抗血清的制備實驗

抗血清的制備實驗第1頁/共34頁選擇合適的抗原分離純化抗原選擇免疫動物確定免疫方案和程序免疫動物采血分離血清抗血清的純化與鑒定抗血清制備的基本流程第2頁/共34頁設(shè)計實驗方案的設(shè)計1.設(shè)計本實驗的理由（實驗?zāi)康模?.實驗方案設(shè)計。3.可行性（理論、人員、實驗條件等）。4.創(chuàng)新性。5.本實驗要解決的主要問題。6.預(yù)期目標(biāo)。每個組交一份實驗方案（3-4個同學(xué)一組）第3頁/共34頁論文式實驗報告一、題目的選擇1、準(zhǔn)確、具體、簡潔、醒目，使人一目了然，引起重視2、作者與單位(班級)，并注明所在班級和指導(dǎo)教師姓名。3、摘要和關(guān)鍵詞摘要是對論文主要內(nèi)容和觀點的概括第4頁/共34頁論文式實驗報告二、關(guān)鍵詞又稱主題詞或索引詞，一篇論著(論文)一般選用2～5個關(guān)鍵詞第5頁/共34頁論文式實驗報告三、引言(前言)引言是論文正文的開場白1、引起讀者對本論文的興趣。2、為讀者提供理解本論文所需的背景資料。第6頁/共34頁論文式實驗報告四、材料與方法材料1、實驗對象2、實驗材料3、實驗分組4、實驗過程和方法6、數(shù)據(jù)處理等內(nèi)容。第7頁/共34頁論文式實驗報告五、結(jié)果：結(jié)果是實驗研究成果的結(jié)晶第8頁/共34頁論文式實驗報告六、討論1.11.21.3對實驗結(jié)果解釋和評價第9頁/共34頁論文式實驗報告七、參考文獻(xiàn)期刊：著者．文章名．刊物名稱，卷或年(期)：文章的起訖頁碼書籍：編著者．書名．版本．出版地：出版者，年份第10頁/共34頁一、顆粒性抗原的制備（2%~5%RBC的制備）（1）靜脈采血2-3ml，注入抗凝管中，輕輕混勻。（2）洗滌RBC將上述抗凝血移至10ml試管中，加入NS6-7ml，混勻，2500r/min離心5min,去上清。重復(fù)上述操作三次，最后一次去上清后，將紅細(xì)胞配制成2%~5%的RBC懸液。第11頁/共34頁2、取上述RBC懸液1ml免疫家兔。免疫部位：靜脈、皮內(nèi)、皮下等。每只兔子免疫8~10點，每點0.1ml左右。每隔2~4天免疫一次。第12頁/共34頁1班免疫時間表每隔2天免疫一次第13頁/共34頁2班免疫時間表每隔3天免疫一次第14頁/共34頁3班免疫時間表每隔4天免疫一次第15頁/共34頁3、心臟采血10ml，凝固后，分離血清（2000轉(zhuǎn)/min,5分鐘)。4、取兩支小試管并以A、B標(biāo)記之，將上述血清一半加入A管，另一半加入B管。將A管置于56℃水浴箱30分鐘（滅活補體）。第16頁/共34頁5、抗血清效價的鑒定。凝集試驗和溶血反應(yīng)第17頁/共34頁

凝集反應(yīng)第18頁/共34頁實驗原理指顆粒性抗原(RBC)與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，在適當(dāng)電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的凝集現(xiàn)象。第19頁/共34頁試管凝集試驗過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第20頁/共34頁3.向第一支試管中加入A管血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。第21頁/共34頁4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。(取出試管1500r/s30秒)觀察結(jié)果。第22頁/共34頁試管凝集操作程序(倍比稀釋法)管號12345678對照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/641/1281/256--棄去單位：uL第23頁/共34頁[結(jié)果判斷]選擇適當(dāng)?shù)墓獍祵Ρ缺尘?，先不要振搖，觀察管底凝集物的范圍和上清液的濁度。然后輕輕搖動試管，注意觀察凝集顆粒的大小、均勻度等。每一試管的觀察，都應(yīng)與對照管進(jìn)行比較。鹽水對照管誚無凝集現(xiàn)象，輕輕搖動試管則RBC分散成均勻混濁；而凝集塊則沉于管底，輕搖時不易散開，凝集程度通常以“+”表示：第24頁/共34頁“4+”很強(qiáng)，全部RBC凝集，凝集塊全部沉于管底，液體澄清?！?+”強(qiáng)，RBC大部分凝集并沉于管底，液體稍混濁?！?+”中等強(qiáng)度，RBC大約一半凝集，液體較混濁。“+”弱，僅少量RBC凝集，液體明顯混濁。“--”不凝集，液體混濁與對照管相同。只要待測血清管出現(xiàn)“2+”以上的凝集現(xiàn)象，即可判斷為反應(yīng)陽性；以出現(xiàn)“2+”凝集的最大稀釋度為待測血清的抗體效價。第25頁/共34頁

溶血試驗第26頁/共34頁實驗原理

溶血反應(yīng)是指補體參與的抗體致紅細(xì)胞的溶解反應(yīng).參與反應(yīng)的成分有紅細(xì)胞、抗紅細(xì)胞抗體，也稱溶血素、補體。第27頁/共34頁溶血反應(yīng)實驗過程1.取潔凈小試管8支，排列于試管架上，依次編號。2.向各管中加入生理鹽水200ul。第28頁/共34頁3.向第一支試管中加入血清200ul，充分混勻，吸出200ul放入第二管，混勻后取出200ul加入第三管中，如此類推直至第七管，混勻后取出200ul棄去。第八管不加血清，為生理鹽水對照管。至此，第1~7管的血清稀釋度分別為：1：2，1：4，1：8……1：128。這種稀釋方法稱為連續(xù)倍比稀釋法，為免疫試驗中常用的稀釋方法。第29頁/共34頁4.向每管加入200ul2%RBC懸液，此時每管的液體總量為400ul，血清稀釋度又增加1倍。5.搖勻，置37℃30min。觀察結(jié)果。第30頁/共34頁溶血反應(yīng)操作程序(倍比稀釋法)管號12345678對照生理鹽水200200200200200200200200血清200200200200200200200RBC200200200200200200200200終稀釋度1/41/81/161/321/641/1281/256--棄去單位：