣品名稱、采集日期、編號等必要的信息。樣品的有關表格和/或說明不要綁在容器外面，而應單獨放在防水的袋子里，以防止發(fā)生污染而影響使用。6465（二）標本的實驗室內(nèi)運輸

為防止發(fā)生意外滲漏或溢出而威脅操作者的安全，在實驗室內(nèi)運輸標本時，應使用金屬的或塑料材質(zhì)的第二層容器（如盒子）加以包裹，在第二層容器中應該有標本容器的支架，將標本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二層容器應耐高壓或者能抵抗化學消毒劑的腐蝕，以便定期清除污染。封口處最好有一個襯圈，以防止發(fā)生滲漏。66（三）標本的接收大規(guī)模接收標本的實驗室應在一個專用的房間或區(qū)域進行。對于病原已知的按國家規(guī)定可在BSL-2操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低應在一個專用區(qū)域或房間接受，并在生物安全柜內(nèi)打開外包裝，操作人員應穿防水的防護服，戴生物安全專用口罩和眼罩、手套。按國家規(guī)定需要在BSL-3或以上級實驗室操作的病原微生物或標本，應按國家規(guī)定的防護等級，在相應級別的實驗室的安全柜內(nèi)打開，并采取相應的防護措施為保證安全。不應在普通的BSL-1實驗室接受標本。67（四）標本包裝的打開接收并打開標本包裝的人員應受過防護培訓（尤其是處理破裂的或滲露的容器）并應知道所操作標本的潛在的健康危害，操作時要采取合適的防護措施。所有標本應該在生物安全柜里打開包裝，同時備有消毒劑以便隨時處理可能出現(xiàn)的標本泄漏。打開包裝前應先仔細檢查每個容器的外觀、標簽是否完整，標簽、送檢報告與內(nèi)容物是否相符，是否有污染以及容器是否有破損等，要登記詳細的報告單并記錄處置方法。接受標本應由2人進行。68（五）標本管或標本容器的打開標本管應該在生物安全柜里打開。必須戴手套。推薦使用眼部和粘膜保護裝置[護目鏡或面罩（頭盔）]。防護服外應再戴一個塑料圍裙。打開標本管的塞子時，應在手里先墊上一塊紙或紗布再握住塞子，防止濺出。

69（六）消毒推薦使用次氯酸鹽和高級消毒劑進行消毒。一般新配制的次氯酸鹽溶液有效氯含量應為1g/L，但用于消毒溢出的血液，有效氯含量則應為5g/L。戊二醛可用于表面消毒。70用于顯微鏡觀察的薄膜和涂片的操作用顯微技術檢測固定并染色的血液、痰和排泄物等標本時，可能并未殺死涂片上的所有微生物和病毒，所以這些涂片等物品應用鑷子來操作，妥善保存，并且在丟棄以前要消毒和/或高壓滅菌。

71實驗室操作與技術：采用機械式移液裝置

72實驗室操作與技術：洗手73健康和醫(yī)療監(jiān)測確保實驗室人員的健康狀況得到足夠監(jiān)測。這樣做的目的是監(jiān)控因職業(yè)而導致的疾病可通過以下工作達到上述目的：根據(jù)需要，提供主動或被動免疫為實驗室獲得性感染的早期檢測提供便利杜絕高度易感人群（如孕婦）從事高危險性的實驗室工作提供有效的個體防護設施及規(guī)程74健康監(jiān)測1．應指定專人負責健康監(jiān)測工作。應當具有與該實驗室中所操作的病原微生物有關的傳染病防治知識，及時調(diào)查、了解實驗室工作人員的健康狀況。2．常規(guī)監(jiān)測開展實驗室工作前對實驗室人員進行健康體檢并建立健康檔案，對實驗室人員進行定期臨床檢查，實行系統(tǒng)監(jiān)測。采集本底血清標本并長期保存。

753．實驗室工作人員必須在身體狀況良好的情況下，才能進入BSL-2以上級別的實驗室工作出現(xiàn)下列情況，不應進入上述區(qū)域：患發(fā)熱性疾??；感冒、上呼吸道感染、或其他導致抵抗力下降的情況；妊娠；已經(jīng)在實驗室控制區(qū)域內(nèi)連續(xù)工作4h以上，或其他原因造成的疲勞狀態(tài)。4．進入BSL-3及以上級別實驗室工作的相關人員，應每日早、晚測量體溫并觀察相應癥狀；結束實驗室工作后，應繼續(xù)進行相應時段（相關疾病的平均潛伏期）的健康監(jiān)測。一旦出現(xiàn)異常情況應立即報告實驗室負責人，以便及時采取相應控制措施。健康監(jiān)測76實驗室工作人員的就醫(yī)程序1實驗室工作人員，一旦出現(xiàn)與本實驗室從事的病原微生物相關的臨床癥狀或者體征時，實驗室負責人應當立即向本單位生