瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座

背景瘧疾在我國(guó)古代稱為瘴氣，國(guó)外稱malaria，為意大利文mala（不良）與aria（空氣）二字合成。本病是由雌按蚊叮咬人體，將其體內(nèi)寄生瘧原蟲傳入人體而引發(fā)。瘧疾是以周期性冷熱發(fā)作為最主要特征，脾腫大、貧血以及腦、肝、腎、心、腸、胃等受損引發(fā)各種綜合征瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第1頁(yè)分類寄生于人體瘧原蟲有4種，即間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第2頁(yè)發(fā)病機(jī)制瘧原蟲在紅細(xì)胞中增殖成裂殖子，使紅細(xì)胞脹大破裂時(shí)，大量裂殖子和瘧原蟲代謝產(chǎn)物進(jìn)入血流，引發(fā)異性蛋白反應(yīng)，機(jī)體肌肉收縮產(chǎn)熱，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬細(xì)胞功效增強(qiáng)，故可引發(fā)肝、脾腫大，屢次發(fā)作可致貧血等。瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)增殖成熟所需時(shí)間不一樣，間日瘧和卵形瘧為48小時(shí)，三日瘧為72小時(shí)，惡性瘧為24～48小時(shí)，故臨床上出現(xiàn)周期性發(fā)作瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第3頁(yè)生活史瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第4頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第5頁(yè)抗瘧原蟲治療控制臨床發(fā)作藥品：氯喹、青蒿素類（青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、雙氫青蒿素）。預(yù)防復(fù)發(fā)：伯氨喹啉、磷酸哌喹瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第6頁(yè)

試驗(yàn)室檢驗(yàn)

血片制作血片染色瘧原蟲鏡檢瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第7頁(yè)載玻片：無(wú)油跡、無(wú)灰塵，無(wú)劃痕、清潔推片：邊緣光滑無(wú)缺口采血部位：耳垂、手指、足跟血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3推片與載玻片角度：25-30度大?。罕⊙?.5-2cm，厚血膜直徑0.8-1cm血片制作瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第8頁(yè)血片制作位置：通常是將厚、薄血膜涂在一張載片上。方法是將載片分為6等分，第1、2格備貼標(biāo)簽及編號(hào)用；厚血膜在第2、第3格交界處，薄血膜在第3格中央至第6格中部。作為標(biāo)本血片每張玻片涂厚、薄血膜各1個(gè)?；?qū)⑤d片分為6等分，第1、2格備貼標(biāo)簽及編號(hào)用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前緣至第6格中部。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第9頁(yè)血片制作—采血瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第10頁(yè)玻片執(zhí)持瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第11頁(yè)厚血膜位置：第2第3格中央

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第12頁(yè)

推片邊緣沾取少許血液至玻片中部瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第13頁(yè)玻片和推片之間角度25-30度

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第14頁(yè)呈舌狀樣薄血膜（2㎝寬）

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第15頁(yè)血片染色染色前處理薄血膜用甲醇固定厚血膜進(jìn)行溶血瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第16頁(yè)薄血膜用甲醇固定

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第17頁(yè)

厚血膜必須當(dāng)日溶血，普通不宜超出24小時(shí)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第18頁(yè)經(jīng)甲醇固定、溶血處理后血片瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第19頁(yè)吉氏染液:吉氏（Giemsa）染劑粉0.5克甘油25毫升甲醇25毫升瑞氏染液:瑞氏染劑粉0.2克甲醇100毫升甘油3毫升（染液配制好后要過(guò)濾）染液（原液）配方瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第20頁(yè)吉氏染液配制吉氏染劑粉→研缽→甘油→研磨→甲醇洗去甘油溶液→有色玻璃瓶中→每日用力搖動(dòng)5min，室溫一月后應(yīng)用。（此染液為原液）瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第21頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第22頁(yè)吉氏染色方法成批染色：3％吉氏稀釋液滴加(或在染色缸內(nèi)染色亦可），→30分鐘→用水沖潔凈，涼干。單片染色：1毫升蒸餾水加1滴吉氏原液，染色30-40分鐘；(或10%吉氏稀釋液，染色10-15分鐘)。其它同上。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第23頁(yè)瑞氏染液配制將瑞氏染劑粉1g置于研缽內(nèi)，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研缽中甘油溶液，倒入瓶中，搖勻后置室溫下，天天搖動(dòng)5分鐘，3天后即可使用。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第24頁(yè)瑞氏染色方法厚、薄血膜間用蠟筆劃一橫線。薄血膜不用固定，厚血膜需溶血。在薄血膜上滴加瑞氏染液5－8滴，染色2分鐘后，再加與染液等量水于薄血膜上，用吸管將染液與蒸餾水混合均勻后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10分鐘。用清水輕輕沖去染液，晾干。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第25頁(yè)厚薄血膜標(biāo)準(zhǔn)厚血膜血量適宜，不宜過(guò)多或過(guò)少

薄血膜平整，無(wú)皺折和空泡，紅細(xì)胞單層排列瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第26頁(yè)血量血膜厚薄血膜固定染液（原液）質(zhì)量、陳舊染液濃度、氣溫及染色時(shí)間稀釋液配制時(shí)間稀釋用水酸堿度鏡檢技能（滴加鏡油，100倍油鏡頭檢驗(yàn)；自上而下、自左而右逐一視野次序檢驗(yàn)）顯微鏡質(zhì)量

血片制作、染色、鏡檢中應(yīng)注意事項(xiàng)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第27頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第28頁(yè)自動(dòng)化染片瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第29頁(yè)鏡檢瘧原蟲三要素

核---鮮紅色

胞漿---藍(lán)色

瘧色素---黃褐色或黑褐色，瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第30頁(yè)薄血膜中常見血液成份瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第31頁(yè)人類四種瘧原蟲基本特征間日瘧原蟲惡性瘧原蟲三日瘧原蟲卵形瘧原蟲環(huán)狀體滋養(yǎng)體裂殖體配子體瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第32頁(yè)瘧原蟲圖譜

間日瘧三日瘧惡性瘧卵形瘧瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第33頁(yè)間日瘧早期滋養(yǎng)體--環(huán)狀體

約占寄生紅細(xì)胞1/3，極少見到一個(gè)紅細(xì)胞寄生2個(gè)環(huán)狀體和一個(gè)環(huán)狀體有2個(gè)核。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第34頁(yè)

間日瘧滋養(yǎng)體-大滋養(yǎng)體經(jīng)8～10小時(shí)，蟲體增大，胞質(zhì)增多，伸出偽足。出現(xiàn)黃褐色瘧色素。紅細(xì)胞脹大，變形，顏色變淡，并出現(xiàn)數(shù)量較多，淡紅色小點(diǎn)，稱薛氏小點(diǎn)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第35頁(yè)間日瘧裂殖體2.1未成熟裂殖體（immature

schizont）經(jīng)40小時(shí)晚期滋養(yǎng)體發(fā)育成熟，蟲體變圓，空泡消失核開始分裂又稱裂殖體前期色素聚集成團(tuán)塊成熟裂殖體約有12－24個(gè)細(xì)胞核胞漿也隨之分裂受染RBC脹大、顏色蒼白、蟲體幾乎充滿紅細(xì)胞瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第36頁(yè)

間日瘧原蟲雌配子體蟲體較大，占滿脹大紅細(xì)胞胞質(zhì)致密，色深藍(lán)核小致密，深紅色，多位于蟲體一側(cè)瘧色素分散

間日瘧原蟲雄配子體蟲體較小，占滿脹大紅細(xì)胞胞質(zhì)淺藍(lán)核大疏松，淡紅色，多位于蟲體中央。瘧色素分散瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第37頁(yè)紅細(xì)胞通常漲大薛氏點(diǎn)顯著成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體有阿米巴樣偽足可見不一樣發(fā)育期原蟲

間日瘧（P.vivax）判定關(guān)鍵點(diǎn)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第38頁(yè)惡性瘧原蟲--環(huán)狀體環(huán)纖細(xì),約為RBC直徑1/6，RBC不脹大可見數(shù)粒，大小不一，紅色粗大茂氏點(diǎn)核1個(gè)，但2個(gè)常見，紅細(xì)胞常含2個(gè)以上原蟲蟲體常位于紅細(xì)胞邊緣，呈“飛鳥狀”不帶色素瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第39頁(yè)惡性瘧原蟲—大滋養(yǎng)體

普通不出現(xiàn)在外周血蟲體小堅(jiān)固，圓形，不活動(dòng)瘧色素集中一團(tuán)，黑褐色原蟲此時(shí)開始集中在內(nèi)臟毛細(xì)血管瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第40頁(yè)惡性瘧成熟裂殖體

裂殖子8～36個(gè)，通常18～24個(gè)，排列不規(guī)則瘧色素集中成一團(tuán)蟲體占紅細(xì)胞體積2/3至3/4

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第41頁(yè)惡性瘧原蟲雌配子體新月形，兩端較尖核致密，深紅色，常位于中央瘧色素黑褐色，分布于核周圍瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第42頁(yè)惡性瘧原蟲雄配子體臘腸形，兩端鈍圓胞質(zhì)色藍(lán)而略帶紅核疏松，淡紅色，位于中央瘧色素黑褐色，小桿狀，在核周圍較多

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第43頁(yè)環(huán)狀體纖細(xì),紅細(xì)胞不漲大一個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)可有幾個(gè)環(huán)狀體環(huán)狀體內(nèi)可有2個(gè)核

環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞邊緣

血片中沒有其它發(fā)育期，通常只有環(huán)狀體和配子體配子體呈新月形或臘腸形可出現(xiàn)茂氏點(diǎn)惡性瘧（P.falciparum）判定關(guān)鍵點(diǎn)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第44頁(yè)惡性瘧發(fā)育特征

惡性瘧原蟲因?yàn)樵诎l(fā)作間歇期，絕大部分瘧原蟲要進(jìn)入內(nèi)臟毛細(xì)血管發(fā)育，周圍血液內(nèi)僅能發(fā)覺環(huán)狀體和配子體。惡性瘧在發(fā)作期為最適宜查血時(shí)間。瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第45頁(yè)環(huán)狀體可呈方形帶狀形是特點(diǎn)成熟裂殖體呈菊花狀,內(nèi)含6～12個(gè)裂殖子紅細(xì)胞不漲大，略縮小有時(shí)有西門氏點(diǎn)

三日瘧（P.malariae）診療關(guān)鍵點(diǎn)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第46頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第47頁(yè)三日瘧原蟲6-12個(gè)裂殖子，排列較規(guī)則，呈菊花狀，瘧色素在蟲體中央，寄生紅細(xì)胞無(wú)改變?nèi)寨懺x瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第48頁(yè)卵形瘧（P.ovale）診療關(guān)鍵點(diǎn)紅細(xì)胞略漲大或不變大紅細(xì)胞邊緣呈車輪狀環(huán)狀體有時(shí)展現(xiàn)魚眼狀薛氏點(diǎn)顯著成熟裂殖體類似三日瘧原蟲,但更粗大原蟲呈卵圓形

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第49頁(yè)薄血膜中間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲形態(tài)判別瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第50頁(yè)薄血膜中間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲形態(tài)判別瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第51頁(yè)

厚薄血膜優(yōu)缺點(diǎn)薄血膜厚血膜優(yōu)點(diǎn)用血量少，紅細(xì)胞及其內(nèi)瘧原蟲形態(tài)保持完整，易識(shí)別用血量較多，鏡檢范圍小，陽(yáng)性檢出率比薄血膜高15-25倍缺點(diǎn)耗時(shí)多，檢出率相對(duì)較低。不適用大規(guī)模調(diào)查溶血后原蟲形態(tài)改變大（皺縮、斷裂）；原蟲側(cè)影、重合；不能借助被寄生紅細(xì)胞改變來(lái)幫助判別。適用范圍用于原蟲蟲種判定推薦使用，尤其是瘧原蟲數(shù)量少、密度低情況下；適用大規(guī)模調(diào)查瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第52頁(yè)厚血膜中間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲形態(tài)判別瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第53頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第54頁(yè)瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第55頁(yè)

瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查講座專家講座第56頁(yè)

1.普通提倡查厚血膜，薄血膜作為原蟲蟲種判定。

2.依據(jù)瘧原蟲三要素來(lái)判別(