微生物及無菌操作課件

微生物及無菌操作微生物是什么微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微?。ㄖ睆叫∮?mm）、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼看不見，必須藉助光學(xué)或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬倍才能觀察到的生物。需要說明的是，微生物是一個(gè)比較籠統(tǒng)的概念，界線有時(shí)非常模糊。如單細(xì)胞藻類和一些原生動(dòng)物也應(yīng)算是微生物，但通常它們并不放在微生物中進(jìn)行研究。微生物具有以下特點(diǎn)：①體積小，面積大；②吸收多，轉(zhuǎn)化快（2000倍體重/h）；③生長旺，繁殖快（20min分裂一次）；④易變異，適應(yīng)強(qiáng)；⑤分布廣，種類多（10萬種以上）。無處不在的微生物我們所生活的環(huán)境中，到處都存在著大量的微生物。在一般空氣中，微生物達(dá)800~3500個(gè)/m3，在土壤中達(dá)1~500×108個(gè)/g，在嚴(yán)重污染的水中可達(dá)107個(gè)/ml。（飲用水要求細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/ml，大腸桿菌≤3個(gè)/ml。經(jīng)水塔或貯水池貯存后，短期內(nèi)可繁殖至105~106個(gè)/ml。）人的頭皮上有140萬個(gè)/cm2，兩手上約有4~40萬個(gè)，1g指甲污垢有38億個(gè)，1g糞便可達(dá)10~1000億個(gè)?？梢哉f微生物是無處不在，無處不有。許多以前被人們認(rèn)為是極端（高溫、高壓、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、低溫等）甚至是致死的環(huán)境，現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著各種類型的微生物（稱為極端微生物）。事實(shí)說明，微生物有特別頑強(qiáng)的生存、繁殖和變異能力來適應(yīng)環(huán)境。微生物種類繁多，有的對人有益，有的有害，有的無益也無害。但在藥品生產(chǎn)過程中，不可能對環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對待，為保證藥品的安全有效，需要對其進(jìn)行控制。空氣中的微生物多數(shù)附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1μm以下者處于懸浮狀態(tài)，10μm以上者會逐漸沉下來而形成菌塵。所以也要對塵粒進(jìn)行控制。大量臨床資料表明，注射劑（尤其是靜脈注射劑）如污染了7~12μm的塵粒，可導(dǎo)致熱原反應(yīng)、肺動(dòng)脈炎、微血栓或異物肉芽腫等，嚴(yán)重的還會致人死命。而如果污染了細(xì)菌，輕則局部紅腫化膿，重則引起全身細(xì)菌性感染。因此，對微生物和塵粒進(jìn)行更加嚴(yán)格的控制對于針劑生產(chǎn)潔凈室非常重要。人是潔凈室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分鐘向周圍排放1000個(gè)以上的含菌粒子，女性為750個(gè)以上。穿無菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量為10~300個(gè)/min，一般活動(dòng)時(shí)發(fā)菌量為150~1000個(gè)/min，行走時(shí)發(fā)菌量為900~2500個(gè)/min?？人砸淮伟l(fā)菌量為70~700個(gè)/min，噴嚏一次為4000~60000個(gè)/min。所以在潔凈室中，人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制。潔凈室的凈化度標(biāo)準(zhǔn)潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)/m3微生物最大允許數(shù)

≥0.5μm≥5μm浮游菌/m3沉降菌/皿1003,50005110000350,0002,00010031000003,500,00020,0005001030000010,500,00060,000—15潔凈室的衛(wèi)生與管理人是藥品生產(chǎn)中最大的污染源之一，所以要求人員健康、工作時(shí)穿潔凈服，進(jìn)入潔凈區(qū)要自我約束。工作服和潔凈服根據(jù)不同生產(chǎn)工段而定必須使工作人員對潔凈室的重要性和整個(gè)安裝系統(tǒng)有廣泛了解應(yīng)制定潔凈室管理、使用、滅菌制度婦女不可用粉、頭發(fā)噴霧劑、指甲油之類的化妝品，以減少污染源操作人員應(yīng)盡可能減少講話和室內(nèi)活動(dòng)工作服應(yīng)選用不易產(chǎn)生靜電、不易脫落纖維的滌綸和尼龍織物定期清洗與滅菌。室內(nèi)保持清潔整齊，定期清潔四壁和設(shè)備，保證無塵埃等衛(wèi)生的概念對衛(wèi)生定義為“身體、精神與社會適應(yīng)上處于完全良好的狀態(tài)”。藥品GMP的有關(guān)衛(wèi)生的要素是指的清潔衛(wèi)生。在環(huán)境衛(wèi)生方面，廠區(qū)要經(jīng)常保持整潔，不允許堆放設(shè)備、物料或廢料，堆放垃圾要遠(yuǎn)離生產(chǎn)車間，及時(shí)清運(yùn)。在工藝衛(wèi)生方面，對操作室、實(shí)驗(yàn)室、包裝室、倉庫、更衣室及衛(wèi)生間，以及各種設(shè)備、儀器、儀表、物料、容器、照明設(shè)施及門窗等，都必須經(jīng)常保持整潔，無灰塵。藥品生產(chǎn)企業(yè)必須有整潔的生產(chǎn)環(huán)境，有防止污染的衛(wèi)生措施，建立健全各項(xiàng)衛(wèi)生管理制度，才能在GMP各要素（包括衛(wèi)生）共同作用下生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的藥品。污染的概念

預(yù)防污染是藥品GMP的目標(biāo)要素之一，藥品生產(chǎn)過程必須要有防止污染的措施。污染：指當(dāng)某物與不潛逃的或腐壞物接觸或混合在一起從而使該物變得不純凈或適用時(shí)，它即受到污染。一個(gè)比較簡單的定義為：“為一個(gè)產(chǎn)品中存在有不需要的物質(zhì)時(shí)，它即受到污染?！苯徊嫖廴炯八幬镂廴镜耐緩剑航徊嫖廴荆涸谏a(chǎn)中，一種原料、中間產(chǎn)品或成品被另一原料或成品污染。生產(chǎn)中交叉污染及微生物污染的預(yù)防措施。特別強(qiáng)調(diào)了在生產(chǎn)中應(yīng)避免原料或產(chǎn)品被另一原料或產(chǎn)品污染、在加工中原料和產(chǎn)品引發(fā)的塵埃、氣體、蒸氣、噴霧狀或生物體、設(shè)備的殘留物，昆蟲侵入以及操作者的衣服、皮膚等均有引起交叉污染的危險(xiǎn)。污染主要指微生物和微粒兩種形式的污染物。廣義地講，污染也包含了異物微粒的污染。人員、空氣、工藝用水、表面（廠房、設(shè)備等）、物料滅菌方法與無菌操作二、分類目的提高藥物制劑的安全性保護(hù)制劑的穩(wěn)定性保證制劑的臨床療效滅菌法物理滅菌法化學(xué)滅菌法無菌操作法物理滅菌法利用蛋白質(zhì)與核酸具有遇熱、射線不穩(wěn)定的特性，采用加熱、射線和過濾方法，殺滅或除去微生物的技術(shù)稱為物理滅菌法。1.干熱滅菌法2.濕熱滅菌法3.濾過除菌法4.射線滅菌法1.1火焰滅菌法系指用火焰直接灼燒滅菌的方法。該法適用于耐火焰材質(zhì)（如金屬、玻璃及瓷器等）的物品與用具的滅菌，不適合藥品的滅菌。1.2干熱空氣滅菌法系指用高溫干熱空氣滅菌的方法。該法適用于耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕氣穿透的油脂類（如油性軟膏基質(zhì)、注射用油等）和耐高溫的粉末化學(xué)藥品的滅菌，不適于橡膠、塑料及大部分藥品的滅菌。2.濕熱滅菌法系指用飽和蒸氣、沸水或流通蒸氣進(jìn)行進(jìn)行滅菌的方法。包括：熱壓滅菌法流通蒸氣滅菌法煮沸滅菌法低溫間歇滅菌法3.濾過除菌法系指采用過濾法除去微生物的方法。該法屬于機(jī)械除菌方法，該機(jī)械稱為除菌過濾器。該法適用于對熱不穩(wěn)定的藥液、氣體、水等物品的滅菌。對滅菌用過濾器應(yīng)有較高要求。常用的除菌過濾器：0.22μm的微孔濾膜器和G6垂熔玻璃濾器。4.射線滅菌法系指采用輻射、微波和紫外線殺滅微生物和芽孢的方法。包括：（1）輻射滅菌法（2）微波滅菌法（3）紫外線滅菌法4.1紫外線滅菌法UV200-300nm,254-257nm最強(qiáng)原理促使核酸蛋白變性使產(chǎn)生臭氧，共同殺菌后用于空氣滅菌和表面滅菌；效果與微生物敏感性有關(guān)，對酵母或霉菌力弱化學(xué)滅菌法系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法。殺菌劑是指對微生物具有觸殺作用的化學(xué)藥品。分為氣體殺菌劑和液體殺菌劑。殺菌劑只對微生物繁殖體有效，不能殺滅芽孢。殺菌效能決定于微生物的種類與數(shù)量、物體表面光潔度或多孔性以及殺菌劑的性質(zhì)等。1.氣體滅菌法

該法適用于環(huán)境消毒和不耐熱的醫(yī)用器具、設(shè)備和設(shè)施等的消毒，亦用于粉末注射劑的消毒。常用的氣態(tài)殺菌劑：環(huán)氧乙烷、甲醛、丙二醇、甘油和過氧乙酸。2.藥液滅菌法

該法常作為其他滅菌法的輔助措施，適用于皮膚、無菌器具和設(shè)備的消毒。常用的消毒液有：75%乙醇、1%聚維酮碘溶液、0.1~0.2%新潔爾滅溶液、酚或煤酚皂溶液等。無菌