生物學(xué)實驗細胞

生物學(xué)實驗細胞第1頁/共44頁實驗一

普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用第2頁/共44頁【實驗?zāi)康摹苛私馄胀ü鈱W(xué)顯微鏡的構(gòu)造及原理，熟練掌握其操作方法；了解人血與蛙血細胞的形態(tài)差異。第3頁/共44頁【實驗原理】顯微鏡種類：顯微鏡的組成系統(tǒng)：光學(xué)、機械、電子。普通光鏡的光學(xué)系統(tǒng)：物鏡、目鏡、聚光器、光闌等。普通光鏡的機械系統(tǒng)：鏡筒、鏡臂、物鏡轉(zhuǎn)換器、調(diào)焦螺旋（粗調(diào)和細調(diào)）、載物臺、鏡座等第4頁/共44頁【實驗步驟】A：顯微鏡的使用取用顯微鏡時，右手握鏡臂，左手托鏡座，避免傾斜；接通電源，打開光圈，上升聚光器；標(biāo)本片置于載物臺上，材料對準(zhǔn)通光孔；低倍下調(diào)焦；選擇合適區(qū)域推到中央，換高倍鏡調(diào)焦（細調(diào)）；觀察繪圖；結(jié)束時將顯微鏡復(fù)原到非工作狀態(tài)。第5頁/共44頁顯微鏡使用的注意點：禁止單手提拿顯微鏡和隨意拆卸零部件；低倍下調(diào)焦時先上升載物臺（或下降鏡筒），再緩慢下降載物臺或上升鏡筒，使物鏡鏡頭與玻片距離由小到大調(diào)焦。一般直接轉(zhuǎn)換成高倍鏡后細調(diào)焦距；觀察標(biāo)本時兩眼同時睜開；調(diào)節(jié)合適的光圈和電流強度可使成像更清晰；如果使用100×油鏡，應(yīng)在標(biāo)本上滴一滴香柏油，使鏡頭底端與該介質(zhì)接觸。觀察完后及時用二甲苯擦拭油鏡頭。注意其它鏡頭不得接觸香柏油。第6頁/共44頁【實驗步驟】B：操作練習(xí)：血細胞涂片的觀察材料：人血和蛙血涂片觀察內(nèi)容：血細胞的組成；兩種紅細胞的形態(tài)差異等。附：字母裝片，精液涂片?！咀鳂I(yè)】繪圖：人血和蛙血細胞形態(tài)第7頁/共44頁實驗二動物細胞的基本形態(tài)與顯微測量第8頁/共44頁【實驗?zāi)康摹空莆展忡R下多種細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征；掌握顯微測微尺的使用和測量細胞大小的方法。第9頁/共44頁【實驗原理】動物各種不同組織的細胞具有不同的形態(tài)大小等特征上皮組織：單層扁平上皮單層立方上皮單層柱狀上皮復(fù)層扁平上皮……結(jié)締組織：骨軟骨血液……肌組織：骨骼肌心肌平滑肌神經(jīng)組織第10頁/共44頁單層柱狀上皮與復(fù)層扁平上皮第11頁/共44頁骨骼肌細胞與心肌細胞第12頁/共44頁平滑肌細胞

第13頁/共44頁神經(jīng)元肝細胞第14頁/共44頁【實驗原理】顯微測微尺由目鏡測微尺和鏡臺測微尺組成，臺尺的每小格已知0.01nm，在相應(yīng)放大倍數(shù)的物鏡下對目尺加以標(biāo)定后，即可通過目尺準(zhǔn)確測量細胞的大小。第15頁/共44頁【實驗步驟】A.

分別觀察腸上皮細胞、骨骼肌細胞、心肌細胞、神經(jīng)細胞和肝細胞等切片，注意比較鑒別細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，核形態(tài)數(shù)量和位置等特征。B.蛙血細胞大小的測量1.蛙血涂片的制備2.目鏡測微尺的標(biāo)定3.細胞大小的測量第16頁/共44頁【作業(yè)】1.繪圖：各種細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)2.記錄5個以上的蛙血細胞的長、短徑，得到平均細胞大小第17頁/共44頁實驗三細胞器的顯示與觀察第18頁/共44頁【實驗?zāi)康摹苛私夤忡R下細胞器的形態(tài)和分布掌握超活染色法制作光鏡標(biāo)本的基本方法第19頁/共44頁【實驗原理】活體染色是能使活的細胞或組織著色且無毒害的一種染色方法?？捎糜谘芯可顮顟B(tài)下的細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理或病理變化?；铙w染料被特異性地固定和堆積在細胞內(nèi)某種細胞器上而顯色?；铙w染色分為體內(nèi)活染和體外活染（超活染色）。詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進行超活染色。其原理是由于線粒體內(nèi)細胞色素氧化酶系的作用，使JGB保持氧化狀態(tài)，呈亮綠色；而周圍的細胞質(zhì)中染料被還原為無色的色基。第20頁/共44頁【實驗步驟】人口腔上皮細胞線粒體的超活染色與觀察用牙簽刮取口腔頰部粘膜的上皮細胞，在潔凈的載玻片上與1dJGB染液混勻，染色15min以上。蓋上蓋玻片，光鏡下觀察線粒體的形態(tài)和分布。B.小鼠肝臟細胞線粒體的超活染色與觀察取小鼠肝臟邊緣較簿組織，置于含Ringer液平皿中擠壓洗滌2-3次，吸去Ringer液，加JGB染液染色30min，Ringer液洗滌1次后轉(zhuǎn)移至載玻片，將組織拉碎，去稍大的組織塊，蓋上蓋玻片，鏡檢。C.高爾基復(fù)合體標(biāo)本的觀察兔脊神經(jīng)節(jié)切片D.動物細胞中心體標(biāo)本觀察第21頁/共44頁【作業(yè)】繪圖：人口腔上皮細胞（顯示線粒體）小鼠肝細胞（顯示線粒體）兔脊神經(jīng)節(jié)細胞（顯示高爾基體）第22頁/共44頁實驗四細胞膜的通透性第23頁/共44頁【實驗?zāi)康摹空莆占毎さ倪x擇通透性和細胞內(nèi)外水分子交換的原理。第24頁/共44頁【實驗原理】細胞與周圍環(huán)境之間可進行選擇性物質(zhì)交換。水分子通常以簡單擴散的方式通過細胞膜，如果細胞內(nèi)外存在滲透壓差時，水分子表現(xiàn)從滲透壓低的一側(cè)向高的一側(cè)擴散。將紅細胞置于低滲溶液中，溶劑很快進入細胞內(nèi)，發(fā)生溶血，釋放出血紅蛋白，重新封閉的紅細胞膜構(gòu)成血影。而在高滲溶液中，動物細胞發(fā)生脫水皺縮。將紅細胞置于數(shù)種等滲溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質(zhì)的通透性不同，有的不能通過，能通過的溶質(zhì)通過的速度也有差異。隨著溶質(zhì)的進入，紅細胞內(nèi)滲透壓提高，帶動水分的攝入，最終引起溶血。通過溶血時間的測定可估計紅細胞膜對各種溶質(zhì)通透性的大小。第25頁/共44頁第26頁/共44頁【實驗步驟】1、制備10％兔紅細胞懸液：兔心臟抽血，加肝素抗凝，加等滲氯化鈉稀釋10×成不透明的懸液。2、在1支試管加5ml蒸餾水，再加0.5ml10％紅細胞懸液，觀察溶血現(xiàn)象的發(fā)生。3、10支試管分別加5ml不同的等滲溶液，再加0.5ml10％紅細胞懸液，觀察溶血現(xiàn)象是否發(fā)生，記錄溶血發(fā)生時間。4、顯微鏡下觀察紅細胞血影。第27頁/共44頁等滲溶液是否溶血溶血時間結(jié)果分析氯化鈉氯化銨醋酸銨硝酸鈉草酸銨硫酸鈉葡萄糖甘油乙醇丙酮【作業(yè)】第28頁/共44頁植物細胞骨架的光學(xué)顯微鏡觀察實驗五第29頁/共44頁【實驗?zāi)康摹空莆湛捡R斯亮藍法檢測細胞骨架的方法第30頁/共44頁【實驗原理】A.細胞化學(xué)染色與DNA和RNA的定位核酸分為DNA和RNA，呈酸性可與堿性染料反應(yīng)而顯色和定位。由于兩類核酸分子聚合程度不同，對不同的堿性染料親和力不同，甲基綠-哌洛寧染料的兩種組分分別對DNA和RNA有高親和力，并分別將二者染成藍綠色和紅色。第31頁/共44頁【實驗原理】B.細胞計數(shù)血細胞計數(shù)板包括2個計數(shù)室，每個計數(shù)室有9個大格，每大格的體積為0.1mm3，計數(shù)4大格內(nèi)（4個角）的細胞數(shù)，根據(jù)每大格的體積和細胞懸液的稀釋倍數(shù)即可算出細胞密度。第32頁/共44頁【實驗步驟】A.DNA和RNA的定位制備蛙血涂片1張，晾干。固定：70％乙醇固定5min。染色：滴1d甲基綠-哌洛寧染液染色5-10min，水沖洗后在純丙酮中分化處理2-3s。觀察繪圖第33頁/共44頁【實驗步驟】B.血細胞計數(shù)制備蛙血細胞懸液，稀釋400-600×熟悉血細胞計數(shù)板，找到計數(shù)室和計數(shù)區(qū)域蓋玻片蓋在計數(shù)板槽上，吸取1d血細胞懸液滴在蓋玻片外側(cè)邊緣，使其滲入計數(shù)室10×物鏡下計數(shù)（四角的4大格）細胞密度換算：細胞數(shù)/ml=4大格細胞數(shù)/4×10000×稀釋倍數(shù)第34頁/共44頁【作業(yè)】繪圖：核酸的細胞內(nèi)定位細胞計數(shù)結(jié)果和密度換算第35頁/共44頁實驗五細胞的有絲分裂和減數(shù)分裂第36頁/共44頁【實驗?zāi)康摹空莆占毎薪z分裂的過程和各時期特征；熟悉植物細胞染色體壓片標(biāo)本的制作方法；了解生殖細胞減數(shù)分裂過程和特征。第37頁/共44頁【實驗原理】體細胞有絲分裂第38頁/共44頁【實驗步驟】A大蒜根尖有絲分裂壓片的制備和觀察1大蒜根尖用0.5%秋水仙素處理2－4h2洗去Col后，切下根尖置于小瓶中，加1:1無水乙醇和濃鹽酸固定、離析，10min3吸去固定液后，水洗2次×5min4材料置于載玻片上，切去根冠和伸長區(qū)，保留分生區(qū)，加品紅染色30min545％醋酸分色后，蓋上蓋玻片，壓片6顯微鏡觀察：統(tǒng)計分裂指數(shù)，分辯各時相特征。B有絲分裂切片的觀察觀察馬蛔蟲受精卵有絲分裂切片第39頁/共44頁洋蔥根尖細胞的有絲分裂（40×）第40頁/共44頁