實(shí)驗(yàn)六體外抑菌實(shí)驗(yàn)定課件

動(dòng)物機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)2編者：陳小軍實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一影響藥物作用的因素實(shí)驗(yàn)二藥物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三處方與藥物的配伍禁忌實(shí)驗(yàn)四中毒與解救試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)五藥物對離體腸的影響實(shí)驗(yàn)六抗微生物藥物的體外抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)七生物堿的提取及其藥敏實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)八藥物對離體心臟的影響實(shí)驗(yàn)五、抗菌藥物的體外抑菌實(shí)驗(yàn)

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

掌握藥敏試驗(yàn)的方法，了解藥物對常見菌的作用。意義：體外抗菌試驗(yàn)對臨床用藥具有參考價(jià)值。鑒定新藥是否具有抗菌活性。下一張

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【基本原理】抗菌活性：是指抗菌藥抑制或殺滅病原微生物的能力。兩種測定方法：體外與體內(nèi)（化學(xué)治療實(shí)驗(yàn)）；評價(jià)指標(biāo)：

（1）最低抑菌濃度（MIC）：

能夠抑制培養(yǎng)基中細(xì)菌生長的最低濃度。

（2）最低殺菌濃度（MBC）：能夠殺滅培養(yǎng)基中細(xì)菌的最低濃度。下一張

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【試劑與器材】

細(xì)菌菌液（如金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌、大腸桿菌、沙門氏桿菌）、藥液（青霉素、鏈霉素、磺胺嘧啶鈉、四環(huán)素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、氫氧化鈉、高壓滅菌器、小試管、試管架、吸管、平皿等。

藥敏試紙的準(zhǔn)備：青霉素1.6萬u/ml、鏈霉素1萬u/ml、1%磺氨嘧啶鈉、四環(huán)素5萬μ/ml256μ/ml青霉素溶液：下一張

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【實(shí)驗(yàn)步驟】一、紙片法

以滅菌小棉簽取金黃色葡萄球菌液（每ml約含3億個(gè)細(xì)菌），注意不宜蘸取過多，以剛浸濕整個(gè)棉簽為度，輕輕地從四個(gè)不同方向平行交叉劃線，使菌液均勻涂布于整個(gè)瓊脂平板上。同樣方法，也可制作大腸桿菌平板備用。

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二、紙片法

取已經(jīng)制備好的4種藥敏片：青霉素1.6萬u/ml、鏈霉素1萬u/ml、1%磺氨嘧啶鈉、四環(huán)素5萬μ/ml，放置在已接種細(xì)菌的瓊脂平板表面的不同區(qū)域。為了位置間隔準(zhǔn)確，最好事先在平皿底用蠟筆作上記號。

將培養(yǎng)皿置37℃培養(yǎng)24h，觀察紙片周圍有無抑菌環(huán)，并測量抑菌圈的直徑，比較各藥的抗菌效力。樣例如下圖：下一張

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實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄：抑菌直徑（mm）下一張

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藥物沙門氏桿菌大腸桿菌二、試管二倍稀釋法

取滅菌小試管10支，按照1至10編號，排列于試管架上。按照無菌操作，從第一管到第10管，分別加入牛肉膏湯1ml。用吸管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反復(fù)吹勻；接著從第一管吸出1ml放入第二管同樣吹勻后吸出1ml放入第三管，依次逐管進(jìn)行稀釋到第８管，第10管不加青霉素液，作細(xì)菌對照組，第９管只加藥物，不加菌液，作為藥物對照組。

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1-8，10各加入培養(yǎng)18h并用牛肉膏湯稀釋至5×107～108cfu/ml的金黃色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h后，取出觀察細(xì)菌生長情況。以能抑制細(xì)菌生長的最小濃度為青霉素對該細(xì)菌的最低抑制濃度（MIC）。最低殺菌濃度（MBC）結(jié)果記錄于下表：下一張

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記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果下一張

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【注意事項(xiàng)】1.接種細(xì)菌時(shí)要在無菌條件下均勻涂抹；用過的棉簽火焰燒灼后丟棄。2.用試管二倍稀釋法測MIC值，稀釋時(shí)注意稀釋的順序；每次移液前注意清洗吸管。3.藥敏片之間要間隔適當(dāng)距離，以免抑菌圈出現(xiàn)交叉。4.四人一組，紙片法每人一個(gè)平皿，作四種藥物對一種菌的作用，