維生素類藥物分析課件

第十四章維生素類藥物的分析

Chapter14AnalysisofVitamins學(xué)習(xí)要求掌握VitA的鑒別和含量測定；VitC的鑒別、檢查和含量測定。熟悉VitB1的鑒別和含量測定；VitE的鑒別、檢查和含量測定。了解VitD的鑒別、檢查和含量測定。概述一、概念維生素1）維持人體正常生理功能所必需的一類微量的生物活性物質(zhì)。2）大多數(shù)人體內(nèi)不能自行合成,必須從食物中攝取。

VitA缺乏—夜盲癥

VitB1缺乏—腳氣病VitC缺乏—壞血病VitD缺乏—＊如果人體缺少某種維生素，就會引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機能。結(jié)構(gòu)性質(zhì)VitA、D、E、B1、C鑒別試驗雜質(zhì)檢查含量測定VitA1：視黃醇，生物活性最高VitA2：去氫維生素，活性是VA1的30-40%VitA3：去水維生素，活性是VA1的0.4%第一節(jié)維生素A的分析

AnalysisofvitaminA

VitA故通常所說的維生素A是指維生素A1。人工合成的VA醋酸酯結(jié)晶加精制植物油制成的油溶液，還有VA膠丸、VAD膠丸和VAD滴丸Ch.P藥典收錄情況CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'R=HVitA

醇VA1retinolR=—COCH3VitA

醋酸酯vitaminAacetateR=—COC15H31

VitA

棕櫚酸酯vitaminApalmitateCH2OR去氫VitA（A2，dehydroretinol）CH2去水VitA（A3，anhydroretinol）6個共軛雙鍵（二）性質(zhì)Properties1溶解性2不穩(wěn)定性

3紫外吸收特性4與三氯化銻呈色＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。1溶解性VA光、熱、氧化劑、氧氧化產(chǎn)物（無活性）2不穩(wěn)定性＊共軛多烯側(cè)鏈—性質(zhì)不穩(wěn)定.臨床用其醋酸酯或棕櫚酸酯的油溶液密封、涼暗處保存，充氮氣或加入抗氧劑＊具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收。＊λmax=325～328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同鑒別、含量測定3紫外吸收特性★鑒別★含量測定4與SbCl3呈色—Carr-PriceVA藍色SbCl3CHCl3～紫紅色λmax

=620nm

a.

溶解性b.不穩(wěn)定性

c.紫外吸收特性

d.與SbCl3作用小結(jié).

維生素A結(jié)構(gòu)性質(zhì)CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'VitA(10～20IU/ml)藍色SbCl3/CHCl3～紫紅色無水/無醇（一）三氯化銻反應(yīng)Carr-Price反應(yīng)機理：VA與三氯化銻(SbCl3)中存在的SbCl5作用形成不穩(wěn)定的藍色正碳離子。注意事項：反應(yīng)需在無水、無醇條件下進行。溶劑：無水三氯化銻的無醇氯仿溶液乙醇可與正碳離子作用，使正電荷消失水可使SbCl3水解成SbOCl三、含量測定1紫外-可見分光光度法2比色法3高效液相色譜法（一）紫外-可見分光光度法Ch.P2005利用共軛多烯結(jié)構(gòu)，在325～328nm處有選擇性吸收峰（1）原因（2）原理（3）波長的選擇（4）測定方法方法：三點校正法——三波長測定法（1）原因為了消除雜質(zhì)（相關(guān)物質(zhì)）吸收所引起的誤差＊相關(guān)物質(zhì)—結(jié)構(gòu)相似,維生素A最大吸收波長附近也有吸收，對測定有影響。＊Morton和Stubbs等人在1946年提出了三點校正法。相關(guān)物質(zhì)的吸收＊d.

鯨醇：維生素A醇的二聚體，無生物活性＊a.

維生素A的衍生物（A2、A3）＊b.

維生素A的氧化產(chǎn)物＊c.

合成時的中間體＊e.

維生素A異構(gòu)體＊f.

稀釋用油（2）原理：假定、根據(jù)a:雜質(zhì)吸收在310nm～340nm范圍近似呈一條直線，隨λ↑,A↓b:物質(zhì)對光的吸收具有加和性A樣品=A維生素A+A相關(guān)物質(zhì)（3）波長的選擇2、3：分別在1兩側(cè)1：VitA的maxⅰ．等波長差法：ⅱ．等吸收比法：?。炔ㄩL差法：測VitA醋酸酯1=328nm;2=316nm;3=340nmii．等吸收比法：測VitA醇1=325nm;2=310nm;3=334nm*波長的選擇VA醋酸酯1=328nm2=316nm3=340nm?。炔ㄩL差法：ⅱ．等吸收比法：

2、3：分別在1兩側(cè)1：VitA的maxVA醇1=325nm2=310nm3=334nm（4）測定方法Ch.p收載有2種方法第一法（直接測定法）

測定對象

VA醋酸酯

等波長差法300、316、328、340、360nm325330波長：300、316、328、340、360nm測定：A0、A1、A2、A3、A4找到：λmax=328nm（326～329）

在326~329nm，第一法測定。不在326~329nm，第二法測定。計算比值：A0/A2、A1/A2

、A2/A2

、A3/A2

、A4/A2

比較：①算吸光度比值差測定波長吸光度吸光度比值吸光度比值差計算值規(guī)定值300

0.555

316

0.907

(325)

328

1.000

(330)

340

0.811

360

0.299

②判斷最大吸收波長是否在326～329之間是否計算吸收度比值之差是否超過±0.02第二法（皂化）是否A328

-15%-3%03%

皂化

A328（校正）A328皂化1IU的VitA=0.300ug的維生素A醇

=0.344ug的維生素A醋酸酯a:效價的定義：每g供試品中含有VitA的國際單位數(shù)。單位IU/g③計算1g維生素A醋酸酯=1g維生素A醇=換算因子（維生素A醋酸酯）=2907000/1530=1900換算因子（維生素A醇）=3330000/1820=1830b:換算因子的定義：單位數(shù)值所相當(dāng)?shù)男rC:求

A:A328校正

A328d:求效價e:求標(biāo)示量%小結(jié)：第一法（直接測定法）--VA醋酸酯①②判斷A328,A328校正④求效價⑤求③求已知：平均膠丸重為0.0815g維生素A的標(biāo)示量為10000IU/丸取樣：0.1279g→100ml，從中取出2ml→25ml.練習(xí)題：維生素A醋酸酯膠丸的含量測定求：維生素A醋酸酯的標(biāo)示百分含量。首先計算吸收度比值和吸收度比值差。由結(jié)果知，需計算校正吸收度。由此可知，應(yīng)該用測得的A328計算。第二法(皂化法)

測定對象VitA醇

等吸收比法300、310、325、334nm△皂化EtOH+KOH乙醚提取**樣品一定量水浴濃縮異丙醇溶介9～15IU/ml波長：300、310、325、334nm測定：A0、A1、A2、A3找到：λmax=325nm（323~327）

在323~327nm，皂化法測定。不在323~327nm，色譜法純化。計算比值：A0/A2----A300/A325①算吸光度比值②判斷吸光度比值是否≤0.73A325校正=6.815A325－2.555A310－4.260A334最大吸收波長是否在323～327之間是否A300/A325是否≤0.73色譜法純化是否A325校正=6.815A325-2.555A310-4.260A33403%－3%A325校正A325校正A325③求效價④⑤小結(jié)：測定方法第一法VA醋酸酯第二法VA醇λ323～327nm

A300/A325≤0.73λ326～329nm±0.02之間

超否A328±3%之間：A328-15%～-3%：A328校正<-15%或>+3%:皂化法±3%之間：A325<-3%或>+3%:A325校正色譜法A328校正=3.52（2A328－A316－A340）A325校正=6.815A325-2.555A310-4.260A334③求①判斷A②④小結(jié):VitA紫外分光光度法Ch.P2005方法：三點校正法——三波長測定法2、3：在1兩側(cè)?。炔ㄩL差法：ⅱ．等吸收比法：

1：VitA的max（1）原因：消除雜質(zhì)吸收所引起的誤差a:雜質(zhì)吸收在310nm-340nm范圍近似呈一條直線，隨λ↑,A↓b:物質(zhì)對光的吸收具有加和性（2）原理（3）波長的選擇（4）測定方法（二）三氯化銻比色法（三）高效液相色譜法思考題1、三點校正紫外分光光度法測定維生素A含量的依據(jù)（原理）是什么？2、三點校正紫外分光光度法測定維生素A醋酸酯含量時，換算因子是多少？寫出測定其膠丸含量時標(biāo)示量%的計算式。3、將維生素A溶于無水乙醇-鹽酸溶液中，測定紫外吸收光譜，在326nm波長處有一吸收峰，而將此液置水浴上加熱，冷卻后，在300-400nm范圍內(nèi)出現(xiàn)3個吸收峰，這是為什么？

小結(jié)：VitA的分析

a.

紫外吸收特性b.溶解性

c.不穩(wěn)定性d.與SbCl3作用結(jié)構(gòu)性質(zhì)鑒別試驗含量測定CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'Carr-Price、UV、TLC紫外-可見分光光度法三氯化銻比色法高效液相色譜法維生素A含量用生物效價表示，其效價單位是

A、IUB、gC、mlD、IU/gE、IU/ml已知每單位維生素A相當(dāng)于維生素A醋酸酯0.344g，其=1530，則換算因數(shù)等于

A、1820B、1830C、1900D、1920E、無法計算計算維生素A吸收度的校正公式為A328(校正后)=3.52(2A328-A316-A340)。如果校正后的吸收度與未校正的吸收度之差對未經(jīng)校正吸收度的百分比為-3.2%，則應(yīng)

A、用皂化法測定

B、用校正后的吸收度計算含量

C、用未校正的吸收度計算含量

D、改用另一校正公式計算

E、以上都不對維生素A的鑒別試驗為

A、三氯化鐵反應(yīng)B、硫酸銻反應(yīng)C、2,6-二氯靛酚反應(yīng)D、三氯化銻反應(yīng)E、間二硝基苯的堿性乙醇液反應(yīng)

維生素A具有易被紫外光裂解、易被空氣中氧或氧化劑氧化等性質(zhì)，是由于分子中含有（

）A、環(huán)已烯基B、2,6,6-三甲基環(huán)已烯基C、伯醇基D、乙醇基E、共軛多烯醇側(cè)鏈E哪些描述適合VitA結(jié)構(gòu)及性質(zhì)

A、分子具有長二烯醇側(cè)鏈，易被氧化

B、具有較長的全反式共軛多烯結(jié)構(gòu)

C.含酯鍵，經(jīng)水解后產(chǎn)生苯并二氫吡喃衍生物，易被氧化

D.與三氯化銻的無醇氯仿液中呈不穩(wěn)定蘭色，很快轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色

E、樣品用無水乙醇溶解后，加硝酸加后，呈橙紅色中國藥典（2000年版）規(guī)定維生素A的測定采用紫外分光光度（三點校正法），此法又稱為A、等波長差法B、等吸收比法C、6/7A法D、差示分光光度法E、雙波長分光光度法用“三點校正法”測定維生素A含量的依據(jù)是

A、維生素A可見光區(qū)有最大吸收

B、雜質(zhì)在310～340nm波長范圍內(nèi)呈線性吸收

C、物質(zhì)對光吸收具加和性

D、維生素A與三氯化銻的無水氯仿溶液作用，產(chǎn)生不穩(wěn)定藍色

E、維生素A在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成具有藍色熒光的硫色素第二節(jié)維生素B1的分析

AnalysisofvitaminB1氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)(季銨堿)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2還原性堿性酸性1、結(jié)構(gòu)(鹽酸硫胺)2、結(jié)構(gòu)特點a.氨基嘧啶—亞甲基—噻唑環(huán)季銨化合物b.堿性基團：嘧啶環(huán)上的氨基噻唑環(huán)上的季銨可與酸成鹽（一）、溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）、UVHCl(9→1000)λmax=246nm（三）、硫色素反應(yīng)硫色素OH-O藍色熒光VitB1正丁醇3、性質(zhì)（四）、沉淀反應(yīng)嘧啶環(huán)噻唑環(huán)生物堿沉淀劑沉淀（五）、具有兩個堿性基團，可以和酸成鹽?！邕颦h(huán)上的季銨▲嘧啶環(huán)上的氨基（六）、氯化物特性呈氯化物的反應(yīng)，用于鑒別（七）、硫化物特性VitB1Pb2+OH-△PbS↓二、鑒別試驗

（一）硫色素反應(yīng)Ch.P（2005）熒光消失正丁醇藍色熒光H+OH-硫色素鐵氰化鉀K3Fe(CN)6維生素????+-OH1BVB1專屬反應(yīng)，用于鑒別和含量測定。（三）其他反應(yīng)S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)小結(jié)：VitB1鑒別試驗O硫色素OH-藍色熒光VitB1正丁醇嘧啶環(huán)噻唑環(huán)生物堿沉淀劑沉淀Cl-反應(yīng)NaOHPb(NO3)2△PbSS元素反應(yīng)HNO3AgNO3AgCl↓（一）硫色素反應(yīng)Ch.P（2005）（二）沉淀反應(yīng)（三）其他反應(yīng)Cl2↑MnO2H+

KI-淀粉

藍色

三、含量測定非水滴定法（Ch.P2005測原料藥）紫外分光光度法（Ch.P2005測制劑）硫色素?zé)晒夥ü桄u酸重量法（一）非水堿量法VitB1原料醋酸汞：可與氫鹵酸鹽生成鹵化汞，消除氫鹵酸鹽的干擾1、原理VitB12HClO4冰醋酸Hg(Ac)2

VitB1·ClO4·HClO4溶劑：冰醋酸指示劑：ChP以喹那啶紅-亞甲藍（紫紅→天藍）滴定劑：高氯酸(0.1mol/L)醋酸汞：消除氫鹵酸鹽的干擾需要做空白試驗?zāi)柋龋?：22、方法3、計算要求：≥99.0%（二）UV法VitB1片劑、注射劑1、原理共軛體pH=2HCl(9→1000)

λmax=246nm2、計算VitB1片：90.0%～110.0%VitB1注射液：93.0%～107.0%（三）硫色素?zé)晒夥é薳x=365nm,λem=435nm（四）硅鎢酸重量法2VB1＋硅鎢酸白色沉淀＋4HCl1、原理2VB1的分子量為2×337.27沉淀的分子量為3479.222、計算換算因數(shù)=0.1939（含義：1g沉淀相當(dāng)于0.1939gVB1）鑒別試驗：

硫色素反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、其他反應(yīng)含量測定

非水堿量法、UV法、硫色素?zé)晒夥ā?/p>

硅鎢酸重量法小結(jié)：VitB1的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物

A、維生素AB、維生素B1C、維生素CD、維生素EE、煙酸下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍色熒光是

A、維生素AB、維生素B1C、維生素CD、維生素DE、維生素E烯二醇強還原性酸性L－抗壞血酸一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第三節(jié)維生素C的分析

內(nèi)酯環(huán)水解手性CUV與糖類結(jié)構(gòu)相似Vc易溶于水，水溶液呈酸性；三氯甲烷中不溶（一）溶解性（二）烯二醇結(jié)構(gòu)－還原性、酸性強還原性酸性一元酸由于共軛效應(yīng)的影響C3－OHpKa=4.17C2－OHpKa=11.5可與NaHCO3生成鈉鹽（三）手性C（C4、C5）旋光性

比旋度+20.50～+21.50

OOHHOO

COHHCH2OH123456**L(+)－抗壞血酸（活性最高）D(-)－異抗壞血酸（5%）L(+)－異抗壞血酸（無活性）D(-)－抗壞血酸（無活性）ＮaOH酮酸鹽（四）內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)水解性Ｎa2CO3單鈉鹽（五）與糖類結(jié)構(gòu)相似具有糖的性質(zhì)50℃（六）共軛雙鍵UV二、鑒別試驗IdentifactionTests

（一）與氧化劑反應(yīng)（強還原性）1、與AgNO3反應(yīng)Ch.P2005VitC2,6—二氯靛酚玫瑰紅色～無色2、與2,6—二氯靛酚反應(yīng)

Ch.P20053、與其他氧化劑的反應(yīng)碘或高錳酸鉀堿性酒石酸酮磷鉬酸→Cu2O↓磚紅色→鉬藍→試劑褪色（二）糖類的反應(yīng)VitC三氯醋酸戊糖50℃

吡咯水解、脫羧脫水糠醛（三）UV（BP）VitCH+0.01mol/LHClλmax=243nm小結(jié)：VitC的鑒別試驗（一）與氧化劑反應(yīng)（強還原性）1、與AgNO3反應(yīng)Ch.P20052、與2,6—二氯靛酚反應(yīng)Ch.P20053、與其他氧化劑的反應(yīng)（二）糖類的反應(yīng)（三）UV0.01mol/LHCl

λmax=243nm溶液的澄清度與顏色鐵、銅離子的檢查三、雜質(zhì)檢查1、溶液的澄清度與顏色：

有色雜質(zhì)：VitCPH、光線、空氣、溫度糠醛檢查方法分光光度法原料:溶液應(yīng)澄清無色

420nm，A<0.03注射劑：420nm，A<0.06片劑：440nm，A<0.072、鐵、銅離子的檢查方法：原子吸收分光光度法供試品+標(biāo)準(zhǔn)溶液a供試品b合格b＜

a-b標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收Fe：248.3nmCu：324.8nm（一）碘量法Ch.P2005原料、片劑、注射液（二）2，6-二氯靛酚反應(yīng)USPJP四、含量測定

（一）碘量法（原料、片劑、注射液）1、原理指示劑淀粉指示液

(無色→藍色）反應(yīng)摩爾比1∶12、方法取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。3、討論C、立即滴定減少O2的干擾A、新沸冷水趕走水中O2B、酸性環(huán)境稀醋酸減慢VitC被O2氧化速度D、附加劑干擾的排除VitC注射液—消除抗氧劑的干擾VitC注射液測定前要加丙酮NaHSO3抗氧劑COCH3CH3COH33CHCHNaSO34、計算原料藥：≥99.0%

注射劑：90.0%～110.0%

片劑：93.0%～107.0%

鑒別試驗：

硫色素反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、其他反應(yīng)含量測定

非水堿量法、UV法、硫色素?zé)晒夥ā?/p>

硅鎢酸重量法小結(jié)：VitB1的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2

（二）2,6—二氯靛酚滴定法1、原理USPJP2,6-二氯靛酚VitC酚亞胺H+

2、方法樣品空白HPO3-HAc二氯靛酚液V樣V空白自身指示終點法：玫瑰紅色，持續(xù)5秒不褪（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC

（2）快速滴定2min內(nèi)防止其他還原性物質(zhì)干擾

（3）測定對象：VC制劑及食品分析3、討論discuss

（4）缺點2,6－二氯靛酚不穩(wěn)定需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周干擾多氧化能力強小結(jié)：VitC的分析L－抗壞血酸溶解性強還原性酸性旋光性水解性糖的性質(zhì)UV與氧化劑反應(yīng)糖類的反應(yīng)UV溶液的澄清度與顏色鐵、銅離子的檢查碘量法2,6—二氯靛酚滴定法鑒別雜質(zhì)檢查含量測定維生素C的鑒別反應(yīng)是

A.與硝酸銀反應(yīng)

B.與2，6-二氯靛酚反應(yīng)

C.與三氯化鐵反應(yīng)

D.與茚三酮反應(yīng)

E.與碘化汞鉀反應(yīng)測定維生素C注射液的含量時,在操作過程中要加入丙酮，這是為了

A、保持維生素C的穩(wěn)定

B、增加維生素C的溶解度

C、使反應(yīng)完全

D、加快反應(yīng)速度

E、消除注射液中抗氧劑的干擾使用碘量法測定維生素C的含量，已知維生素C的分子量為176.13，每1ml碘滴定液(0.05mol/L)，相當(dāng)于維生素C的量為

A.17.61mgB.8.806mgC.176.1mgD.88.06mgE.1.761mg碘量法測定維生素C含量，取本品0.2000g，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml至溶液中，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，使溶液顯藍色并在30s內(nèi)不退，消耗碘溶液20.00ml。已知維生素C的分子量為176.13，求維生素C含量98.1%B.98.9%C.98.5%D.50.8%E.88.1%可發(fā)生以下反應(yīng)或現(xiàn)象的藥物為

A、維生素B1(鹽酸硫胺)B、維生素CC、兩者均能D、兩者均不能

121、與碘化汞鉀生成黃色沉淀

122、麥芽酚反應(yīng)

123、在乙醚中不溶

124、與2,6-二氯靛酚反應(yīng)使顏色消失

125、硫色素反應(yīng)ADCBA第五節(jié)維生素E的分析

AnalysisofvitaminE苯并二氫吡喃醇（一）、結(jié)構(gòu)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)名稱R1R2生物活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1√1OCH3R2HORCH3CH3CH3CH3CH3維生素EOCH3R2OR1COCH3CH3CH3CH3CH3CH3母核：苯并二氫吡喃醇衍生物苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基名稱：合成型dl—α—生育酚醋酸酯√天然型d—α—生育酚醋酸酯√側(cè)鏈：脂肪烷烴（二）、性質(zhì)1、溶解性—脂溶性2、UV—芳環(huán)3、水解性—乙?；姆恿u基H+orOH-△VitE生育酚[O]醌型化合物雜質(zhì)，需檢查二、鑒別試驗1、硝酸反應(yīng)(Ch.P2005)橙紅色75℃15’生育紅生育酚?????????]O[HNO3VitE2.三氯化鐵－聯(lián)吡啶反應(yīng)生育醌+Fe2+Fe3+聯(lián)吡啶血紅色生育酚（乙醚層）????KOHVitE3.UV法溶劑：無水乙醇濃度：0.01%

λmax

=284nm

λmin

=254nm4.TLC法薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷－乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃，5min）VitERf=0.7α-生育酚Rf=0.5α-生育醌Rf=0.9小結(jié)：VitE的鑒別試驗（一）硝酸反應(yīng)

（二）三氯化鐵反應(yīng)（三）UV（四）TLC75℃15’生育紅生育酚?????????]O[HNO3VitE聯(lián)吡啶血紅色生育醌+Fe2+Fe3+生育酚KOHVitE酸度游離生育酚三、雜質(zhì)檢查1、酸度---游離醋酸以NaOH滴定液（0.1mol/L）體積控制；酚酞指示劑；1.0g樣品不得超過0.5ml。2、游離生育酚的檢查生育酚

+2Ce4+

→2Ce3++對－生育醌原理：硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)≤1.0ml指示劑：二苯胺（亮黃→灰紫）反應(yīng)摩爾比1:2例：取本品0.10g,加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰液不得過1.0ml，求限量？四、含量測定（Assay）

（一）GCChP(2005)(法定方法)1、特點

選擇性好靈敏度高速度快分離效能好n≥500R≥2載氣：N2固定相：硅酮（OV—17）擔(dān)體：硅藻土或高分子多孔小球柱溫：265℃檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID）內(nèi)標(biāo)物：正三十二烷2、色譜條件3、方法--內(nèi)標(biāo)法內(nèi)標(biāo)物是樣品中不存在的物質(zhì)與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近內(nèi)標(biāo)法供試液：樣品+內(nèi)標(biāo)對照液：對照品+內(nèi)標(biāo)校正因子：（二）ＨＰＬＣｄｌ－生育酚外標(biāo)法此外，還有比色法、鈰量法、熒光法鑒別試驗：

硝酸反應(yīng)、三氯化鐵－聯(lián)吡啶、UV法、TLC法雜質(zhì)檢查：酸度、游離生育酚含量測定：

GC法、HPLC法小結(jié)：VitE的分析檢查維生素E中的游離酚時，采用方法應(yīng)為

A、對照法

B、靈敏度法

C、紫外分光法

D、滴定法

E、旋光法中國藥典采用氣相色譜法測定維生素E含量，內(nèi)標(biāo)物質(zhì)為

A、正二十二烷

B、正二十六烷

C、正三十烷

D、正三十二烷

E、正三十六烷用氣相色譜法測定維生素E的含量，中國藥典（2005年版）規(guī)定采用的檢測器為

A.紫外檢測定器

B.熒光檢測定器

C.熱導(dǎo)檢測器

D.氫火焰離子化檢測器維生素E的鑒別試驗有

A、硫色素反應(yīng)

B、硝酸氧化呈色反應(yīng)

C、硫酸-乙醇呈色反應(yīng)

D、堿性水解后加三氯化鐵乙醇液與2,2-聯(lián)吡啶乙醇液呈色反應(yīng)

E、Marquis反應(yīng)維生素D是一類抗佝僂病維生素的總稱。目前已知的維生素D類物質(zhì)至少有十種之多，它們都是甾醇的衍生物。第四節(jié)維生素D的分析

維生素D2、D3原料藥維生素D2膠丸和注射劑維生素D3注射劑Ch.P藥典收錄情況一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)VD2—骨化醇或麥角骨化醇VD3－膽骨化醇比VD2少一個雙鍵，C24上少一個CH31、溶解性－脂溶性2、開環(huán)的甾體－具有甾體的顯色反應(yīng)3、手性C原子－具有旋光性VD2：6個手性碳，VD3：5個手性碳

4、多烯－不穩(wěn)定性具有紫外吸收二、鑒別試驗

(IdentifactionTests)(一)顯色反應(yīng)醋酐-濃硫酸反應(yīng)2.三氯化銻反應(yīng)3.其它D2：黃→紅→紫→綠D3：黃→紅→紫→藍綠→綠橙紅色～粉紅色D+三氯化鐵D+二氯丙醇和乙酰氯橙黃色綠色(二)比旋度測定注意事項：應(yīng)于容器開啟30分鐘內(nèi)取樣在溶液配制后30分鐘內(nèi)測定(三)區(qū)分反應(yīng)S+85%硫酸→D2顯紅色，λmax=570nmD3顯黃色，λmax=495nm(四)其他方法TLC、HPLC、制備衍生物測熔點三、雜質(zhì)檢查(一)麥角甾醇的檢查:

樣品溶液加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生混濁或沉淀。(二)前維生素D的光照產(chǎn)物四、含量測定方法（Assay）Ch.P(2005版)采用正相高效液相色譜法測定維生素D的含量，定量方法為內(nèi)標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)物為鄰苯二甲酸二甲酯，該法分為三個方法。固定相：硅膠流動相：正己烷－正戊醇（997：3）第一法：用于無VitA醇及其它雜質(zhì)干擾的情況第二法：用于有雜質(zhì)干擾的情況皂化提取→凈化處理→測定第三法：用于經(jīng)第二法處理后仍有雜質(zhì)干擾的情況供試品→按第二法凈化處理→水浴加熱用碘量法測維生素C含量時，加新煮沸放冷的蒸餾水目的是：（

）A、使維生素C溶解B、除去水中微生物的影響C、使終點敏銳D、除去水中二氧化碳的影響E、消除水中溶解氧的影響維生素C能與硝酸銀試液反應(yīng)生成去氫抗壞血酸和金屬銀黑色沉淀，是因為分子中含有（

）A、環(huán)已烯基B、伯醇基C、仲醇基D、二烯醇基E、環(huán)氧基維生素C一般表現(xiàn)為一元酸，是由于分子中（

）A、C2上的羥基B、C3上的羥基C、C6上的羥基D、二烯醇基E、環(huán)氧基中國藥典測定維生素E含量的方法為A、氣相色譜法B、高效液相色譜法C、碘量法D、熒光分光光度法E、紫外分光光度法下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍色熒光的是（）A、維生素AB、維生素B1

C、維生素CD、維生素DE、維生素E2.6－二氯靛酚法測定維生素C含量，終點時溶液（

）A、由紅色→無色B、由藍色→無色C、由無色→紅色D、由無色→藍色E、由紅色→藍色需檢查特殊雜質(zhì)游離生育酚的藥物是A、維生素AB、維生素B1C、維生素CD、維生素EE、維生素D紫外法測定維生素A含量，測得校正后的A值與未校正的A值的差值再除以未校正的A值為－10%。A、改用色譜法測定B、應(yīng)按“其它維生素A”規(guī)定的方法測定C、不需要校正，仍按原來的A值計算D、應(yīng)以校正后的A值計算含量E、改用第二法測定硫色素?zé)晒夥y定維生素B1溶液，測得對照熒光強度為45%（濃度2.0μg/ml）,空白液熒光強度為5%；樣品熒光強度為55%，空白液熒光強度為5%。維生素B1溶液的含量為