大腸菌群計數(shù)課件

大腸菌群計數(shù)課件第1頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)

衛(wèi)生學概念，包括埃希氏菌屬，克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬等的細菌檢驗比較簡單，所以被廣泛用做水源的衛(wèi)生指標和食品加工衛(wèi)生狀況的通用指標大腸菌群定義：一群在36℃條件下培養(yǎng)24~48小時能發(fā)酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。第2頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一第一法MPN法第二法平板計數(shù)法第三法Petrifilm測試片法大腸菌群計數(shù)第3頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

與原4789.3的不同l

操作步驟不同原方法初發(fā)酵EMB分離培染色，復發(fā)酵報告現(xiàn)方法LST初發(fā)酵BGLB驗證報告EMB分離培養(yǎng)第4頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

與原4789.3的不同l

初發(fā)酵培養(yǎng)基不同原方法：乳糖膽鹽肉湯現(xiàn)方法：月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯LST肉湯是國際上通用的培養(yǎng)基。與乳糖膽鹽肉湯的作用和意義相同，但具有更多的優(yōu)越性，LST中的選擇性抑菌劑是月桂基硫酸鹽，相對于膽鹽穩(wěn)定性更好些。還有就是LST更容易觀察。第5頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

第6頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

第7頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

與原4789.3的不同l

結果報告單位不同原方法：MPN/100g(mL)現(xiàn)方法：MPN/g(mL)第8頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

與原4789.3的不同l

給出的MPN表不同l

標準名稱不同

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第10頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

6操作步驟6.1

樣品的稀釋6.1.1

固體和半固體食品：以無菌操作取25g）樣品,放入裝有225

mL生理鹽水的無菌均質杯內,于8000r/min均質1min～2min,制成1:10樣品勻液，或放入225mL生理鹽水的無菌均質袋中，用均質器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。6.1.2

液體食品：以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌玻璃瓶(瓶內預置適當數(shù)量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于7s內振搖25次(或以機械振蕩器振搖),制成1:10的樣品勻液。6.1.3樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時分別用1mol/LNaOH或1mol/LHCl予以調節(jié)。第11頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

6操作步驟6.1

樣品的稀釋6.1.4用1mL無菌吸管或移液器吸取1:10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入裝有9mL生理鹽水的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及液面），振搖試管或換用1支1mL無菌吸管反復吹打3～5次，或采用振蕩器使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。6.1.5根據(jù)對樣品污染情況的估計,按上述操作，依次制成系列十倍系列樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無菌吸管。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過程不得超過15min。第12頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一第13頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

6操作步驟6.2初發(fā)酵實驗

對每個樣品，選擇適宜的三個連續(xù)稀釋度的樣品勻液，液體樣品可以包括未經稀釋的原液，每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL（如接種量需要超過1mL，則用雙料LST肉湯）。36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，檢查倒管內是否有氣泡產生或輕搖試管時是否有密集連續(xù)的細小氣泡從管底逸出，如未產氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h。記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數(shù)。未產氣者為大腸菌群陰性；對產氣者，則進行復發(fā)酵試驗。第14頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一

用直徑為3mm的接種環(huán)從所有48h±2h內發(fā)酵產氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中，置36℃±1℃溫箱內，培養(yǎng)48h±2h，觀察產氣情況。產氣者，計為大腸菌群陽性管。大腸菌群計數(shù)：第一法

6操作步驟6.3復發(fā)酵實驗第15頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

第16頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一大腸菌群計數(shù)：第一法

第17頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一

根據(jù)大腸菌群陽性管數(shù),查MPN檢索表，報告每g(mL)樣品中大腸菌群的MPN值。

經過和標準起草人溝通，此方法標準的單位可以乘以100，最終報出MPN/100g(100mL)。大腸菌群計數(shù)：第一法

6操作步驟6.4結果報告第18頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一1g(mL)檢樣中最大可能數(shù)（MPN）表--420>1100333948.7272124,1001801100233424.5201122,00090460133423.7150121,00042240033424.5202021,00090290323423.61410243040210223381.49.200242037150123424.5160314201893023424.51512142040160313423.61102142037120213383.6111112001775113201.37.4011180943013383.6112011801764203181.37.21011108.738103180.173.6001944.623003383.69.4030948.736132181.26.2020948.729032181.26.1110948.735222110.153.0010948.7281229.60.153.0100424.5210229.5--<3.0000高低0.0010.010.10高低0.0010.010.1095%置信區(qū)間MPN陽性管數(shù)95%置信區(qū)間MPN陽性管數(shù)第19頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一第20頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一現(xiàn)國標的MPN表與原國標的MPN表的不同點：1，現(xiàn)表里的數(shù)字是有小數(shù)點的，而原標準對小數(shù)點進行了四舍五入的處理。2，現(xiàn)標準的MPN表比原標準的MPN表要簡化一些。原標準MPN表有64個組合，而現(xiàn)標準MPN表只有40個組合。3，報告單位不同。現(xiàn)報告單位為MPN/g(mL)，而原報告單位是MPN/100g(100mL)。第21頁，共23頁，2023年，2月20日，星期一第二法平板計數(shù)法平板計數(shù)法以經最后證實為大腸菌群陽性的試管百分比乘以計數(shù)的平板菌落數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，即為每g(mL)樣品中大腸菌群數(shù)。但由于相應的產品標準單位現(xiàn)仍以MPN/100g(100mL)的單位報出結果，故此方法還不具有實際應用價