植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)專(zhuān)家講座

徐芬芬植物生理學(xué)試驗(yàn)上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第1頁(yè)植物生理學(xué)試驗(yàn)室規(guī)則

1、認(rèn)真預(yù)習(xí)試驗(yàn)。明確目標(biāo)，掌握原理，列出步驟，提出問(wèn)題。

2、認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察，從實(shí)統(tǒng)計(jì)。

3、正確操作儀器，不亂開(kāi)儀器。

4、注意安全和清潔衛(wèi)生（包含值日）。

5、正確處理廢物。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物試驗(yàn)示范中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第2頁(yè)試驗(yàn)匯報(bào)要求試驗(yàn)原理：簡(jiǎn)明扼要；材料：用什么？方法：實(shí)際操作過(guò)程；數(shù)據(jù)計(jì)算：原始數(shù)據(jù)，計(jì)算公式，結(jié)果。討論和分析：針對(duì)自己結(jié)果進(jìn)行。試驗(yàn)匯報(bào)在下一次試驗(yàn)時(shí)上交，但試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)須經(jīng)指導(dǎo)老師審核后才可離開(kāi)。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第3頁(yè)植物生理學(xué)試驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)課上：1、預(yù)習(xí)匯報(bào)2、認(rèn)真試驗(yàn)，操作規(guī)范，試驗(yàn)結(jié)果符合要求3、不遲到，不早退，主動(dòng)參加衛(wèi)生清掃上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第4頁(yè)課下：試驗(yàn)匯報(bào)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)1、卷面清潔，字跡工整10分2、語(yǔ)句通暢，簡(jiǎn)明扼要，邏輯性強(qiáng)，表示準(zhǔn)確無(wú)概念錯(cuò)誤20分3、預(yù)習(xí)匯報(bào)、試驗(yàn)原始統(tǒng)計(jì)、試驗(yàn)匯報(bào)齊全15分4、試驗(yàn)匯報(bào)格式規(guī)范，重點(diǎn)突出15分5、試驗(yàn)原始統(tǒng)計(jì)要如實(shí)認(rèn)真統(tǒng)計(jì)實(shí)際操作、察及測(cè)定結(jié)果20分6、對(duì)試驗(yàn)結(jié)果討論要充分有據(jù)，論點(diǎn)要正確，與該試驗(yàn)無(wú)關(guān)內(nèi)容不要寫(xiě)入?yún)R報(bào)中20分7、剽竊他人匯報(bào)者0分生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第5頁(yè)本學(xué)期試驗(yàn)內(nèi)容與安排

1、質(zhì)壁分離法測(cè)定植物組織滲透勢(shì)

2、植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量測(cè)定3、葉綠素a、b含量測(cè)定

4、赤霉素對(duì)水稻α-淀粉酶誘導(dǎo)形成5、植物呼吸強(qiáng)度測(cè)定

6、

種子活力快速測(cè)定—氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法7、丙二醛含量測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第6頁(yè)試驗(yàn)一

質(zhì)壁分離法測(cè)定植物組織滲透勢(shì)

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第7頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]觀察植物組織在不一樣濃度溶液中細(xì)胞質(zhì)壁分離產(chǎn)生過(guò)程及其用于測(cè)定植物組織滲透勢(shì)測(cè)定[試驗(yàn)原理]原生質(zhì)層（細(xì)胞膜、原生質(zhì)、液泡膜）含有選擇透過(guò)性，近似于半透膜，一個(gè)成熟植物細(xì)胞就是一個(gè)完整滲透裝置：當(dāng)外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時(shí)(高滲溶液），細(xì)胞失水，發(fā)生質(zhì)壁分離；當(dāng)外界溶液濃度小于細(xì)胞液濃度時(shí)（低滲溶液），細(xì)胞吸水；當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)汁液與其周?chē)撤N溶液處于滲透平衡狀態(tài)，當(dāng)外界溶液濃度等于細(xì)胞液濃度時(shí)（等滲溶液），植物細(xì)胞內(nèi)壓力勢(shì)為零時(shí)，細(xì)胞汁液滲透勢(shì)就等于該溶液滲透勢(shì)。細(xì)胞水勢(shì)等于細(xì)胞液滲透勢(shì)等于外界溶液滲透勢(shì)。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第8頁(yè)

質(zhì)壁分離及質(zhì)壁分離復(fù)原將植物組織置于對(duì)其無(wú)毒害一系列不一樣濃度溶液里處理一定時(shí)間，然后鏡檢發(fā)生質(zhì)壁分離情況，細(xì)胞等滲濃度將界于剛才引發(fā)初始質(zhì)壁分離濃度和不能引發(fā)質(zhì)壁分離濃度之間。代入公式即可計(jì)算滲透勢(shì)。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第9頁(yè)二、材料、器材與試劑1試驗(yàn)材料洋蔥表皮2試驗(yàn)儀器顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，記號(hào)筆，滴管。3試驗(yàn)試劑分別配制0.50、0.45、0.4、0.35、0.30、0.25、0.20、0.15、0.10mol/L蔗糖溶液，貯9個(gè)試劑瓶中。稱(chēng)34.23g蔗糖用蒸餾水配成100ml，其濃度為1mol/L(母液)。再配制成以下各種濃度：0.50mol/L：吸母液25ml+水25ml0.45mol/L：吸母液22.5ml+水27.5ml0.40mol/L：吸母液20.0ml+水30.0ml0.35mol/L：吸母液17.5ml+水32.5ml0.30mol/L：吸母液15.0ml+水35.0ml0.25mol/L：吸母液12.5ml+水37.5ml

0.20mol/L：吸母液10.0ml+水40.0ml

0.15mol/L：吸母液7.5ml+水42.5ml

0.10mol/L：吸母液5.0ml+水45.0ml生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第10頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)步驟1.取6套潔凈清潔小培養(yǎng)皿，用記號(hào)筆編號(hào)，將配制好不一樣濃度蔗糖溶液按次序倒入各個(gè)培養(yǎng)皿中使成一薄層，蓋好皿蓋。2.選取有色素洋蔥鱗片外表皮快速分別投入各種濃度蔗糖溶液中，每個(gè)培養(yǎng)皿中放材料3個(gè)左右，使其完全浸沒(méi)，浸泡20分鐘左右。3.到時(shí)后，取出表皮，放在載玻片上，滴一滴相同濃度蔗糖，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察質(zhì)壁分離細(xì)胞數(shù)假如全部細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，則取低濃度溶液中制片做一樣觀察，并統(tǒng)計(jì)質(zhì)壁分離相對(duì)程度。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第11頁(yè)4.在試驗(yàn)中確定一個(gè)引發(fā)半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛才從細(xì)胞壁角隅上分離最低濃度，和不引發(fā)質(zhì)壁分離最高濃度。5.在找到上述濃度極限時(shí)，用新溶液和新鮮葉片重復(fù)進(jìn)行幾次，直到有把握為止。在此條件下，細(xì)胞滲透勢(shì)與兩個(gè)極限溶液濃度之平均值滲透勢(shì)相等。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第12頁(yè)6．計(jì)算求得C1按下式計(jì)算滲透勢(shì)按ψπ=-iRTC1計(jì)算水勢(shì)值。C＝等滲溶液質(zhì)量摩爾濃度，單位是mol/kg；R＝氣體常數(shù)（0.008314MPa/L/mol/K）T＝絕對(duì)溫度i＝解離系數(shù)（蔗糖＝1，CaCl2＝2.60）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第13頁(yè)【思索題】

用質(zhì)壁分離法測(cè)定植物細(xì)胞滲透勢(shì)與用小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)都是以外液濃度算出溶質(zhì)勢(shì)為依據(jù)，他們之間區(qū)分何在。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第14頁(yè)試驗(yàn)二

植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第15頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]硝態(tài)氮是植物最主要氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量往往能反應(yīng)土壤中硝態(tài)氮供給情況，所以可作為土壤肥氮肥指標(biāo)。測(cè)定植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量，不但能夠反應(yīng)出植物氮素營(yíng)養(yǎng)情況，而且對(duì)判定蔬菜和植物為原料加工制品品質(zhì)也有主要意義。[試驗(yàn)原理]

在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可直接比色測(cè)定。

上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第16頁(yè)二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料白菜葉片（二）儀器設(shè)備及試劑1試驗(yàn)儀器722型分光光度計(jì)、電子天平。

2試驗(yàn)試劑（1）

500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確稱(chēng)取烘至恒重KNO30.7221克溶于無(wú)離水中，定容至200ml。

（2）

5%水楊酸一硫酸溶液稱(chēng)取5克水楊酸溶于100ml，濃硫酸中（密度為1.84），攪拌溶解后，貯于棕色瓶中。置冰箱保留一周有效。

（3）8%氫氧化納溶液稱(chēng)取10克氫氧化納溶于1升無(wú)離子水中即可。

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第17頁(yè)三、試驗(yàn)步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作

（1）吸收500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml.2ml.3ml.4ml.6ml.8ml.10ml.12ml分別放入501ml容量瓶中，用無(wú)離子定至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）吸收上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.11ml，分別放入刻度試管中，以0.11ml無(wú)離子水代替標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白，再分別加入0.4ml水楊酸一硫酸溶液，搖勻，在室溫下放置20分鐘后再加入8%NaOH溶液9.51ml搖勻冷卻至室溫，顯色液總體積為101ml。

（3）以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以NO3-N濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。上饒師范學(xué)院生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第18頁(yè)三、試驗(yàn)步驟

2.樣品中硝酸鹽測(cè)定

（1）樣品液制備，取一定量植物材料剪碎混勻后，準(zhǔn)確稱(chēng)取2-3克分別放入三支刻度試管中，加入10ml無(wú)離子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分鐘，到時(shí)間后取出，用自來(lái)水冷卻，將是取液過(guò)濾到25ml容量瓶中，并重復(fù)沖洗殘?jiān)疃ㄈ葜量潭取?/p>

（2）樣口液測(cè)定吸收樣品0.1ml分別于三支刻度試管中，然后加入5%水楊酸一硫酸溶液0.4ml，混勻后置室溫下20分鐘，再慢慢加入9.5ml8%NaOH溶液，待冷卻至室溫后，以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)期吸光度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得或用回歸方程計(jì)算出NO3--N濃度，再用下公式計(jì)算其含量。

生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第19頁(yè)

四、結(jié)果計(jì)算四氮唑還原強(qiáng)度：根重（g）×?xí)r間(h)mg/g(根鮮重)/h=四氮唑還原量（mg）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第20頁(yè)試驗(yàn)三

葉綠素a、b含量測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第21頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]

在未經(jīng)分離葉綠體色素溶液中測(cè)定葉綠素a和b方法及其計(jì)算。[試驗(yàn)原理]假如混合液中兩個(gè)組分，它們光譜吸收峰即使有顯著差異，但吸收曲線(xiàn)彼此有重合，在這種情況下要分別測(cè)定兩個(gè)組分，可依據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，經(jīng)過(guò)代數(shù)方法，計(jì)算一個(gè)組分因?yàn)榱硪粋€(gè)組分存在時(shí)對(duì)光密度影響，最終分別得到兩種組分含量。依據(jù)葉綠素a和b吸收光譜曲線(xiàn)，葉綠素a最大吸收峰在663nm，葉綠素b最大吸收峰在645nm,吸收曲線(xiàn)彼此又有重合。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第22頁(yè)生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第23頁(yè)生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第24頁(yè)依據(jù)朗伯-比爾定律，最大吸收光譜峰不一樣兩個(gè)組分混合液，它們濃度C與光密度OD之間有以下關(guān)系：OD1=Ca·ka1+Cb·kb1(1)OD2=Ca·ka2+Cb·kb2(2)式中，ka1、ka2、kb1、kb2分別為組分a、b在濃度1g/L時(shí)，對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)為λ1、λ2時(shí)光密度OD值，即比吸收系數(shù)。波長(zhǎng)/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60將表中數(shù)值代入（1）、（2）式，并解方程可得：Ca=0.00127OD663-0.00269OD645(3)Cb=0.0229OD645-0.00468OD663(4)將單位改為mg/L，于是總?cè)~綠素濃度為CT=Ca+Cb=8.02OD663+20.21OD645(5)生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第25頁(yè)1試驗(yàn)儀器高級(jí)型分光光度計(jì)，離心機(jī)，天平，剪刀，研缽，漏斗，移液管等。2試驗(yàn)試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂。3試驗(yàn)材料大葉黃楊葉片。二、試驗(yàn)材料、儀器與設(shè)備生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第26頁(yè)稱(chēng)取新鮮葉片0.5g→加純丙酮5ml研磨成勻漿→再加80%丙酮5ml，并轉(zhuǎn)入離心管→充分洗滌研缽→離心→定容至20ml→取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對(duì)照，測(cè)定光密度→計(jì)算各種濃度（Ca、Cb）。三、試驗(yàn)步驟生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第27頁(yè)四、試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算將測(cè)定得到吸光值代入下面式子：Ca=13.95A665－6.88A649Cb=24.96A649－7.32A665Cr=18.08A649+6.63A665

（Ca、Cb：mg/L）葉綠素含量（mg/g）=[葉綠素濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第28頁(yè)1因?yàn)橹参锶~子中含有水分，故先用純丙酮進(jìn)行提取，以使色素提取液中丙酮最終濃度近似80%。2因?yàn)槿~綠素a、葉綠素b吸收峰很陡，儀器波長(zhǎng)稍有偏差，就會(huì)使結(jié)果產(chǎn)生很大誤差。五、注意事項(xiàng)生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第29頁(yè)六、試驗(yàn)作業(yè)1、為何提取色素時(shí)先用純丙酮提取，再用80%丙酮提??？2、依據(jù)你試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算出該種植物葉綠素a、b比值。3、依據(jù)你試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算出該植物每克鮮重葉片中葉綠素含量（單位用mg·g-1FW表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第30頁(yè)試驗(yàn)四

赤霉素對(duì)水稻α-淀粉酶誘導(dǎo)形成生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第31頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]1．經(jīng)過(guò)試驗(yàn)深入了解赤霉素在種子萌發(fā)過(guò)程中調(diào)控作用。2．掌握測(cè)定α-淀粉酶活一個(gè)簡(jiǎn)便方法[試驗(yàn)原理]淀粉性種子在萌動(dòng)過(guò)程中，胚釋放出來(lái)赤霉素能誘導(dǎo)糊粉層細(xì)胞中α-淀粉酶基因表示，引發(fā)α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解為糖。外源赤霉素能代替胚分泌作用，誘導(dǎo)α-淀粉酶形成。β-淀粉酶也能將淀粉水解成還原糖，但β-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化。將酶液在高溫下維持一段時(shí)間，鈍化β-淀粉酶，可準(zhǔn)確測(cè)定α-淀粉酶活性。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第32頁(yè)二、試驗(yàn)材料、儀器、試劑1試驗(yàn)材料：水稻種子

2試驗(yàn)儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、恒溫箱、

水浴鍋、

移液管、

燒杯、

試管、青霉素小瓶、鑷子、刀片。

3試驗(yàn)試劑：2mol/LNaOH溶液、1%淀粉溶液、20mg/L赤霉素溶液、0.1mol/L(PH5.6)檸檬酸緩沖液、2，3，5-二硝基水楊酸（DNS）試劑生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第33頁(yè)三、試驗(yàn)步驟1.水稻種子選擇和預(yù)處理選取大小一致、健康水稻種子，一份放入盛有適量20mg/LGA溶液中，另一份放入盛有適量清水培養(yǎng)皿中處理24h,取出后用清水沖洗，置于培養(yǎng)箱中再陪養(yǎng)1d，處理與培養(yǎng)溫度均為30℃。2.酶提取取對(duì)照和GA3處理培養(yǎng)種子2g→磨成勻漿→到入50ml容量瓶中→用蒸餾水定容至刻度→混勻→放置15-20min（每2min震蕩一次）→離心（4000r/min,15min）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第34頁(yè)3.α-淀粉酶活性測(cè)定取試管4只→編號(hào)（清水試驗(yàn)；清水調(diào)零；GA3試驗(yàn)；GA3調(diào)零）→每管中各加入酶液1ml→70℃恒溫水浴加熱12min→各加入1ml檸檬酸緩沖液→①將試驗(yàn)管置于40℃恒溫水浴15min→再快速加入預(yù)熱淀粉溶液2ml→40℃恒溫水浴5min→加入NaOH溶液0.5ml終止反應(yīng)；②調(diào)零管中加入2mol/LNaOH溶液0.5ml→混勻→加入預(yù)熱淀粉溶液2ml.4.樣品測(cè)定取以上各管中溶液1ml于15ml刻度試管中→加入DNS試劑1ml→混勻→沸水煮沸5min→快速冷卻→定容至12ml→520nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第35頁(yè)四、結(jié)果計(jì)算

α-淀粉酶活性=（OD520×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重/反應(yīng)時(shí)間生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第36頁(yè)試驗(yàn)五

植物呼吸強(qiáng)度測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第37頁(yè)一、原理利用NaOH溶液滴定呼吸過(guò)程中釋放CO2，試驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留NaOH，從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過(guò)程中釋放CO2量。C6H12O6+6O2→6CO2+6H2O2NaOH+CO2→Na2CO3+H2O2NaOH+C2H2O4(草酸)→Na2C2O4(草酸鈉)+2H2O生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第38頁(yè)二、材料、儀器設(shè)備及試劑1.試驗(yàn)儀器錐形瓶，秒表，酸式滴定管，移液管，尼龍網(wǎng)袋2個(gè)。2.試驗(yàn)試劑1/44mol/L草酸溶液，0.2MNaOH溶液，1%酚酞。3.試驗(yàn)材料萌發(fā)水稻種子（48h）。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第39頁(yè)三、試驗(yàn)步驟

1.稱(chēng)取萌發(fā)水稻種子10g，裝入尼龍小袋內(nèi)，把小袋系到錐形瓶塞小鉤上。2.用移液管吸收20mlNaOH加入錐形瓶中，塞緊瓶塞并馬上計(jì)時(shí)。3.試驗(yàn)進(jìn)行30分鐘，其間每隔數(shù)分鐘輕輕搖瓶?jī)?nèi)堿液數(shù)次。4.打開(kāi)錐形瓶塞，滴入酚酞2滴，馬上用草酸滴定，滴定至紅色突然消失，記下滴定樣品消耗草酸※用量。5.另稱(chēng)取萌發(fā)水稻種子10g，用沸水煮5-10分鐘，作一樣測(cè)定，以此為對(duì)照。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第40頁(yè)四、試驗(yàn)結(jié)果用對(duì)照煮過(guò)種子消耗草酸量v0ml減去萌發(fā)樣品消耗草酸量v1ml，按每秒消耗1ml草酸相當(dāng)于1mgCO2來(lái)計(jì)算種子在呼吸時(shí)放出CO2mg數(shù)。呼吸強(qiáng)度（mgCO2?g-1FW?s-1）=1mgCO2?(v0-v1)?W-1?t-1式中，W為樣品質(zhì)量（克），t為呼吸連續(xù)時(shí)間（秒）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第41頁(yè)五、試驗(yàn)作業(yè)1.影響呼吸強(qiáng)度原因有哪些？2.為何用草酸滴定而不用鹽酸或硫酸滴定？3.依據(jù)你試驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算出水稻種子呼吸強(qiáng)度（單位用mgCO2·g-1FW·h-1表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第42頁(yè)試驗(yàn)六

種子活力快速測(cè)定

氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第43頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]

熟悉氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法測(cè)定種子活力方法及其計(jì)算?！驹囼?yàn)原理】凡有生活力種胚在呼吸作用過(guò)程中都有氧化還原反應(yīng)，而無(wú)生活力種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng)TTC溶液滲透種胚活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶(NADH2或NADPH2)還原時(shí)，可產(chǎn)生紅色三苯基甲(TTＦ)，胚便染成紅色。當(dāng)種胚生活力下降時(shí)，呼吸作用顯著減弱，脫氫酶活性亦大大下降，胚顏色改變不顯著，故可由染色程度推知種子生活力強(qiáng)弱。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第44頁(yè)二、材料、儀器設(shè)備及試劑1儀器培養(yǎng)皿2套；鑷子1把；單面刀片1片；墊板(切種子用)1塊；燒杯1個(gè)；棕色試劑瓶；解剖針1把；搪瓷盤(pán)1個(gè)；PH試紙。2試劑TTC溶液配制：取3gTTC溶于1L蒸餾水或冷開(kāi)水中，配制成0.1％TTC溶液。藥液PH應(yīng)在6.5～7.5，以PH試紙?jiān)囍?如不易溶解，可先加少許酒精，使其溶解后再加水)。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第45頁(yè)三、試驗(yàn)步驟1將水稻新種子、陳種子或死種子，用溫水(30℃)浸泡2～6H，使種子充分吸脹。2隨機(jī)取種子2份，每份200粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開(kāi)，取每粒種子二分之一備用。3把切好種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC溶液，以浸沒(méi)種子為度。4放入30～35℃恒溫箱內(nèi)保溫30Min。也可在20℃左右室溫下放置40～60Min。5保溫后，傾出藥液，用自來(lái)水沖洗2～3次，馬上觀察種胚著色情況，判斷種子有沒(méi)有生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第46頁(yè)四、注意事項(xiàng)1．TTC溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如需貯藏則應(yīng)貯于棕色瓶中，放在陰涼黑暗處，如溶液變紅則不可再用。2．染色溫度普通以25～35℃為宜。3．判斷有生活力種子應(yīng)具備特征：胚發(fā)育良好、完整、整個(gè)胚染成鮮紅色；子葉允許有小部分壞死，但其部位不是胚中軸和子葉連接處；胚根尖雖有小部分壞死，但其它部位完好。4．判斷無(wú)生活力種子應(yīng)具備特征：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子葉不染色或喪失機(jī)能組織超出1／2；胚染成很淡紫紅色或淡灰紅色；子葉與胚中軸連接處或在胚根上有壞死部分；胚根受傷以及發(fā)育不良未成熟種子。5．對(duì)于不一樣作物種子生活力測(cè)定，所需試劑濃度、浸泡時(shí)間、染色時(shí)間不一樣。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第47頁(yè)紅墨水染色法【試驗(yàn)原理】有生活力種子其胚細(xì)胞原生質(zhì)含有半透性，含有選擇吸收外界物質(zhì)能力，一些染料如紅墨水中酸性大紅G不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失活力種子其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收能力，染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色，所以可依據(jù)種子胚部是否染色來(lái)判斷種子生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第48頁(yè)儀器與試劑儀器與TTC法相同試劑紅墨水溶液配制：取市售紅墨水稀釋20倍(1份紅墨水加19份自來(lái)水)作為染色劑。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第49頁(yè)試驗(yàn)步驟1.先將待測(cè)種子用水浸泡3～4H，待充分吸脹后取出一部分種子，在沸水中煮沸3～5Min，作為死種子。2.取浸好新種子、陳種子和死種子各50粒，如為小麥和玉米，則用單面刀片沿胚部中線(xiàn)縱切成兩半，其中二分之一用于測(cè)定。3.將準(zhǔn)備好種子分別放在培養(yǎng)皿內(nèi)，加入紅墨水溶液，以浸沒(méi)種子為度。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第50頁(yè)4.染色10～20Min后傾出溶液，用自來(lái)水重復(fù)沖洗種子，直到所染顏色不再洗出為止。5.對(duì)比觀察沖洗后新種子、陳種子和死種子胚部著色情況。凡胚部不著色或略帶淺紅色者，即含有生活力種子，若胚部染成與胚乳相同紅色，則為死種子。生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第51頁(yè)思索題TTC法和紅墨水測(cè)定種子生活力有何不一樣？生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第52頁(yè)試驗(yàn)七

丙二醛含量測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)試驗(yàn)教學(xué)中心上饒師范學(xué)院植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)第53頁(yè)一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)、原理[試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)]熟悉葉片中丙二醛（MDA）測(cè)定方法及其計(jì)算。[試驗(yàn)原理]植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂過(guò)氧化作用，丙二醛（MDA）是膜脂過(guò)氧化作用最終分解產(chǎn)物，其含量能夠反應(yīng)植物遭受逆境傷害程度。丙二醛在酸性和高溫條件，能夠與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)生成紅棕色三甲川（3,5,5—三甲基惡唑2,4-二酮），在532nm處有最大光吸收，在600nm處有最小光吸收，該復(fù)合物吸光