(74)-17.3手性高效液相色譜法

PharmaceuticalAnalysis

PharmaceuticalAnalysis手性高效液相色譜法

手性藥物與其活性的關(guān)系

手性藥物是指藥物分子結(jié)構(gòu)中引入手性中心后，得到的一對互為實物與鏡像的對映異構(gòu)體?？煞譃镽-或S-型、D-或L-型、左旋或右旋PharmaceuticalAnalysis沙利度胺鎮(zhèn)靜止吐致畸手性藥物與其活性的關(guān)系

對映異構(gòu)體有同等生物活性(R-和S-氟卡尼抗心率失常作用相同）A活性強弱不同(S-普萘洛爾相當(dāng)于R-普萘洛爾100倍)B有相反活性（R-沙利度胺鎮(zhèn)靜止吐，S型致畸）C有不同類型活性(右旋-奈必洛爾是β-受體阻斷劑，左旋具有保護(hù)心臟，給予消旋體后協(xié)同起效作為降壓藥)D手性色譜分離的作用

手性藥物對映體的純度檢查；探索對映體血藥濃度與臨床療效的關(guān)系；評價單個對映體的效價、毒性、不良反應(yīng)以及藥動學(xué)性質(zhì)；進(jìn)行手性藥物對映體的拆分及制備（必要時）手性藥物拆分方法與機理

引入手性環(huán)境（不對稱中心或光學(xué)活性分子）把對映體混合物轉(zhuǎn)換成為非對映異構(gòu)體，利用其化學(xué)或物理性質(zhì)的差異使之分開。手性HPLC拆分法分類

手性衍生化試劑法（間接法）

手性流動相拆分法（直接法）手性固定相拆分法（直接法）1.概述

是指藥物對映體在分離前先與具有高光學(xué)純度的手性衍生化試劑反應(yīng)，形成一對非對映異構(gòu)體，再以常規(guī)固定相進(jìn)行分離的方法。PharmaceuticalAnalysis手性衍生化試劑法手性衍生化試劑法

2.原理(R)-SE+(R)-SE–(R)-SA(R)-SE–(S)-SA(R)-SA

(S)-SA

SE光學(xué)活性試劑，也稱“選擇劑”SA手性溶質(zhì)，也稱“選擇靶”手性衍生化試劑法

3.注意事項手性試劑必須是高光學(xué)純度試劑衍生化反應(yīng)要定量完成（90-100%）手性待測物必須具有可反應(yīng)的活性基團如-NH2、-OH、-COOH等手性試劑及產(chǎn)物應(yīng)穩(wěn)定手性流動相拆分法（直接法）

指在流動相中加入手性添加劑，使其與待測物形成非對映異構(gòu)體復(fù)合物，根據(jù)復(fù)合物穩(wěn)定常數(shù)不同以及藥物與復(fù)合物在固定相上分配的差異而分離。PharmaceuticalAnalysis手性固定相拆分法（直接法）

利用手性固定相與對映體消旋物相互作用，生成不穩(wěn)定的短暫的對映體復(fù)合物，使兩種異構(gòu)體在色譜柱上的保留時間不同，從而得到分離。PharmaceuticalAnalysis手性固定相拆分法（直接法）

常用的手性固定相手性聚合物型固定相蛋白質(zhì)類固定相環(huán)糊精類固定相3種手性HPLC法的比較

手性HPLC法優(yōu)點缺點手性衍生化試劑法應(yīng)用條件簡易；固定相和流動相同普通HPLC衍生化手性試劑的光學(xué)純度要求高；異構(gòu)體對的衍生化速率不一致手性流動相拆分法不必作柱前衍生化；對色譜柱無特殊要求；化合物非對映異構(gòu)化具可逆性可拆分的化合物范圍有限；添加劑欠穩(wěn)定且往往干擾檢測手性固定相拆分法適用各類化合物；無需高純試劑；樣品分離簡單；定量準(zhǔn)確度高CSP柱昂貴，適用性差拆分實例

例

α1-酸性糖蛋白柱拆分布洛芬對映體色譜柱：手性AGP柱(100mm×4.0mm,5μm）流動相：甲