唾液淀粉酶最適pH值測(cè)定

唾液淀粉酶最適pH值測(cè)定廣西醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)8班3組崖曉怡(201250424)路海燕(201250426)實(shí)驗(yàn)原理：淀粉經(jīng)唾液中淀粉酶的水解，生成糊精和麥芽糖。在底物過(guò)量的條件下，反應(yīng)后加入碘液與未被水解的淀粉結(jié)合成藍(lán)色復(fù)合物唾液淀粉酶最適pH為6.8，但在磷酸緩沖溶液中，其最適pH為6.4—6.6，而在乙酸緩沖溶液中則為5.6。在底物過(guò)量的條件下，相同時(shí)間內(nèi)，在溫度、酶濃度相同的條件下，接近最適pH的反應(yīng)體系中消耗淀粉的量最大，剩余淀粉與過(guò)量碘液生成的顏色越淺，吸光度越小，利用分光光度計(jì)測(cè)出各管的吸光度后，取處于升高與降低趨勢(shì)之間的較小吸光度范圍對(duì)應(yīng)的pH值即為唾液淀粉酶的最適pH。一、材料與方法儀器：吸量管(5mL，1mL)，試管，試管架，小燒杯，722型分光光度計(jì)，恒溫箱，吸耳球試劑：0.01mol/L碘液，0.2mol/L磷酸氫二鈉，0.2mol/L磷酸二氫鈉，淀粉溶液，唾液，蒸餾水二、方法：相同時(shí)間內(nèi)，在溫度、酶濃度相同、pH不同的條件下，酶的活度不同，水解的淀粉量不同，剩余的淀粉與過(guò)量碘液生成的顏色不同，通過(guò)在660nm測(cè)量吸光度，得出酶的最適pH范圍。操作步驟：1、唾液的獲取：蒸餾水漱口后在口中含蒸餾水，適宜時(shí)間后將蒸餾

水連同唾液一同放置于事先準(zhǔn)備好的容器中即可，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)注意酶的失活，為了防止此現(xiàn)象發(fā)生應(yīng)將此液體置于冰水中冷卻。2、不同pH緩沖液配制：根據(jù)下表配置各個(gè)pH值的緩沖溶液各10ml單位：ml試管123456PH6.26.46.66.87.07.20.2mol/LNa2HPO40.9251.3251.8752.4503.0503.6000.2mol/LNaH2PO44.0753.6753.1252.5501.9501.4003、淀粉用量的確定:單位:ml1234PH7.0緩沖液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.10.20.3-釋10倍酶液0.10.10.10.137°C水浴7.5min

碘液2滴為了更好觀察顏色變化，可以加入適量蒸餾水使總體積相同。混勻，觀察現(xiàn)象，并選擇顏色變化適中一支，記錄其用量。4、酶液稀釋倍數(shù)確定：?jiǎn)挝?ml試管號(hào)12345稀釋倍數(shù)1050100200300某濃度酶液0.10.10.10.10.1PH7.0緩沖液0.90.90.90.90.92.5g/L淀粉0.30.30.30.30.337°C水浴7.5min碘液2滴為了更好觀察顏色變化，可以加入適量蒸餾水使總體積相同，混勻，觀察現(xiàn)象，并選擇適中一支，記錄其稀釋倍數(shù)。

5、最適pH確定:單位：ml試劑PH值6.26.46.66.87.07.2pH緩沖液0.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉0.30.30.30.30.30.3酶液0.10.10.10.10.10.137°C水浴7.5min碘液2滴加入5ml蒸餾水吸光度A660nm0.6880.6240.5250.3570.5430.458蒸餾水調(diào)零，測(cè)定660nm處吸光度A,最后以A為縱坐標(biāo)，pH為橫坐標(biāo)作圖，取曲線最低點(diǎn)對(duì)應(yīng)的pH值，即為唾液淀粉酶的最適pH值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果由圖表可知，6.8為曲線最低點(diǎn)對(duì)應(yīng)的pH值，即為唾液淀粉酶的最適pH值，討論1.為什么測(cè)定唾液淀粉酶的最適pH值畫出的坐標(biāo)圖為波浪狀而不是標(biāo)準(zhǔn)U形圖？答：實(shí)驗(yàn)中可能操作不規(guī)范，試劑添加不準(zhǔn)確以及保存時(shí)間不符合等