HPV檢測目的及最佳檢測方法

HPV病毒檢測的目的及最佳檢測方法現(xiàn)在是1頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

2主要內(nèi)容現(xiàn)在是2頁\一共有39頁\編輯于星期一

■

只是為了查有沒有HPV病毒感染？

■是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？

■是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預(yù)CIN2+的

風(fēng)險人群？3HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是3頁\一共有39頁\編輯于星期一專家對HPV檢測是否要臨床驗證如何看待？HPV檢測的目的是什么？1個HIV/HBV=AIDS/HBV1個HPV≠CIN或?qū)m頸癌

（80-90%的女性HPV感染是一過性的，可在6-24個月通過自體免疫清除）高危型HPV持續(xù)感會導(dǎo)致宮頸癌從HPV感染到宮頸癌，一般需要10－20年高分析敏感度檢測與臨床無關(guān)的病毒水平（假陽性）一過性的感染會自身清除恢復(fù)階段：免疫響應(yīng)早期感染會自身清除Snijdersetal.JournalofPathology2003;201:1-6現(xiàn)在是4頁\一共有39頁\編輯于星期一

HPV檢測的目的是什么？

HPV病毒含量與臨床病變的關(guān)系CIN病變進(jìn)展為高級病變無CIN病變CIN轉(zhuǎn)歸現(xiàn)在是5頁\一共有39頁\編輯于星期一WHO指南對于HPVCutoff有明確推薦檢測陽性判斷值6WHOguidelinesforscreeningandtreatmentofprecancerouslesionsforcervicalcancerprevention.?WorldHealthOrganization2013陽性判斷值（Cutoff）的設(shè)定，在2013年的WHO宮頸癌篩查和管理指南中是有具體建議的，其推薦高危型HPV檢測cut-off值≥1.0pg/mlHPV檢測的目的是什么？HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是6頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？7不再是單純的病毒檢測，而是強(qiáng)調(diào)“臨床”，不再是制造商說了算，而是臨床說了算陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是要獲得理想臨床敏感度和特異度的臨界值，制造商不能僅憑簡單的病毒檢測數(shù)據(jù)來制定，建議使用ROC曲線的方式進(jìn)行評估，這需要大量臨床檢測數(shù)據(jù)才能最終找到理想的臨界值2015年CFDA針對HPV檢測試劑陽性判斷值的規(guī)定：臨床靈敏度特異度的Cutoff值現(xiàn)在是7頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？82015年歐洲IPV大會：宮頸癌篩查HPV檢測目的HPV檢測不是為了檢測病毒，不是一過性感染，而是檢測感染病毒后的進(jìn)展風(fēng)險HPV檢測需要關(guān)注臨床敏感度，最大化的保護(hù)低風(fēng)險人群，最大化的辨別高風(fēng)險人群2015

IPV

Conference，Mark.Stoler現(xiàn)在是8頁\一共有39頁\編輯于星期一2016年CSCCP會議GreaterChinaCommericalSummit9HPV檢測不是僅僅為了檢出HPV感染，而是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預(yù)測CIN2+的風(fēng)險；對于HPV檢測來說，最重要的是臨床靈敏度和陰性預(yù)測值HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是9頁\一共有39頁\編輯于星期一WHO/IRAC明確檢測13種HPVTitle,Location,Date10從流行病學(xué)和致癌機(jī)制證據(jù)方面，WHO/IRAC明確檢測13種HPV型別：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68最強(qiáng)的致癌型別，幾個致癌位點已經(jīng)明確充足流行病學(xué)證據(jù)證實會導(dǎo)致宮頸癌缺乏宮頸癌流行病學(xué)證據(jù)，但從致癌機(jī)制上有強(qiáng)的證據(jù)支持2009WHOIARCSpecialReportPolicyAreviewofhumancarcinogensPartB現(xiàn)在是10頁\一共有39頁\編輯于星期一2015年中國CFDA明確HPV檢測型范圍11另外最多可包含5種不確定風(fēng)險的HPV型別高危型13種：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68若可檢測的HPV基因型別不能涵蓋上述13種高危型，則可能造成陰性預(yù)期值無法達(dá)到臨床要求，因此不能用于宮頸癌篩查。-------不能少?。?！宮頸癌相關(guān)檢測必須包含13種高危HPV型別可包含不確定其風(fēng)險的“中等風(fēng)險型”5種：HPV26、53、66、73、82HPV檢測型別太少的產(chǎn)品如只檢測5種型別、2種型別（如HPV16/18）等，將不能再注冊HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是11頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？

Title,Location,Date12限制申報其他型HPV如申報的宮頸癌相關(guān)HPV核酸檢測產(chǎn)品涉及上述18種以外的其他HPV基因型，則需提出明確理由和依據(jù)且應(yīng)得到國際有關(guān)權(quán)威機(jī)構(gòu)的文獻(xiàn)支持。限制申報低危型HPV不建議將低危型HPV檢測用于宮頸癌篩查若申請人提出低危型HPV檢測相關(guān)產(chǎn)品注冊，則應(yīng)詳細(xì)解釋其臨床意義和適應(yīng)癥，并提供充分的證據(jù)。不能盲目的追求過多的HPV檢測型別不建議將低危型HPV檢測用于宮頸癌篩查中國CFDA明確限制低危型HPV檢測現(xiàn)在是12頁\一共有39頁\編輯于星期一2015最新CFDA指導(dǎo)原則以服務(wù)臨床為最終目的13陽性判斷值設(shè)定與臨床風(fēng)險相關(guān)的陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)Cutoff臨床敏感度、特異度以CIN2+為臨床終點的敏感度和特異度臨床適應(yīng)癥初篩聯(lián)合篩查ASCUS分流一項檢測技術(shù)，要想滿足以上要求，必須基于長時間大量的臨床驗證才能實現(xiàn)2015年CFDA新的指導(dǎo)原則，從臨床目的出發(fā)，精確注冊標(biāo)準(zhǔn)要求現(xiàn)在是13頁\一共有39頁\編輯于星期一答案：

■只是為了查有沒有HPV病毒感染？NO

■是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？NO

■是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預(yù)CIN2+的風(fēng)險

人群？yes14HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是14頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

15主要內(nèi)容現(xiàn)在是15頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢查的最佳方法直接核酸檢測（無需PCR實驗室）雜交捕獲技術(shù)（HC2、DH1、DH2、DH3）酶切信號放大法（Cervista）核酸擴(kuò)增后檢測——PCR類技術(shù)（需PCR實驗室）

膜雜交法基因芯片法反向點雜交法流式熒光雜交法熒光探針法HPVDNA檢測技術(shù)分類現(xiàn)在是16頁\一共有39頁\編輯于星期一

HPV檢查的最佳方法

雜交捕獲技術(shù)（HPV檢測的金標(biāo)準(zhǔn)）

產(chǎn)品

德國凱杰的：HC2

杭州德同的：DH2、DH3

17HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是17頁\一共有39頁\編輯于星期一

雜交捕獲技術(shù)的三大優(yōu)勢：

1、獨特的探針技術(shù)：14種全長8000RNA探針，避免因

區(qū)域片段（如L1區(qū)）丟失造成的假陰性

2、無需DNA提取，無需核酸擴(kuò)增，有效避免因環(huán)境因素造

成的假陽性

3、統(tǒng)一的臨床判定標(biāo)準(zhǔn)≥1.0pg/ml，避免因方法

學(xué)靈敏度過高產(chǎn)生的假陽性，結(jié)果重復(fù)性好，準(zhǔn)確可靠。

18HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是18頁\一共有39頁\編輯于星期一雜交捕獲法獨特的探針技術(shù)HPV病毒基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，含有~8000個堿基對德同DH系列HPV檢測“全長雞尾酒”探針技術(shù)HPV188000bp，基于全長，涵蓋HPVDNA所有區(qū)域2＋12種不同型別探針混合準(zhǔn)確，不漏診CobasHPV&AbbottHPV(12+2Real-timePCR)“寡核苷酸探針”技術(shù)HPV16HPV1812種HR通用探針約200bp，僅基于L1片斷，

非全長僅3種探針混合病毒基因缺失、突變會造成漏診其他國產(chǎn)PCR方法“寡核苷酸探針”技術(shù)13種HR通用探針約100-150bp，僅基于L1片斷，非全長僅1種通用探針病毒基因缺失、突變會造成漏診HPV1612種HR通用探針德同DH系列HPV檢測“全長雞尾酒”探針技術(shù)Title,Location,DateCobasHPV&AbbottHPV(12+2Real-timePCR)“寡核苷酸探針”技術(shù)其他國產(chǎn)PCR方法“寡核苷酸探針”技術(shù)現(xiàn)在是19頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR和HC2的臨床敏感性比較：綜合1999-2005年間的主要研究

基于CIN2/3/癌癥的病例數(shù)〉1,500%PCRmedian82%HC2median94%現(xiàn)在是20頁\一共有39頁\編輯于星期一“L1片段的缺失并不普遍，但是任何變異或缺失都會造成PCR的檢測結(jié)果為陰性…”UngeretalJHC1998,46(4):535-540“L1片段是病毒衣殼蛋白，在HPV病毒引發(fā)的腫瘤進(jìn)展過程中是不必要的，因此很可能在HPV整合過程會導(dǎo)致L1片段的缺失”

Caponeetal,ClinCancerResearch2000,6:4171-4175“~5%的癌癥和CIN3會因為HPVL1片段的缺失而無法被檢測出來”

Lorincz(MethodsforHPVDetection);EmergingIssuesonHPVInfections:FromSciencetoPractice,Monsonego2006HPV病毒基因L1片段缺失現(xiàn)在是21頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR中β-球蛋白的競爭β-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinHPVHPVHPVHPVHPVHPVHPVβ-globinHPVHPVβ-globin反應(yīng)過程中的競爭會導(dǎo)致假陰性結(jié)果“β-球蛋白和HPV以共同引物L(fēng)1片段進(jìn)行擴(kuò)增，這樣會降低HPV檢測的敏感度”Coutleeetal.JCM2002;40(3):902-907現(xiàn)在是22頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR導(dǎo)致假陰性的原因不同HPV型別擴(kuò)增效率不同如果L1片段缺失，檢測失敗(整合型HPV)通用引物會和低危型HPV結(jié)合，抑制了目標(biāo)高危型別的擴(kuò)增內(nèi)指控（Beta-globin）會抑制HPV擴(kuò)增樣本抑制(有5％的樣品丟失因出現(xiàn)抑制而無法擴(kuò)増)現(xiàn)在是23頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR檢測可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果檢測與臨床不相關(guān)的感染樣本間的污染現(xiàn)在是24頁\一共有39頁\編輯于星期一缺乏統(tǒng)一的判定標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果受主觀因素影響雜交捕獲PCR經(jīng)臨床驗證的同一判定標(biāo)準(zhǔn)1.0pg/ml儀器判讀、結(jié)果客觀可靠統(tǒng)一的判定標(biāo)準(zhǔn)HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是25頁\一共有39頁\編輯于星期一為何要明確“臨床靈敏度和臨床特異度的Cutoff值”？262015

IPV

Conference，Mark.Stoler參考2015年世界IPV大會：理想的臨床靈敏度和特異度的臨界值（Cutoff），即及能夠保證對≥CIN2的病人具有非常高的檢出率的同時，又可以避免因分析敏感度過高而造成的假陽性臨床敏感度與疾病進(jìn)展風(fēng)險掛鉤分析敏感度與是否存在病毒感染掛鉤：PCR過于敏感的分析敏感度，會將病毒含量的人判斷為陽性HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是26頁\一共有39頁\編輯于星期一AdaptedfromSnijdersetal.JournalofPathology2003;201:1-6分HPV檢查的最佳方法析敏感度與臨床敏感度雜交捕獲HPVDNA檢測為陰性時并不代表體內(nèi)沒有HPV，表明樣品中HPV含量不足5000拷貝.雜交捕獲HPVDNA檢測為陽性時（高于以上標(biāo)準(zhǔn)）可以預(yù)測未來8-10內(nèi)患CIN2/3或者進(jìn)展為更高級別病變的風(fēng)險短暫及一過性的感染會通過自身免疫力清除PCR方法檢測HPV的分析敏感度可能<10拷貝現(xiàn)在是27頁\一共有39頁\編輯于星期一區(qū)別：分析敏感度與臨床敏感度分析敏感度PCR方法的分析敏感度達(dá)到10個拷貝/ml陽性結(jié)果：可能沒有臨床相關(guān)性臨床敏感度雜交捕獲的分析閾值經(jīng)臨床驗證為5,000個拷貝/ml經(jīng)臨床證實：高度的陰性預(yù)測值樣本中能檢測出的病毒最低水平也被稱作檢測極限(LOD)

統(tǒng)計學(xué)意義：檢測結(jié)果與零的區(qū)分以臨床病變?yōu)榻K點指征，檢測出高度病變的敏感度(CIN3+/SCC)

初篩時，能夠檢測出CIN2＋或?qū)m頸癌的比例分析閾值必須得到嚴(yán)格的驗證現(xiàn)在是28頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢查的最佳方法

雜交捕獲技術(shù)（HPV檢測的金標(biāo)準(zhǔn)）

產(chǎn)品

德國凱杰的：HC2

杭州德同的：DH2、DH329HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是29頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

30主要內(nèi)容現(xiàn)在是30頁\一共有39頁\編輯于星期一杭州德同DH系列產(chǎn)品

利用基因雜交、化學(xué)發(fā)光、信號放大的原理在分子水平檢測WHO認(rèn)可的14種高危型-HPV病毒DNA最新“2+12型”檢測設(shè)計(HPV16/18與其他12種型別檢測)德同產(chǎn)品原理-新一代雜交捕獲技術(shù)現(xiàn)在是31頁\一共有39頁\編輯于星期一DH產(chǎn)品系列可檢測的高危型HPV型別DH2HPV-16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68DH3HPV-16,18HPV-31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68

杭州德同DH系列產(chǎn)品具有48T、96T兩種規(guī)格現(xiàn)在是32頁\一共有39頁\編輯于星期一半自動檢測儀器全自動檢測儀器杭州德同DH系列產(chǎn)品檢測儀器現(xiàn)在是33頁\一共有39頁\編輯于星期一DH產(chǎn)品與HC2的臨床比對臨床比對HC2合計Kappa系數(shù)(95%CI)陽性陰性DH2陽性98049840.9864（97.70%-99.58%）陰性4415419合計9844191403陽性符合率（95%CI）99.59%（98.96%-99.89%）陰性符合率（95%CI）99.05%（97.57%-99.74%）總符合率（95%CI）99.43%（98.88%-99.75%）臨床比對HC2合計Kappa系數(shù)(95%CI)陽性陰性DH3陽性97179780.9662（95.14%-98.09%）陰性13413426合計9844201404陽性符合率（95%CI）98.68%（97.75%-99.29%）陰性符合率（95%CI）98.33%（96.60%-99.33%）總符合率（95%CI）98.58%（97.81%-99.13%）現(xiàn)在是34頁\一共有39頁\編輯于星期一孫小偉等，《中華腫瘤防治雜志》

2016年2月第23卷第3期137-140河南新密“兩癌”篩查項目DH2對CIN2+的檢出率顯著高于巴氏涂片和VIA/VILI現(xiàn)在是35頁\一共有39頁\編輯于星期一CobasHPVDH3HPVPvalueCIN2+Sensitivity123/135(91.1%,85.0-95.3)126/135(93.3%,87.7-96.9)0.650Specificity9667/10534(91.8%,91.2-92.3)9604/10534(91.2%,90.6-91.7)0.120PPV123/990(12.4%,10.4-14.6)126/1056(11.9%,10.0-14.0)0.736NPV9667/9679(99.9%,99.8-99.9)9604/9613(99.9%,99.8-100)0.663CIN3+Sensitivity77/83(92.8%,84.9-97.3)81/83(97.6%,91.6-99.7)0.277Specificity9673/10586(91.4%,90.8-91.9)9611/10586(90.8%,90.2-91.3)0.135PPV77/990(7.8%,6.2-9.6)81/1056(7.7%,6.1-9.4)0.934NPV9673/9679(99.9%,99.9-100.0)9611/9613(99.9%,99.9-100)0.175臨床試驗顯示：DH3具有與Cobas相同預(yù)測高級別病變的效能浙江龍游10669名健康婦女接受Cobas和DH3篩查結(jié)果比對現(xiàn)在是36頁\一共有39頁\編輯于星期一CobasHPVDH3HPVPvalueCIN2+Sensitivity108/135(80.0%,72.3-86.4)114/135(84.4%,77.2-90.1)0.426Specificity10143/10485(96.7