提高右旋糖酐適應性

提高右旋糖酐適應性第1頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六RINGPU(TIANJIN)ANIMALPHARMACEUTICALCO.,LTD.

瑞普（天津）生物藥業(yè)有限公司（以下簡稱瑞普天津）是中國首批GMP認證通過企業(yè)，專業(yè)從事植物提取制劑類、化學藥物制劑類、生化制劑類動物藥品的研制和生產(chǎn)。 右旋糖酐鐵注射液是瑞普天津推出的用于仔豬補鐵的大容量注射液，2010年6月該產(chǎn)品正式上市。一、企業(yè)基本情況第2頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六二、小組概況小組名稱提高右旋糖酐鐵注射液使用安全性攻關小組課題名稱提高右旋糖酐鐵注射液使用安全性研究活動時間20121.01-2012.10序號小組成員性別年齡職稱現(xiàn)任職務組內職務1劉愛玲女37高級工程師研發(fā)總監(jiān)組長2彭宇鵬男32助理工程師質量部經(jīng)理組員3張海斌男36助理工程師生產(chǎn)部經(jīng)理組員4夏雪林女35助理工程師QC人員組員5王小武男30工程師QC人員組員6王愛萍女28助理工程師QA人員組員7劉桂蘭女37高級工程師研發(fā)部經(jīng)理組員第3頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六三、選題理由鐵是哺乳仔豬生長發(fā)育所必需的微量元素，是體內多種酶的組成部分。初生仔豬體內鐵的貯量最少，每天需要7毫克鐵，而每天母乳中最多可獲得1毫克鐵。因此，仔豬體內貯存的鐵很快就會耗盡，為了避免出現(xiàn)貧血癥，飼養(yǎng)場給仔豬補鐵成為必須進行的工作。右旋糖酐鐵注射液也是目前最有效最重要的的主要補鐵制劑，但右旋糖酐鐵注射液在臨床使用過程中有1.60%~1.70%的過敏反應，嚴重時可以造成死亡，而且批與批之前出現(xiàn)的過敏比例有所不同，經(jīng)過推斷可能和右旋糖酐鐵原料藥物質量及生產(chǎn)控制有很大原因。第4頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六三、選題理由因此，為了降低右旋糖酐鐵注射液出現(xiàn)過敏反應的比例，查清原因，成立攻關項目組，從人、機、料、法、環(huán)等五個方面進行分析研究右旋糖酐鐵注射液造成過敏反應的原因，從而達到降低不良反應目的。第5頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六四、現(xiàn)狀調查截止到2012年5月，該產(chǎn)品共生產(chǎn)11個批次，在全國應用過程中，其中10批次出現(xiàn)了過敏反應的報告（具體數(shù)據(jù)見下表1，表1中的件數(shù)是包裝的計量單位，每件含80瓶），平均不良報告比率為0.10%。尤其是11061901、11071101的刺激性反應報告較多，平均不良報告比率達到了0.36%。第6頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六四、現(xiàn)狀調查生產(chǎn)批次和不良反應報告數(shù)目批號生產(chǎn)數(shù)量（件）不良反應報告例數(shù)110619013111110711019626110823011104111113011200120116013961202010130212021101601120316019021203290111081204210190612051101602第7頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六四、現(xiàn)狀調查

2011年8月進行了刺激性反應研究，之后主要對原料游離鐵含量進行了監(jiān)控。2011年8月之后生產(chǎn)的產(chǎn)品雖然不良反應報告比率下降到了0.05%，但是還沒有完全杜絕，因此深入分析致敏因素，徹底杜絕過敏反應尤為必要。

所以擬從原輔料質量控制、關鍵原料精制、制劑組方、生產(chǎn)工藝、人員操作、生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)設備等方面進行攻關，以徹底解決當前右旋糖酐鐵注射液存在的致敏性反應，不僅為動物用藥，而且為人用藥提供安全性高的注射用鐵制劑。第8頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六

五、目標設定目標：確保連續(xù)三批次生產(chǎn)的右旋糖酐鐵注射液不良反應報告率為零。目標可行性分析：引起右旋糖酐鐵注射液的致敏因素主要有三種：一是右旋糖酐，二是游離鐵，三是動物本身為過敏體質。公司具有原料藥物和制劑研究、生產(chǎn)所需的便利條件，項目組成員對于動物飼養(yǎng)、疾病控制、藥品生產(chǎn)、質量控制、藥物研究等方面具有豐富的經(jīng)驗，曾經(jīng)完成過多個動物用藥物制劑的質量攻關項目，完全能夠實現(xiàn)既定的活動目標。第9頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析培訓教育責任心培養(yǎng)加強考核原料控制業(yè)務提升技術水平提升經(jīng)驗交流增加機配料設備混合設備灌裝設備制劑綜合控制溫濕度控制工藝處方優(yōu)化廠家監(jiān)控人嚴格操作環(huán)法料從人、機、料、法、環(huán)五個方面進行右旋糖酐鐵注射液工藝穩(wěn)定性提升研究，具體提升方面見下圖1所示。圖1生產(chǎn)工藝和組方優(yōu)化的總體控制第10頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析項目小組對右旋糖酐鐵制劑的過敏性進行了深入研究，主要從制劑過敏性問題的深入分析入手，詳細分析了右旋糖酐鐵在人、畜中的使用情況、過敏報告事件；經(jīng)過對引起過敏反應的深入分析，確定右旋糖酐為主要過敏原，游離鐵含量的增加可以增加過敏反應幾率。具體分析如下：第11頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析

右旋糖酐鐵注射液（IronDextranInjection）是人藥臨床常用的抗貧血藥，其主要成分為右旋糖酐氫氧化鐵復合物，是中國藥典（ChP）2000版新增訂品種之一，該品種同時被英國藥典（BP）和美國藥典（USP）2002年版收錄，2000年版獸藥典收錄該制劑。1右旋糖酐鐵使用和過敏事件第12頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析

由于口服鐵制劑有較嚴重的胃腸道反應，因此臨床上較多采用右旋糖酐鐵注射液來改善貧血，但臨床應用后偶有不良反應，雖然病例數(shù)少，但發(fā)生的過敏反應還是比較嚴重的。人對右旋糖酐鐵的過敏反應主要有以下幾類：過敏反應、多型性紅斑、嚴重臀部肌肉壞死、剝脫性皮炎、局部組織壞死、致心房顫動、低血壓。美國食品與藥物管理局（FDA）2009年10月16日正式發(fā)布公告，提醒經(jīng)腸道外給予右旋糖酐鐵注射液（商品名：Dexferrum）后可引起過敏性反應。該藥標簽中加框警示提示，在首次治療前可給予試驗劑量并觀察用藥后的癥狀，但即使患者能夠耐受試驗劑量，在注射治療劑量后仍可能發(fā)生致命反應。有藥物過敏史者用該藥后發(fā)生過敏性反應危險增高。第13頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六14“六、原因分析

大量臨床實驗表明，右旋糖酐鐵給仔豬注射后容易發(fā)生的不良反應是嘔吐、嘶叫、呼吸困難、心跳加快、步態(tài)蹣跚，嚴重者可發(fā)生死亡。主要癥狀表現(xiàn)為：用藥5～10min后，患豬全身皮膚發(fā)紺、呼吸困難、心跳加快、全身顫抖、不安蹦跳，繼而閉目、軟癱橫臥，大小便失禁，呈瀕死樣休克。第14頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析2過敏原因分析（1）右旋糖酐為主要過敏原

右旋糖酐鐵的不良反應與右旋糖酐密切相關。據(jù)報道，右旋糖酐鐵的過敏反應是由于患者體內存在右旋糖酐抗體而產(chǎn)生的免疫介導反應，每年每100萬使用右旋糖酐的患者中有8.7例出現(xiàn)過敏，196例右旋糖酐鐵過敏病例中，有31例致命。據(jù)WHO瑞典右旋糖酐反應性抗體情況監(jiān)測中心研究，右旋糖酐出現(xiàn)的類過敏反應和過敏反應按反應（DextranInducedAnaphylactoid/AnaphylacticReactions，DIAR）的程度，分出V級，即，一級反應：皮膚發(fā)紅，紅斑，蕁麻疹；二級反應：輕中度低血壓，惡心，心率加快，呼吸困難；三級反應：休克，支氣管痙攣，嚴重低血壓40~60mmhg；四級反應：心跳或呼吸停止；五級反應：死亡。DIAR的發(fā)病率各家報道不一，由0.03%-4.7%。低分子右旋糖酐過敏可在用藥后幾秒，幾分或半小時內發(fā)生，來勢兇猛，搶救難度大，用藥量幾滴到幾毫升即可發(fā)生致死性休克反應。因此，使用右旋糖酐鐵30分鐘內更應密切觀察患者的反應。第15頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六1616六、原因分析（2）游離鐵含量的增加也可以造成過敏反應

在右旋糖酐鐵合成過程中，體系的pH<5時,FeCl3

水解反應不能徹底，使右旋糖酐鐵中含有高價鐵離子，高價鐵離子是氧化劑，對機體本身有傷害，文獻報道嚙齒類動物鐵過量會導致心臟功能損傷，同時對細胞有毒的醛含量增高。鐵超負荷還導致腎臟溶酶體內鐵潴留，使溶酶體變形能力降低、密度增高，這些都與細胞組織氧化有關。在對大鼠急性鐵超負荷的實驗中，發(fā)現(xiàn)睪丸脂質過氧化物、蛋白質和DNA氧化損傷均增加，提示上述的氧化是由鐵本身引起的。右旋糖酐鐵原料控制中有游離鐵檢查，要求游離鐵含量≤0.2%，在右旋糖酐鐵注射液中，要嚴格測定注射部位未吸收Fe含量。因此對原料的游離鐵含量嚴格控制是必須的。第16頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六六、原因分析（3）動物本身的敏感體質：根據(jù)右旋糖酐鐵所致的過敏反應，我們得出此副反應是由于肥大細胞、嗜堿細胞的直接脫粒造成，從而釋放介質，如組胺、5-羥色胺等，引起血管擴張和毛細血管通透性增加，使血漿漏入組織致有效血容量下降。經(jīng)過長期細胞學研究，我們得出過敏反應發(fā)生時，緊急注射維生素B1和維生素B6可降低感覺神經(jīng)元敏感性，從而抑制組胺釋放，可通過工藝改進減輕過敏反應發(fā)生。（4）人員：生產(chǎn)質量人員的技術水平與責任心是生產(chǎn)出合格產(chǎn)品的必備條件。需要加強培訓，提升技術人員水平。第17頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六七、要因確定綜上分析：

1右旋糖酐為主要過敏原

2游離鐵含量的增加也可以造成過敏反應

3動物自身的敏感體質

4生產(chǎn)、質量人員的技術水平和責任心第18頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施

基于上述安全性分析和實驗室反復試驗，攻關組得出：從原料精制、右旋糖酐分子量分布和游離鐵的質量控制、制劑組方完善三個方面，可以解決制劑過敏問題。經(jīng)過近一年的攻關工作，右旋糖酐鐵注射液制劑的安全性得到了提升，現(xiàn)生產(chǎn)的制劑臨床不良反應報告數(shù)為零，主要從以下三個方面進行了質量控制。

1右旋糖酐鐵原料的精制我們分析了不同廠家、不同批次的右旋糖酐鐵原料，原料質量差異較大，本身質量控制比較特殊。在此基礎上，我們對不同來源的右旋糖酐鐵進行了精制處理，具體為：將右旋糖酐鐵原料放入沉淀缸中開啟攪拌，加入等體積的95%乙醇攪拌約15分鐘將混合液升溫到98℃以上，保溫1小時左右靜止使其自然沉降分層開啟攪拌，用三角離心機分離沉淀物濾餅稱重，測含鐵量，右旋糖酐貼分子量與分子量分布，備用。經(jīng)過精制，右旋糖酐的分子量分布（Mw/MN）由1.8下降至1.35-1.5。第19頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施原料精制設備

分子量測定第20頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施

經(jīng)過上述精制后，右旋糖酐鐵純度進一步提高，采用2010年版中國藥典右旋糖酐鐵注射液中鐵吸收度方法，測定了精制后右旋糖酐鐵的吸收度，試驗證實經(jīng)過精制后的原料局部吸收度比精制前大大提高。2右旋糖酐分子量分布和游離鐵的嚴格控制在中國藥典、獸藥典、美國藥典、歐洲藥典中，都規(guī)定了右旋糖酐鐵的質量標準，該原料為含F(xiàn)e≥25.0%的棕褐色至棕黑色結晶性粉末，但多家原料廠家因設備和檢測成本原因，都沒有對右旋糖酐鐵原料質量進行全方位控制，尤其是游離鐵含量。因此在原料質量控制上，在游離鐵檢查的基礎上，建立了游離鐵分光光度檢測方法，嚴格控制右旋糖酐鐵溶液中游離鐵的含量在0.2%以內。藥典檢查方法僅為目測法，誤差大，判斷容易造成假陰性。具體測定方法為：游離鐵取本品約1.0g，精密稱定，加水適量，加熱使溶解，放冷，用水稀釋至100ml，搖勻。取上述溶液10ml，置50ml納氏比色管中,加標準鐵溶液1ml，硫氰酸鉀溶液（取硫氰酸鉀15g，置100ml量瓶中，加水50ml溶解后，加丙酮15ml，用水稀釋至刻度，搖勻）15ml與丙酮24ml，搖勻，放置5分鐘，觀察上層液的顏色。如顯色，立即進行545nm下的吸收值測定，吸收值A≤0.2。第21頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施游離鐵含量測定第22頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施

人藥臨床上已經(jīng)形成了很好的抗過敏急救措施，主要以緊急注射苯海拉明、地塞米松、氫化可的松等，但這些都是激素類藥物，并且是在過敏發(fā)生后要立即采取的措施，如果在右旋糖酐鐵制劑中直接加入抗過敏藥物，可以從源頭上杜絕過敏的發(fā)生，大大提高藥物使用的安全性。根據(jù)右旋糖酐鐵所致的過敏反應，我們得出此副反應是由于肥大細胞、嗜堿細胞的直接脫粒造成，從而釋放介質，如組胺、5-羥色胺等，引起血管擴張和毛細血管通透性增加，使血漿漏入組織致有效血容量下降。經(jīng)過長期細胞學研究，我們得出過敏反應發(fā)生時，緊急注射維生素B1和維生素B6可降低感覺神經(jīng)元敏感性，從而抑制組胺釋放；把維生素B1、維生素B6兩成分加入右旋糖酐鐵注射液中后，分別用兔子和2日齡仔豬進行了過敏性試驗，結果表明應激反應發(fā)生率為0。3制劑組方的完善第23頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施

右旋糖酐鐵注射液制劑組方的優(yōu)化表3成分 原組方含量 更改后組方含量右旋糖酐鐵溶液 10% 10%甘油 5% -丙二醇 - 5%維生素B1 - 15%維生素B6 - 2%苯酚 0.5% 0.3%注射用水 加至100% 加至100%

第24頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六八、制定對策及對策實施具體生產(chǎn)工藝為：合格原輔料稱量分別混合總混無菌過濾半成品半產(chǎn)品檢測合格品灌裝成品生產(chǎn)設備調試八、制定對策及對策實施第25頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六4、人員培訓培訓討論會八、制定對策及對策實施注射液質量控制與生產(chǎn)、檢驗人員的操作技術水平，責任心是分不開的，因此，項目組專門組織了針對檢驗、生產(chǎn)人員的培訓討論會，加強技術水平，通過考核，加強責任心培養(yǎng)。第26頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六九、效果檢查

此攻關項目開展以來，研發(fā)部、質量管理部、生產(chǎn)部通力合作，從制劑組方優(yōu)化、原料控制標準建立、制劑工藝監(jiān)控等方面通力過關，通過多批次的試驗室動物實驗、臨床仔豬試驗，獲得了完全消除過敏反應的右旋糖酐鐵制劑。到2012年6-8月，采用優(yōu)化后組方、工藝共生產(chǎn)6個批次產(chǎn)品，發(fā)往市場的產(chǎn)品未出現(xiàn)沒有過敏性病例的報告。具體實驗和市場統(tǒng)計如下。1右旋糖酐鐵注射液在兔中敏感性測定

試驗目的：試驗12061101批右旋糖酐鐵注射液（瑞普（天津）生物藥業(yè)有限公司2012年6月11日生產(chǎn)的產(chǎn)品）的毒性和高劑量的過敏反應。試驗方法：選取35只家兔，稱重后隨機分為3組，12061101批右旋糖酐鐵注射液組和市售右旋糖酐鐵注射液組各15只，生理鹽水（NS）組5只。分別肌內注射右旋糖酐鐵注射液，劑量25mg/kg以及等體積NS，均與隔日后各組各處死3只動物，右旋糖酐鐵注射液組于給藥1、2、4wk后每組分別處死4只家兔，NS組于給藥4wk處死動物，剖檢后肉眼觀察內臟表現(xiàn)，同時采集肝、腎、注射部位肌肉組織作病理切片，光鏡下觀察細胞變化。第27頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六九、效果檢查試驗結果：

12061101批右旋糖酐鐵注射液組和市售右旋糖酐鐵注射液種制劑肌內注射均出現(xiàn)肝細胞腫脹和注射局部肌內損傷，市售右旋糖酐鐵注射液組病變較嚴重，具體比較見下表3所示。市售右旋糖酐鐵注射液組在第1天內因為過敏反應死亡兔子1只，公司產(chǎn)品組均無明顯變化。

優(yōu)化產(chǎn)品和市售右旋糖酐鐵注射液組織和病理切片觀察結果部位優(yōu)化組方后的產(chǎn)品市售產(chǎn)品注射部位肌肉變化肉眼可見注射部位變色，但3天后完全消退肉眼可見注射部位變色，但3天后完全消退；有1例發(fā)生注射部位肌肉萎縮肝臟血竇擴張，少量淋巴細胞增生，血竇壁含鐵色素沉著小灶性炎細胞浸潤及局部鐵色素沉著，1wk后出現(xiàn)肝血竇內少量炎細胞增生，肝細胞腫脹和局部出血性壞死灶及肝淤血心無明顯變化局部炎細胞浸潤性增生腎無明顯變化無明顯變化第28頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六九、效果檢查試驗過程試驗家兔肝臟圖片試驗家兔心臟圖片試驗家兔心臟圖片第29頁，共34頁，2023年，2月20日，星期六九、效果檢查

結論：優(yōu)化組方后的產(chǎn)品沒有明顯的過敏反應，對肝腎的損傷小，比現(xiàn)行市場單純性右旋糖酐鐵產(chǎn)品的臨床應用的副反應小。2右旋糖酐鐵注射液在仔豬中敏感性和有效性測定2012年6月到2012年8月，采用優(yōu)化后組方、工藝共生產(chǎn)3個批次產(chǎn)品，每個批次均進行了高于使用劑量1倍的敏感性測試實驗，結果不良反應率為零。臨床使用未發(fā)生不良反應投訴。臨床試驗同時證明了，注射右旋糖酐鐵注射液的仔豬比補飼其它鐵的仔豬補鐵效率更高，斷奶重、料肉比有更大的優(yōu)勢，說明用增加維生素B1和B6的右旋糖酐鐵比單純的有機鐵、無機鐵能更有效地改善斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，維生素同時能顯著提高仔豬抗病能力，增強免疫應答反應，此外還具有良好的抗應激功能，具有在