分離以尿素為氮源的微生物課件

實驗2分離以尿素為氮源的

細菌

尿素NH3中性堿性

酚紅顏色：

黃色

紅色(變色范圍pH6.4-8.2)任務(wù)1：怎么從土壤中分離出它們呢？利用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基進行篩選。配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g酚紅0.25g

尿素10ml選擇培養(yǎng)基瓊脂是未被純化的混合物,內(nèi)含一定量的含氮化合物2、要驗證以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基對土壤中的細菌確實具有選擇作用，你該如何設(shè)計實驗。思考：配制培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基葡萄糖0.025gNaCl0.12gK2HPO40.12g

瓊脂糖0.5g酚紅0.25g

尿素10mlLB培養(yǎng)基蛋白胨：0.25g酵母粉：0.12gNaCl：0.25g瓊脂糖：0.5g

對照組選擇培養(yǎng)基實驗組3、請你提供一種方法，判斷分解尿素的細菌確實能將尿素分解成氨。思考：方法：在以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,接種培養(yǎng)該細菌，若指示劑變紅，說明該種菌分解了尿素。三、實驗中涉及到的一些問題：（一）哪些土壤中含有這種以尿素為氮源的微生物多？（選材的問題）（二）此實驗用到的選擇培養(yǎng)基必需含有哪些物質(zhì)？（三）可用什么指標認定不同土壤中選擇出的微生物對尿素分解能力的高低？（四）統(tǒng)計微生物的數(shù)量可用哪些方法？沒硬化，腐殖質(zhì)豐富的土壤碳源、尿素、無機鹽、水、酚紅培養(yǎng)基紅色的深淺稀釋涂布平板法，顯微鏡直接計數(shù)法三、實驗中涉及到的一些問題：（五）用稀釋涂布平板法計數(shù)時，菌落數(shù)在30-300計數(shù)。重復性原則對照原則（排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗的可信度）做一系列濃度梯度實驗，探究合適的稀釋度（六）實驗設(shè)計要遵循的原則：過濾滅菌后的尿素配制菌懸液1個99ml無菌水2個4.5ml無菌水得10-2,10-3,10-4的菌懸液1g土壤倒平板需要倒3個LB平板，9個尿素平板LB(對照)尿素10-310-410-5每個稀釋度1個LB對照平板3個尿素平板(平行重復組)接種取0.1ml菌懸液涂布分離37℃倒置培養(yǎng)按濃度捆成一摞恒溫37℃培養(yǎng)利用血球計數(shù)板的缺點:不能區(qū)分死菌與活菌不適于對運動的細菌計數(shù)需要相對高的細菌濃度個體小的細菌在顯微鏡底下難以觀察5.在做分離分解尿素的細菌實驗時，A同學從對應(yīng)106培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。A同學的結(jié)果產(chǎn)生原因可能有()①由于土樣不同②由于培養(yǎng)基污染③由于操作失誤④沒有設(shè)置對照A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④A

練習題1、選擇培養(yǎng)基：在微生物學中，將允許

種類的微生物生長，同時

和

其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

阻止

特定抑制2、常用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。當樣品的

足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個

。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在

的平板進行計數(shù)。此外，測定微生物數(shù)量的常用方法還有