實驗二細菌的革蘭染色法、芽孢染色法課件

實驗二細菌的革蘭氏染色及芽孢染色法一、實驗目的：1.學習并掌握革蘭氏染色法和芽孢染色法。

2.鞏固顯微鏡油鏡的使用技術。3.鞏固無菌操作技術二、實驗原理：1.革蘭氏染色原理：革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學C.Gram所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G—）兩大類，是細菌學上最常用的鑒別染色法。2.芽孢染色法原理：二、實驗原理：芽孢是某些G+菌形成的圓形或橢圓形的休眠體，抗熱性和折光性較強。芽孢的大小、形態(tài)、位置可做分類依據。

二、實驗原理：中央芽孢末端芽孢偏端芽孢游離芽孢二、實驗原理：芽孢壁厚、透性低，著色和脫色均較困難；但當用弱堿性染料（孔雀綠）在加熱的情況下進行染色時，染料可進入菌體和芽孢；進入菌體的染料經水洗后可被脫色；當用對比度大、淺色的復染色劑（番紅）染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色（綠色），而菌體呈復染劑顏色（紅色）。三、實驗器材1.菌株：革蘭氏染色：培養(yǎng)12h-16h枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）或者金黃色葡萄球菌（

Staphyloccocusaureus）和培養(yǎng)24h大腸桿菌（Escherichiacoli）芽孢染色：培養(yǎng)36h的巨大芽孢桿菌（Bacillus

megaterium

）或者枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）四、實驗步驟1.革蘭氏染色：（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。（2）干燥：與簡單染色法相同。（3）固定，與簡單染色法相同。（4）初染：加適量結晶紫染色液染色1-2min，水洗。（5）媒染：滴加盧戈氏碘液，媒染1min，水洗。四、實驗步驟四、實驗步驟四、實驗步驟2.Schaeffer與Fulton氏芽孢染色法（1）涂片：按常規(guī)方法將待檢細菌制成薄的涂片。（2）干燥：與簡單染色法相同。（3）固定，與簡單染色法相同。四、實驗步驟（6）復染：用蕃紅水溶液染色2min。（7）水洗：（8）干燥：（9）鏡檢：先低倍，再高倍，最后在油鏡下觀察芽胞和菌體的形態(tài)。。結果：芽孢呈綠色，菌體為紅色。四、實驗步驟芽孢染色結果（芽孢呈綠色，營養(yǎng)體呈紅色）四、實驗步驟（10）實驗完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2-3次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。四、實驗步驟六、注意事項1、革蘭氏染色注意事項（1）革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。（2）染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。（3）選用幼齡的細菌。G+菌培養(yǎng)12h-16h，E.coli培養(yǎng)24h。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。2、芽孢染色注意事項（