DB4228T 57-2021甘薯脫毒種薯規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.01B23DB4228Technicalspecificationforstandardizedprofvirus-freetubersofsweetpotato恩施土家族苗族自治州市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB4228/T57—2021前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14脫毒組培苗快繁 25水培壯苗生產(chǎn) 36原原種生產(chǎn) 47原種生產(chǎn) 58生產(chǎn)用種生產(chǎn) 5附錄A（資料性附錄）MS培養(yǎng)基貯備液的配制 6附錄B（資料性附錄）水培營(yíng)養(yǎng)液貯備液的配制 7DB4228/T57—2021本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2020給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)附錄A、附錄B為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口管理。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院、湖北恩施中國(guó)南方馬鈴薯研究中心、恩施土家族苗族自治州農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、湖北清江種業(yè)有限責(zé)任公司、來(lái)鳳三豐時(shí)代農(nóng)業(yè)有限公司、巴東縣神峰薯業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：程群、瞿勇、徐怡、陳巧玲、葉興枝、沈艷芬、高劍華、李求文、楊國(guó)才、郝苗、宋威武、王甄、張等宏、閆雷、陳火云、陳家吉、楊曉華、張良、尹鑫、谷勇、趙錦慧、李雪晴、曾珍。1DB4228/T57—2021甘薯脫毒種薯規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本規(guī)程規(guī)定了甘薯脫毒組培苗的術(shù)語(yǔ)及定義、脫毒組培苗快繁、水培壯苗生產(chǎn)、原原種生產(chǎn)、原種生產(chǎn)及生產(chǎn)用種生產(chǎn)等。本規(guī)程適用于恩施州甘薯脫毒種薯的標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于該標(biāo)準(zhǔn)。GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)NY/T402脫毒甘薯種薯（苗）病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1200甘薯脫毒種薯NY/T3537甘薯脫毒種薯（苗）生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)及定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1脫毒組培苗virus-freetissuecultureplant簡(jiǎn)稱(chēng)脫毒苗，是應(yīng)用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的、經(jīng)檢測(cè)確認(rèn)不帶甘薯羽狀斑駁病毒（Sweetpotatofeatherymottlevirus,SPFMV）、甘薯潛隱病毒(Sweetpotatolatentvirus,SPLV)、甘薯黃矮病毒（SweetpotatoyellowdwarfvirusC,SPYDV）、甘薯明脈病毒（Sweetpotatoveinc-learingvirusG,SPVCV）、甘薯輕斑駁病毒（Sweetpotatomildmottlevirus,SPSMV）的試管苗。3.2水培壯苗hydroponicseedling脫毒組培苗切段在溫室扦插成活，剪取其主莖及側(cè)枝兩葉一心扦插成活的苗。3.3脫毒種薯virus-freeseedroots從繁殖脫毒苗開(kāi)始，通過(guò)生產(chǎn)水培苗經(jīng)逐代繁殖增加種薯數(shù)量的種薯生產(chǎn)體系生產(chǎn)出來(lái)的各級(jí)種薯。脫毒種薯分為原原種、原種和生產(chǎn)用種。3.4原原種pre-elite利用組培苗及水培苗在溫室條件和60目防蟲(chóng)網(wǎng)室下生產(chǎn)的符合NY/T1200的種薯。3.5原種elite2DB4228/T57—2021用原原種作種薯，在大于500m隔離條件下生產(chǎn)的符合NY/T1200的種薯。3.6生產(chǎn)用種certifiedseed用原種作種薯，在大于500m隔離條件下生產(chǎn)出的符合NY/T1200的種薯。4脫毒組培苗快繁4.1外植體處理選擇經(jīng)過(guò)品種登記且適宜本地區(qū)大面積推廣的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)或具有區(qū)域特殊用途的甘薯品種，質(zhì)量符合NY/T1200的要求。將選取的薯塊在溫室育苗，當(dāng)苗高20cm左右，選取莖頂端2cm長(zhǎng)芽段，剪去肉眼可見(jiàn)葉片，用自來(lái)水沖洗30min，經(jīng)70%酒精浸泡25s，再用0.1%氯化汞溶液消毒30s，5%次氯酸鈉溶液消毒處理10min，無(wú)菌水沖洗3遍。4.2莖尖分生組織培養(yǎng)4.2.1培養(yǎng)基的制備在每l000mlMS培養(yǎng)基(見(jiàn)附錄A)中加GA30.5mg、6-BA0.5mg、IAA0.1mg分裝入管。4.2.2莖尖撥離接種在超凈工作臺(tái)上體視顯微鏡下用手術(shù)刀等工具剝?nèi)ビ兹~，切取帶l～2個(gè)葉原基（約0.2mm～0.4mm）的莖尖,接種到MS加激素的培養(yǎng)基試管中，每管放1個(gè)莖尖，注明品種，莖尖號(hào)，接種日期。4.2.3組織培養(yǎng)在溫度28℃、光照16h/d、光照強(qiáng)度2000～3000Lx的條件下培養(yǎng)。25d后莖尖愈傷組織形成，轉(zhuǎn)入廣口瓶MS無(wú)激素培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)50d～60d，當(dāng)幼苗長(zhǎng)出5～7片葉時(shí)，進(jìn)行擴(kuò)繁。4.3病毒檢測(cè)采用癥狀學(xué)診斷法、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法、指示植物檢測(cè)法檢測(cè)病毒，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果出具檢驗(yàn)報(bào)告，脫毒組培苗未檢出甘薯羽狀斑駁病毒（SPFMV）、甘薯潛隱病毒(SPLV)、甘薯黃矮病毒（SPYDV）、甘薯明脈病毒（SPVCV）、甘薯輕斑駁病毒（SPSMV）等病毒則批準(zhǔn)進(jìn)行組培苗生產(chǎn)。4.3.1目測(cè)法先用癥狀學(xué)診斷法全面觀察組培莖尖苗的長(zhǎng)勢(shì)長(zhǎng)相,將長(zhǎng)勢(shì)弱,葉片黃化、黃脈和花葉等癥狀明顯的帶毒苗淘汰去除。4.3.2酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法當(dāng)單株的試管苗長(zhǎng)至展開(kāi)葉達(dá)6片以上時(shí)檢測(cè)，按株取其上、中、下部葉片用于酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)法初檢后，淘汰顯陽(yáng)性反應(yīng)的單株。檢測(cè)方法參照NY/T402執(zhí)行。4.3.3指示植物檢測(cè)法通過(guò)酶聯(lián)免疫檢測(cè)的健康植株繼續(xù)擴(kuò)繁，再用指示植物檢測(cè)法將生長(zhǎng)可疑的莖尖苗嫁接在巴西牽牛上，15d后觀察結(jié)果。檢測(cè)方法參照NY/T402中指示植物檢測(cè)法進(jìn)行。3DB4228/T57—20214.3.4脫毒苗復(fù)檢隨機(jī)抽取1%～2%脫毒試管苗再次檢測(cè)，經(jīng)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)淘汰陽(yáng)性反應(yīng)株后，再經(jīng)指示植物檢測(cè)確無(wú)癥狀后，可用于擴(kuò)大繁殖，檢測(cè)方法參照NY/T402測(cè)定。繼代擴(kuò)繁中選的脫毒苗，每年至少作一次病毒復(fù)檢。4.4組培苗繼代增殖培養(yǎng)經(jīng)過(guò)病毒檢測(cè)無(wú)病毒的試管苗，在無(wú)菌條件下按1葉1節(jié)切段，移入裝有MS培養(yǎng)基的廣口瓶中，在溫度28℃,光照16h/d，光照強(qiáng)度2000～3000Lx條件下培養(yǎng)。經(jīng)3d～5d腋芽萌發(fā)，30d后長(zhǎng)成5～7片葉的成苗?？梢赃B續(xù)切段增殖培養(yǎng)，繁殖系數(shù)3～5倍。5水培壯苗生產(chǎn)5.1溫室消毒用二氧化氯消毒劑對(duì)整個(gè)溫室熏蒸，視溫室大小設(shè)點(diǎn)，工作濃度1500mg/L，熏蒸點(diǎn)分布均勻，離地面高度1.5m。5.2煉苗篩選生根好、生長(zhǎng)健壯的甘薯脫毒組培苗放在經(jīng)過(guò)消毒的防蟲(chóng)溫室，于室溫、自然光下煉苗2d～3d。5.3水培苗扦插5.3.1水培前準(zhǔn)備用長(zhǎng)1.3m、寬1.0m、高0.05m的塑料盤(pán)作栽培盤(pán)，每盤(pán)加入30L～35L營(yíng)養(yǎng)液，營(yíng)養(yǎng)液上放置泡沫塑料板，泡沫塑料板按照3cm×4cm打孔。5.3.2扦插5.3.2.1誘導(dǎo)根原始體形成將煉苗后的脫毒組培苗從組培瓶中取出，保留原有根系2cm～3cm，用純凈水沖洗掉殘留培養(yǎng)基，再將組培苗栽于泡沫板上，水培盤(pán)中加入營(yíng)養(yǎng)液誘導(dǎo)根原始體形成，將栽好的水培苗置于溫度為24℃~28℃溫室中，自然光散射，5d～7d出現(xiàn)根原始體。營(yíng)養(yǎng)液配置參見(jiàn)附錄B表一。5.3.2.2生根培養(yǎng)水培苗根原始體形成后，將誘導(dǎo)根原始體的營(yíng)養(yǎng)液換成生根營(yíng)養(yǎng)液，置于溫度24℃~28℃溫室中，自然光散射，7d～10d水培苗新生根系長(zhǎng)度達(dá)到2cm～3cm。營(yíng)養(yǎng)液配置見(jiàn)參見(jiàn)附錄B表二。5.3.2.3生長(zhǎng)培養(yǎng)水培苗新生根系達(dá)到2cm～3cm，將生根營(yíng)養(yǎng)液換成繼代增殖生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)液。營(yíng)養(yǎng)液配置參見(jiàn)附錄B表三。5.3.2.4增殖擴(kuò)繁水培苗在防蟲(chóng)溫室培養(yǎng)11d～13d，長(zhǎng)到15cm～18cm時(shí)，可以剪成2葉節(jié)扦插，以苗繁苗。剩余莖段繼續(xù)培養(yǎng)于生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)液中，15d以后再次剪苗擴(kuò)繁。4DB4228/T57—20215.3.3病毒檢測(cè)按NY/T1200的要求執(zhí)行。6原原種生產(chǎn)用脫毒水培苗在60目以上網(wǎng)室內(nèi)隔離栽培。6.1扦插6.1.1基質(zhì)以蛭石、珍珠巖混合基質(zhì)為好，混合比例2：1，混合硫酸鉀復(fù)合肥N:P:K=15:15:15，并充分吸水，將混合基質(zhì)裝入適宜規(guī)格的育苗盤(pán)。每季種薯收后基質(zhì)應(yīng)嚴(yán)格烘炒消毒，一般可反復(fù)使用3～4年。6.1.2苗床準(zhǔn)備在網(wǎng)室內(nèi)用磚砌成寬1m、深25cm的苗床，底覆一層無(wú)防布，上鋪一層蛭石基質(zhì)，厚度約20cm。6.1.3定植當(dāng)擴(kuò)繁水培苗長(zhǎng)到12cm～15cm時(shí)，按20cm×25cm規(guī)格定植，定植前剪掉部分根須，保留須根3cm~5cm。6.3管理定植后早晚噴水濕潤(rùn)，陰雨天少澆或不澆，水質(zhì)應(yīng)符合GB5084規(guī)定。晴天需遮陽(yáng)，定植7d～10d水培苗長(zhǎng)出新根后，不再遮陽(yáng)。6.4病蟲(chóng)害防治防治對(duì)象、時(shí)期按NY/T1200執(zhí)行。發(fā)現(xiàn)病株連同薯塊拔除，帶出網(wǎng)室外銷(xiāo)毀。6.5原原種收獲當(dāng)?shù)販胤€(wěn)定在14℃~16℃時(shí)收獲，收獲時(shí)避免機(jī)械損傷和品種混雜。收后攤晾4d～7d，剔除爛薯、病薯、傷薯及雜物。6.6病毒檢測(cè)按照NY/T1200中第6條試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，并符合NY/T1200中第5條的要求。7原種生產(chǎn)7.1生產(chǎn)環(huán)境選用檢驗(yàn)合格的原原種生產(chǎn)原種。宜選擇海拔1200m以下土層深厚，疏松肥沃的中性或微酸性壤土或沙壤土，土壤環(huán)境應(yīng)符合GB15618要求。選擇至少3年以上沒(méi)種過(guò)甘薯的田塊，且500m以?xún)?nèi)無(wú)甘薯種植。7.2生產(chǎn)方法5DB4228/T57—2021按NY/T3537中第8條脫毒種薯（苗）生產(chǎn)規(guī)定執(zhí)行。7.3田間管理常規(guī)肥水管理，及時(shí)中耕除草。病蟲(chóng)害防治按NY/T1200執(zhí)行。7.4病毒檢測(cè)按照NY/T1200中第6條試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，并符合NY/T1200中第5條的要求。8生產(chǎn)用種生產(chǎn)8.1生產(chǎn)要求選用檢驗(yàn)合格的原種進(jìn)行生產(chǎn)。宜選擇海拔1200m以下土層深厚，疏松肥沃的中性或微酸性壤土或沙壤土，土壤環(huán)境符合GB15618規(guī)定，選擇無(wú)病田塊，且500m以?xún)?nèi)無(wú)甘薯種植的空間隔離條件。8.2生產(chǎn)方法執(zhí)行NY/T3537第8條脫毒種薯（苗）生產(chǎn)規(guī)定。8.3田間管理常規(guī)肥水管理，及時(shí)中耕除草。病蟲(chóng)害防治按NY/T1200執(zhí)行。8.4病毒檢測(cè)按照NY/T1200中第6條試驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，并符合NY/T1200中第5條的要求。6DB4228/T57—2021附錄AMS培養(yǎng)基貯備液的配制貯備液用量（mg/l)每升培養(yǎng)基取用量(ml)A硝酸銨(NH4NO3)硝酸鉀(KNO3)磷酸二氫鉀(KH2PO4)硫酸鎂(MgSO4·7H2O)氯化鈣(CaCl2)165001900037003330B硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)乙二胺四乙酸二鈉(Na2·EDTA)557074505C碘化鉀(KI)鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)硫酸銅(CuSO4·5H2O)氯化鈷(CoCl2·6H2O)硫酸錳(MnSO4·4H2O)硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)硼酸(H3BO3)83025022300860062001D鹽酸硫胺素(VB1)鹽酸吡哆素(VB6)甘氨酸煙酸肌醇400200005注：在配制貯備液A時(shí)，最后加氯化鈣；在配制貯備液B時(shí)，分別溶解FeSO4·7H2O和Na2·EDTA在各自的450ml蒸餾水中，適當(dāng)加熱并不停攪拌。然后將兩種溶液混合在一起，pH值到5.5，最后加蒸餾水定容到1000ml。培養(yǎng)基pH值5.8。7DB4228/T57—2021附錄B水培營(yíng)養(yǎng)液貯備液的配制表一誘導(dǎo)根原始體形成營(yíng)養(yǎng)液貯備液的配制貯備液用量（mg/l)每10升營(yíng)養(yǎng)液取用量(ml)A硝酸銨(NH4NO3)硝酸鉀(KNO3)磷酸二氫鉀(KH2PO4)硫酸鎂(MgSO4·7H2O)無(wú)水氯化鈣(CaCl2)165001900037003330B硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)乙二胺四乙酸二鈉(Na2·EDTA)55707450表二生根營(yíng)養(yǎng)液貯備液的配制貯備液用量（mg/l)每10升營(yíng)養(yǎng)液取用量(ml)A硝酸銨(NH4NO3)硝酸鉀(KNO3)磷酸二氫鉀(KH2PO4)硫酸鎂(MgSO4·7H2O)無(wú)水氯化鈣(CaCl2)165001900037003330250B硫酸亞鐵(FeSO4·7H2O)乙二胺四乙酸二鈉(Na2·EDTA)557074508DB4228/T57—2021C碘化鉀(KI)鉬酸鈉(Na2MoO4·2H2O)硫酸銅(CuSO4·5H2O)氯化鈷(CoCl2·6H2O)硫酸錳(MnSO4·4H2O)硫酸鋅(ZnSO4·7H2O)硼酸(H3BO3)83025022300