藥物分析第十章課件

高職高專系列教材配套電子教案高等教育出版社高等教育電子音像出版社主編張駿（第一版）藥物分析高職高專系列配套電子教案目錄緒論第一章藥物分析基礎(chǔ)知識第二章藥物物理常數(shù)測定法第三章藥物的雜質(zhì)檢查方法第四章芳酸及其酯類藥物分析第六章巴比妥類藥物分析

第七章雜環(huán)類藥物分析

第八章生物堿類藥物分析

第九章糖、苷類藥物分析第十章甾體激素類藥物分析

第五章胺類藥物分析高職高專系列配套電子教案目錄第十二章抗生素類藥物分析

第十三章藥物制劑分析

第十四章中藥制劑和生化藥物的分析第十五章質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂

第十一章維生素類藥物分析

一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析基本母核——環(huán)戊烷駢多氫菲第十章甾體激素類藥物分析第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析二、鑒別試驗(yàn)三、雜質(zhì)檢查四、含量測定本章內(nèi)容

（一）腎上腺皮質(zhì)激素（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素

（三）孕激素（四）雌激素（五）其它激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析返回

（一）腎上腺皮質(zhì)激素第十章甾體激素類藥物分析本類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）具有21個(gè)碳原子（2）A環(huán)具有△4-3-酮基的α，β-不飽和羰基結(jié)構(gòu)（3）C17具有α-醇酮基并多數(shù)有α-羥基（4）C10、C13具有角甲基；C11具有羥基或酮基（5）其它：有些皮質(zhì)激素具有△1，6α、9α-鹵素，16α-羥基，6α、12α、16α、16β-甲基等。

一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析

（一）腎上腺皮質(zhì)激素第十章甾體激素類藥物分析例如，氫化可的松、醋酸地塞米松、曲按西龍、地塞米松磷酸鈉等等。一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析氫化可的松

（一）腎上腺皮質(zhì)激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析返回

（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析

第十章甾體激素類藥物分析本類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）具有19個(gè)碳原子（2）蛋白質(zhì)同化激素具18個(gè)碳原子（C10上無角甲基）（3）A環(huán)具有△4-3-酮基；（4）C17上無側(cè)鏈，多數(shù)是一個(gè)β-羥基，有些是由該羥基形成的酯，有些具有α-甲基。一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析（二）性激素—雄性激素及蛋白同化激素返回

（三）孕激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析孕激素也稱為黃體激素或孕酮，其典型藥物為黃體酮。典型的藥物有黃體酮、醋酸甲羥孕酮（安宮黃體酮）等。其結(jié)構(gòu)如下：

（四）雌激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析雌激素又稱為卵泡激素。主要是雌二醇及其各種酯和炔雌醇及其衍生物。其典型藥物的主要結(jié)構(gòu)如下：

（四）雌激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析本類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）具有18個(gè)碳原子（2）A環(huán)為苯環(huán)（3）C3上具有酚羥且有些形成了酯或醚（4）C10上無角甲基（5）C17具有β-羥基或酮基，有些羥基形成了酯，還有些具有乙炔基。

返回

（五）其它激素第十章甾體激素類藥物分析一、藥物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關(guān)系分析除上述四種甾體激素外，中國藥典（2005年版）還收載了口服避孕藥物，如炔諾酮(norethisterone)、炔諾孕酮(norgestrel)、炔孕酮（ethisterone）等，其典型結(jié)構(gòu)藥物結(jié)構(gòu)如下：

（一）與強(qiáng)酸呈色反應(yīng)（二）官能團(tuán)的反應(yīng)（三）氧化還原反應(yīng)（四）沉淀反應(yīng)（五）衍生物熔點(diǎn)第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)（六）水解反應(yīng)（七）薄層色譜法（八）高效液相色譜法（九）紫外分光光度法（十）紅外吸收光譜法返回

（一）與強(qiáng)酸呈色反應(yīng)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)1.許多甾體激素能與硫酸、磷酸、高氯酸、鹽酸等呈色，其中以與硫酸的呈色反應(yīng)應(yīng)用較廣。2.試劑：硫酸的呈色反應(yīng)中最常用的試劑為甲醇和乙醇，而稀釋反應(yīng)體系的試劑常為稀硫酸或水。

3.應(yīng)用實(shí)例：以氫化可的松的鑒別為例取本品約2mg，加硫酸2ml使溶解，放置5分鐘，顯棕黃色至紅色，并顯綠色熒光；將此溶液傾入10ml水中，即變成黃色至橙黃色，并微帶綠色熒光，同時(shí)生成少量絮狀沉淀。返回

（二）官能團(tuán)的反應(yīng)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)1.酮基的呈色反應(yīng)：甾體激素分子中，大多在C3和C20位上含有酮基，能與羰基試劑肼發(fā)生呈色反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)腙。原理：常用的試劑：2,4—二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼。

H2NNHNO2NO2

H2NNHCON

（二）官能團(tuán)的反應(yīng)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)3.甲酮基的呈色反應(yīng)

：具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物亞硝基鐵氰化納芳香醛呈色黃體酮其他甾體亞硝基鐵氰化納藍(lán)紫色（靈敏、專屬）淡橙色或不顯色

（二）官能團(tuán)的反應(yīng)第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)4.有機(jī)氟的呈色反應(yīng)：含氟的甾體激素藥物

氧瓶燃燒F—茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰顯藍(lán)紫色返回（四）沉淀反應(yīng)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)含炔基的甾體激素硝酸銀銀鹽沉淀返回（五）衍生物熔點(diǎn)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)△黃體酮鹽酸羥胺

黃體雙酮肟↓m.p.235~240℃m.p.200~202℃KOH炔雌醇苯甲酰氯

苯甲酸酯

（五）衍生物熔點(diǎn)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)m.p.約182℃△苯丙酸諾龍

鹽酸氨基脲苯丙酸諾龍的縮氨脲衍生物

丙酸睪丸酮

醇制KOH

△丙酸睪丸酮的水解產(chǎn)物

m.p.150～156℃

返回（六）水解反應(yīng)

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及己酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來鑒別。

醋酸可的松

醇制KOHH2SO4醋酸乙酯（香氣）返回（七）薄層色譜法

第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)（八）高效液相色譜法通過比較供試品和對照品保留時(shí)間的一致性，進(jìn)行鑒別（九）紫外分光光度法

本類藥物的分子中存在共扼結(jié)構(gòu)（和），具紫外吸收。如：△４-3-酮λmax240nm；苯環(huán)：280nm苯環(huán)返回（十）紅外吸收光譜法第十章甾體激素類藥物分析二、鑒別試驗(yàn)中國藥典上收載的甾體激素類藥物的紅外光譜圖要求與對照圖譜一致。返回三、雜質(zhì)檢查（一）有關(guān)物質(zhì)（二）游離磷酸鹽（三）甲醇和丙酮（四）硒（五）雌酮

第十章甾體激素類藥物分析返回

三、雜質(zhì)檢查來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物。特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)相似、可能存在多個(gè)甾體雜質(zhì)。方法（具一定的分離能力）：薄層色譜法（多采用高、低濃度對比法）高效液相色譜法（多采用不加校正因子的主成分自身對照法）TLC判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目；比較雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色HPLC判定方法：大多規(guī)定雜質(zhì)峰面積（一）有關(guān)物質(zhì)

第十章甾體激素類藥物分析三、雜質(zhì)檢查薄層色譜法（多采用高、低濃度對比法）醋酸氟輕松中“有關(guān)物質(zhì)”的檢查取本品，加三氯甲烷-甲醇（9∶1）溶解并制成每1ml中約含3mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（9∶1）稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（97∶3）為展開劑，展開，晾干，在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對照溶液的主斑點(diǎn)比較．不得更深。

（一）有關(guān)物質(zhì)

第十章甾體激素類藥物分析三、雜質(zhì)檢查2.高效液相色譜法（多采用不加校正因子的主成分自身對照法）

炔諾酮中“有關(guān)物質(zhì)”的檢查取本品，以甲醇溶解并稀釋制成每1ml中含2mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。用含量測定項(xiàng)下的色譜條件，取對照溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高度約為滿量程的10%，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主蜂面積。（一）有關(guān)物質(zhì)第十章甾體激素類藥物分析返回三、雜質(zhì)檢查地塞米松磷酸鈉為地塞米松與磷酸形成的磷酸酯二鈉鹽，所以在其生產(chǎn)和貯存過程中可能引入磷酸鹽，因此中國藥典對地塞米松磷酸鈉進(jìn)行游離磷酸鹽的檢查。原理：

方法：對照品法（二）游離磷酸鹽第十章甾體激素類藥物分析磷鉬酸銨

740nm

三、雜質(zhì)檢查第十章甾體激素類藥物分析期律（二）游離磷酸鹽地塞米松磷酸鈉中游離磷酸鹽的檢查精密稱取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加鉬酸銨硫酸試液2.5ml與1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，搖勻，在20℃放置30～50分鐘，照分光光度法，在740nm處測定吸收度，與對照液4.0ml同法處理的吸收度比較，不得更大。返回三、雜質(zhì)檢查第十章甾體激素類藥物分析（三）甲醇和丙酮

甲醇和丙酮為地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中所使用的溶劑，甲醇為二類限制使用的溶劑，丙酮為三類溶劑，中國藥典均采用氣相色譜法測其溶劑殘留的。返回三、雜質(zhì)檢查第十章甾體激素類藥物分析（四）硒劇毒來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫原理與方法地塞米松磷酸鈉氧瓶燃燒Se6+鹽酸羥胺Se4+pH2.0±22，3-二氨基萘試液4，5-苯并苯硒二唑環(huán)己烷λmax378nm返回三、雜質(zhì)檢查原理：Zimmermann反應(yīng)（五）雌酮（乙炔基）第十章甾體激素類藥物分析堿性KOH乙醇HOCC2紅～藍(lán)色間二硝基苯返回四、含量測定高效液相色譜法紫外分光光度法比色法第十章甾體激素類藥物分析四、含量測定（一）高效液相色譜法特點(diǎn)：樣品用量少、靈敏度高、分離效能好、快速固定相：為十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相：大多是甲醇和水組成的混合液檢測：可采用紫外檢測器于240nm或280nm波長檢測，（因?yàn)榇蠖噻摅w激素都具有△4-3-酮及苯環(huán)等共軛結(jié)構(gòu)）

第十章甾體激素類藥物分析返回四、含量測定（二）紫外分光光度法

△4-3-酮基和苯環(huán)的共扼系統(tǒng)，于紫外光區(qū)有特征吸收△4-3-酮基λmax：240nm波長附近腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯環(huán)λmax：280nm波長附近雌激素第十章甾體激素類藥物分析返回四、含量測定（三）比色法

四氮唑比色法異煙肼比色法Kober反應(yīng)比色法及鐵一酚試劑比色法第十章甾體激素類藥物分析四、含量測定（三）比色法

四氮唑比色法原理：

17位-醇酮基（具還原性）第十章甾體激素類藥物分析四氮唑鹽OH-有色的甲臢λ比色四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法四氮唑鹽的種類：

①2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)，其還原產(chǎn)物為不溶于水的深紅色三苯甲簪，λmax在480～490nm，也稱紅四氮唑（RT）+2eOH-四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法四氮唑鹽的種類：

②藍(lán)四氮唑（BT），即3,3’-二甲氧苯基-雙-4,4’-93,5-二苯基)氯化四氮唑，其還原產(chǎn)物為暗藍(lán)色的雙甲膳，λmax在525nm左右。Cl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3+4eOH-HCNNNNOCH3HCNNNNOCH3四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法倍他米松磷酸鈉的含量測定精密稱取倍他米松磷酸鈉26.35mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取精密稱取倍他米松磷酸鈉對照品26.66mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各1ml,

分別置25ml量瓶中，各精密加異煙肼溶液（異煙肼75mg，鹽酸0.1ml，加甲醇溶解并稀釋至100ml）20ml，搖勻，置60℃水浴中保溫1小時(shí)，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在420nm的波長處測定供試品溶液與對照品溶液吸光度分別為0.654和0.663，計(jì)算倍他米松磷酸鈉的百分含量。

四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法討論：（1）溶劑和水分的影響含水量＞5%→反應(yīng)V↓含水10%→A↓含水30%→幾無反應(yīng)

無水乙醇醛→A↑無醛無水乙醇(2)堿的種類及加入順序的影響

具還原性先加四氮唑鹽溶液，再加堿液為好

原因：皮質(zhì)激素與(CH3)4N+OH-長時(shí)間接觸后，有部分分解。四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法討論：(3)溫度與時(shí)間的影響

一般說來，呈色速度隨溫度增高而加快。BP：在30℃反應(yīng)1小時(shí)中國藥典(2005年版)：多數(shù)在25℃暗處反應(yīng)40～45分鐘。(4)空氣中氧及光線的影響對光敏感，在暗處顯色。TTC法形成的甲臢對空氣中氧敏感，使顏色強(qiáng)度↓，穩(wěn)定性↓。BP規(guī)定：加入試劑后，要往容器中充N2↑。四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

四氮唑比色法討論（5）基團(tuán)影響

C21：α-羥基（C21-OH）①21-OH酯化后較母體羥基反應(yīng)速度慢，即：游離體>酯類如：可的松>醋酸可的松

②簡單酯>復(fù)雜酯，醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯返回四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

2.異煙肼比色法原理：酮基H+異煙肼縮合黃色異煙腙，比色

四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

2.異煙肼比色法討論：(1)溶劑：無水乙醇，無水甲醇（2）酸的種類、濃度及異煙肼的濃度常用HClHCl：異煙肼=2M：1M時(shí)，獲最大吸收度。

四、含量測定第十章甾體激素類藥物分析（三）比色法

2.異煙肼比色法討論：(3)水分、溫度、光線和氧的影響甾體激素與異煙肼的縮合反應(yīng)為可逆反應(yīng)，所以H2O↑→A↓溫度↑，逆反應(yīng)加速。于密閉并不吸水的條件下，光與氧對反應(yīng)不產(chǎn)生影響。(4)關(guān)于反應(yīng)的專屬性在該反應(yīng)條件下，對△4—3—酮具有一定的專屬性，室溫下，30′反應(yīng)完全。C20—酮基反應(yīng)慢，C17—酮基反應(yīng)慢；