體外診療試劑培訓

體外診療產(chǎn)品生產(chǎn)監(jiān)管北京市醫(yī)療器械檢驗所體外診療試劑培訓1/34

主要內(nèi)容體外診療產(chǎn)品種類體外診療產(chǎn)品生產(chǎn)基本原理生化類產(chǎn)品免疫類產(chǎn)品分子類和血液類溯源性問題體外診療試劑培訓2/34

體外診療作用“醫(yī)生眼睛”預測和診療功效，如：血細胞抗體（肝炎、艾滋、IGE）基因（唐氏、小兒耳聾、遺傳缺點基因BRCA1）。療效和健康監(jiān)測，如：代謝物（血糖）標志物（AFP、PSA、HPV）蛋白、微量元素（白蛋白、Ca);體外診療試劑培訓3/34

體外診療產(chǎn)品類別體外診療依據(jù)風險分3類：III類：致病性病原體抗原、抗體以及核酸、人類基因檢測、腫瘤標志物、血型、組織配型、變態(tài)反應（過敏原）等；II類：除III、I類，如：蛋白質(zhì)、糖類、酯類、酶類、維生素、無機離子、激素等；I類：微生物培養(yǎng)基（不用于微生物判別和藥敏試驗）、樣本處理用產(chǎn)品，如溶血劑、稀釋液、染色液等。體外診療試劑培訓4/34

體外診療產(chǎn)品類別體外診療專業(yè)分類:生化、免疫、分子生物學、微生物、體液等,臨床使用超出千種。生化：生物化學反應或免疫反應(生化儀項目），酶類、糖類、脂類、蛋白、無機元素、肝功效、腎功等指標。免疫：抗原與抗體相結(jié)合特異性反應，傳染性疾病、內(nèi)分泌、腫瘤、藥品檢測、血型判定等。分子診療：分子生物學方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)或表示水平改變，主要用于肝炎、性病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等檢測。體外診療試劑培訓5/34

體外診療產(chǎn)品類別微生物：經(jīng)過培養(yǎng)判別細菌等微生物方法。血液學：經(jīng)過電阻抗、激光和高能電磁波等技術檢測血液中血細胞數(shù)量和分類方法。體外診療試劑培訓6/34

生化類產(chǎn)品基本方法生化分析儀反應普通稱為生化試劑兩點法、終點法、速率法、比濁法兩點法：測定酶反應開始后某一時間內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度總改變量以求取酶反應初速度方法。終點法：經(jīng)過測定酶反應開始到反應到達平衡時產(chǎn)物或底物濃度總改變量，以求出酶活力方法，亦稱平衡法。

速率法：是指連續(xù)測定(每15秒~1分鐘監(jiān)測一次)酶反應過程中某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間改變來求出酶反應初速度方法，即連續(xù)監(jiān)測法。透射比濁法透射比濁法可用于測定產(chǎn)生濁度反應項目。體外診療試劑培訓7/34

生化類產(chǎn)品基本方法

終點法慣用有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍法）。兩點法：

苦味酸法測定肌酐采取此法速率法對于酶活性測定，如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯(lián)法測定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測法。（7個酶加葡萄糖、尿素）免疫比濁法載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗“O”、類風濕因子，以及血清中其它蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。(蛋白）體外診療試劑培訓8/34

生化類產(chǎn)品說明書

生化分析儀說明書除法規(guī)相關要求外，還最少包含：適用機型反應溫度（37度）主波長、次波長

孵育時間（終點法或兩點法）延遲時間（連續(xù)監(jiān)測法）、連續(xù)監(jiān)測時間在延遲時間之后即開始，普通為60～120s不少于4個吸光度檢測點（3個吸光度改變值）；加樣量校準液個數(shù)（非線性必須兩個以上）等。體外診療試劑培訓9/34

標準液個數(shù)原因校準液個數(shù)濃度校準曲線線性好并經(jīng)過坐標零點，可采取一個校準液；線性好但不經(jīng)過坐標零點，應使用兩個校準液；對于校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個適當濃度。吸光度濃度105600030008體外診療試劑培訓10/34生化類產(chǎn)品基本原理氧化反應:還原反應：體外診療試劑培訓11/34

生化類產(chǎn)品質(zhì)量風險點分析原材料(輔酶I)（進貨檢驗統(tǒng)計或生產(chǎn)統(tǒng)計中，應包含輔酶空白吸光度檢驗統(tǒng)計，且不一樣類別符合下述特點）還原性輔酶I主要用于下降反應，當還原性輔酶I質(zhì)量出現(xiàn)問題時，試劑空白吸光度降低，造成試劑測量結(jié)果不確定度變大，測量靈敏度也隨之降低，測量線性范圍變小。氧化性輔酶I主要用于上升反應，當氧化性輔酶I質(zhì)量出現(xiàn)問題時，試劑空白吸光度升高，造成試劑測量結(jié)果不確定度變大，測量靈敏度也隨之降低，測量線性范圍變小。體外診療試劑培訓12/34

生化類產(chǎn)品質(zhì)量技術風險點分析生產(chǎn)統(tǒng)計中應包含試劑用水電導率、PH值及微生物檢驗統(tǒng)計酶反應水（PH）離子電導率微生物培養(yǎng)基溫度溫控系統(tǒng)體外診療試劑培訓13/34生化類產(chǎn)品質(zhì)量風險點分析留樣每批是否留樣留樣檢驗記錄，根據(jù)標準留樣檢驗真實性，檢查企業(yè)文件規(guī)定檢驗周期原料輔酶空白吸光度水同上純物質(zhì)（底物）檢查純度標識，或色譜的檢測結(jié)果記錄設備生化儀定期測試記錄分光光度計定期計量電導率儀定期計量分裝設備清洗記錄儲存環(huán)境檢查冷柜或冷庫的溫度記錄，酶類試劑2-8度，標準物質(zhì)-20度體外診療試劑培訓14/34

免疫類產(chǎn)品基本原理Elisa反應基本原理（酶標儀、發(fā)光儀等）將含有已知抗體抗血清吸附在微量滴定板上小孔里，洗滌一次；②加待測抗原，如二者是特異，則發(fā)生結(jié)合，然后把多出抗體洗除；③加入與待測抗原呈特異反應酶聯(lián)抗體（二抗），使形成“夾心”；④加入該酶底物，若看到有色酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在對應抗原。體外診療試劑培訓15/34

免疫類產(chǎn)品質(zhì)量技術風險點分析辣根過氧化物酶過氧化物酶（HRP）廣泛分布于植物中，辣根中含量最高，從辣根中提取稱辣根過氧化物酶（HRP），酶蛋白和輔基最大吸收光譜分別為275nm和403nm。酶純度以RZ表示：RZ=OD403/OD275純酶RZ多在3.0以上，最高為3.4。RZ在0.6以下酶制品為粗酶，非酶蛋白約占75%，不能用于標識。RZ在2.5以上者方可用于標識。（檢驗進貨檢驗統(tǒng)計或生產(chǎn)過程統(tǒng)計）體外診療試劑培訓16/34

免疫產(chǎn)品質(zhì)量風險點分析酶與抗體活性慣用瓊脂擴散或免疫電泳法，使抗原與抗體形成沉淀線，經(jīng)PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，假如出現(xiàn)應有顏色反應，再用生理鹽水浸泡，顏色依然不褪，表示結(jié)合物現(xiàn)有酶活性，也有抗體活性。良好結(jié)合物在顯色后，瓊擴滴度應在1:16以上。另一個測定方法是用系列稀釋酶標抗體直接以ELISA方法進行方陣滴定，此法不但能夠測定標識效果，還能夠確定酶標抗體使用濃度。體外診療試劑培訓17/34

免疫類產(chǎn)品質(zhì)量風險點分析在產(chǎn)品進貨檢驗統(tǒng)計或生產(chǎn)統(tǒng)計中檢驗以下內(nèi)容：1、酶標識二抗活性；2、用于ELISA結(jié)合物酶量為400(g/ml時效果普通，為500(g/ml時效果很好，達1000(g/ml時效果最好；3、酶結(jié)合率為7%時效果普通，為9%－10%很好，達30%以上最好；4、一抗進貨檢驗統(tǒng)計，單抗還是多抗，也可小樣測試活性；5、一抗包被工藝統(tǒng)計與質(zhì)量體系文件中要求是否一致；5、儲存環(huán)境同生化產(chǎn)品；體外診療試劑培訓18/34

分子類產(chǎn)品基本原理

PCR(聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配正確標準結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')方向合成互補鏈。基于聚合酶制造PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。體外診療試劑培訓19/34

分子類產(chǎn)品質(zhì)量風險點

1、引物質(zhì)量，多為購置，可做小樣，采購統(tǒng)計中查小樣測試統(tǒng)計；2、聚合酶質(zhì)量，多為購置，可測定，可做小樣，采購統(tǒng)計中查小樣測試統(tǒng)計；3、內(nèi)標：已知帶有引物片段樣本，與被測樣本同時擴增，應顯示陽性，檢驗測試統(tǒng)計；4、PCR生產(chǎn)企業(yè)控溫精度（95度、55度和75度）和改變率統(tǒng)計。5、實地檢驗PCR試劑質(zhì)控（內(nèi)標）和生產(chǎn)是否在各自獨立建筑中進行。而且試驗室分為試劑配制區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。而且考慮房間正負壓保護樣本不被污染、人員不被感染。95度(高溫）55度低溫75度（反應溫度）95度體外診療試劑培訓20/34

血液類產(chǎn)品基本原理懸浮在電解液中顆粒/細胞，隨電解液經(jīng)過小孔管時，因取代了相同體積電解液，在恒電流設計電路中造成小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時改變，而產(chǎn)生了電位脈沖。脈沖信號大小和次數(shù)與顆粒大小和數(shù)目成正比。體外診療試劑培訓21/34

血液類產(chǎn)品質(zhì)量控制點1、生產(chǎn)統(tǒng)計中檢驗溶血劑、稀釋液顆粒物、微生物檢驗統(tǒng)計；2、血細胞分析儀稀釋液生產(chǎn)車間需控制潔凈度和菌落數(shù)；3、檢驗室血液分析儀是否采取定值血定時校準；4、檢驗室血液分析儀內(nèi)部質(zhì)控結(jié)果，紅白偏差是否符合要求（尤其是血小板）。體外診療試劑培訓22/34

體外診療試劑溯源校準液個數(shù)濃度校準曲線線性好并經(jīng)過坐標零點，可采取一個校準液；線性好但不經(jīng)過坐標零點，應使用兩個校準液；對于校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個適當濃度。吸光度濃度105600030008體外診療試劑培訓23/34年國家食品藥品監(jiān)督管理局

體外診療試劑監(jiān)督抽驗—61個國產(chǎn)TG試劑新鮮混合血清最大正偏倚為22.1％，最大負偏倚為-18.9％，39%bias＜±5％體外診療試劑培訓24/34

體外診療試劑溯源校準品與質(zhì)控品區(qū)分校準品目標是為了產(chǎn)品準確性，溯源性是必須；質(zhì)控品目標是為了產(chǎn)品精密度，穩(wěn)定性是必須，可不具備溯源性。體外診療試劑培訓25/34溯源性有多主要？臨床檢驗：對搜集患者標本只做一次檢驗，就發(fā)出匯報準確性不足是主要臨床檢驗質(zhì)量問題影響檢驗結(jié)果“臨床準確性”原因是多方面－樣品采集與處理，病人準備，(生物變異)，人為錯誤－方法：正確度（校準）、精密度、特異性、線性、檢測限等溯源理論上處理是正確度問題(校準問題)體外診療試劑培訓26/34

體外診療試劑溯源體外診療試劑培訓27/34

體外診療試劑溯源標準物質(zhì)制造商選定方法主校準品制造商常設方法產(chǎn)品校準品常規(guī)方法血樣體外診療試劑培訓28/34體外診療試劑培訓29/34

體外診療試劑溯源1、有溯源性才能判斷準確性；2、檢驗結(jié)果才能互認；當前問題1、CRM缺乏；2、反應原理差異，造成結(jié)果有差異，但Cutoff值也不一樣，不影響臨床判斷，結(jié)果無法互認；3、各自溯源路徑不一樣，結(jié)果存在差異。體外診療試劑培訓30/34

體外診療試劑溯源當前采取準確性評價方法1.國家標準物質(zhì)、國際標準物質(zhì)（有溯源性）（查驗標準物質(zhì)證實材料，普通為證書）2.回收試驗（有一定溯源性）（添加物質(zhì)純度，試驗統(tǒng)計）3.與大企業(yè)比對（無溯源性）（樣本數(shù)，相關