實驗四類風濕因子檢測

實驗四類風濕因子檢測第一頁，共26頁。類風濕因子的檢測類風濕因子（RF）是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF最初由Rose等（1984年）在類風濕性關節(jié)炎（RA）患者血清中發(fā)現。RA患者體內有產生RF的B細胞克隆，在變性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要為19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它與天然IgG結合的能力較差，最易與人和動物的變性IgG或免疫復合物中的IgG結合。第二頁，共26頁。RF與體內變性的IgG結合形成免疫復合物后可活化補體，或被吞噬細胞吞噬。由吞噬細胞釋放的溶酶體酶、活化肽、膠原酶、前列腺素E2等物質，在細胞因子和炎性粘附分子的參與下，致組織炎性損傷，可使患者發(fā)生骨關節(jié)炎及血管炎。

第三頁，共26頁。類風濕性關節(jié)炎類風濕關節(jié)炎(RA)：其病因及發(fā)病機制仍不完全明了,推測可能為外源性感染作用于遺傳易感個體,導致機體免疫系統(tǒng)紊亂,進而引起關節(jié)滑膜、軟骨組織慢性炎癥和破壞的自身免疫性疾病。第四頁，共26頁。RF在RA患者中的陽性檢出率很高，可達79.6%，是RA患者血清中常見的自身抗體。高滴度RF陽性支持對早期RA的診斷，在RA患者，RF的滴度與患者的臨床表現呈正相關，即隨癥狀加重而效價升高。但RF不是僅在RA患者中出現，在SLE、進行性全身性硬化癥等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的陽性率可達28.9%～50%。因而RF對RA患者并不具有嚴格特異性，RF陽性不能作為診斷RA的惟一標準。盡管在多種疾病中可有RF陽性，但滴均較低（＜40IU/ml），隨著RF滴度增加，RF對RA的診斷特異性增高。第五頁，共26頁。類風濕因子的病理作用（一）類風濕性血管炎，在外周血液循環(huán)中，類風濕性關節(jié)炎特異性RF與自身IgG分子結合形成穩(wěn)定的免疫復合物，部分被單核-吞噬細胞系統(tǒng)清除，部分沉積于血管壁，激活補體導致血管炎。第六頁，共26頁。類風濕因子的病理作用（二）關節(jié)型損傷由于類風濕關節(jié)滑液中缺少正常的IgG分子，IgG-RF自身結合形成多聚體復合物，IgG-RF多聚體沉積于關節(jié)表面激活補體引起關節(jié)性損傷。

第七頁，共26頁。常見的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA類風濕因子易于檢測，而IgG類風濕因子難于測出。IgA類風濕因子及IgM類風濕因子對類風濕關節(jié)炎診斷有較好的參考價值。IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效價＞80IU/ml并伴有嚴重關節(jié)功能障礙時，通常提示患者預后不良。第八頁，共26頁。IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出現與患者的滑膜炎、血管炎和關節(jié)的癥狀密切相關，此類RF常伴隨高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出現。在正常人及非RA患者中很難檢測出IgG型RF．IgG型RF在關節(jié)軟骨表面的沉積可激活補體引起關節(jié)的炎性損傷，因此滑膜液中檢測出IgG型RF比血清中檢出IgM型RF更具病理意義。RF檢測方法一般有膠乳凝集試驗、雙抗原夾心ELISA法、速率散射比濁法。一般醫(yī)院主要采用膠乳凝集法和酶聯免疫吸附法測定類風濕因子。第九頁，共26頁。類風濕因子的檢測類風濕因子的主要類型：IgM型特點：高凝集、易于沉淀測定方法為：1、乳膠凝集法2、酶聯免疫吸附法3、乳膠免疫比濁法第十頁，共26頁。膠乳凝集試驗檢測RF概念：顆粒性抗原與相應抗體，或表面包被抗原（抗體）的顆粒狀物質與相應的抗體（抗原）在電解質存在的條件下相互結合，出現肉眼可見的凝集團現象。第十一頁，共26頁。正向間接凝集試驗—測RF第十二頁，共26頁。原理（膠乳凝集試驗）類風濕因子（RF）是一組抗變性IgG的自身抗體，它能與人或動物的變性IgG結合，而不與正常人IgG發(fā)生凝集反應。將處理過的人IgG與膠乳顆粒共價交聯，使其吸附于膠乳顆粒載體上，稱為致敏膠乳顆粒。當待檢血清中有RF時，則與致敏膠乳顆粒上的變性IgG發(fā)生反應，出現凝集現象。第十三頁，共26頁。（正向）間接凝集反應原理示意圖（變性IgG）第十四頁，共26頁。主要的試劑和器材類風濕膠乳診斷試劑RF陰性對照RF陽性對照反應板攪拌棒第十五頁，共26頁。操作步驟（1）在3塊載玻片上分別加一滴RF陽性血清、RF陰性血清及待檢血清。（2）加20ulIgG致敏的膠乳于各血清樣品中，輕微晃動載玻片混勻。（3）1min后觀察凝集反應發(fā)生情況第十六頁，共26頁。結果觀察和判斷在室內的光線下觀察，有清晰的凝集顆粒出現，且液體澄清者為RF陽性。若需做半定量測定，可將血清作倍比稀釋，重復上述測定，以出現凝集的血清最高稀釋度為RF的效價（滴度）。第十七頁，共26頁。

注意事項（1）器材要潔凈、血清要新鮮、以確保結果可靠（2）注意陰性、陽性對照的設立（3）注意血清及致敏膠乳加樣量的比例第十八頁，共26頁。直接凝集試驗（玻片法）--測ABO血型第十九頁，共26頁。原理天然的顆粒性抗原（如細胞、細菌等）與相應抗體在適宜條件下反應，出現肉眼可見的凝集物，稱為直接凝集反應。玻片法屬于定性試驗。第二十頁，共26頁。第二十一頁，共26頁。主要的試劑和器材抗A血型定型試劑抗B血型定型試劑攪拌棒玻片第二十二頁，共26頁。步驟取玻片1塊，左上角和右上角分別標上“A”和“B”用采血針采指尖血（左手無名指尺側），將血滴在玻片的兩端。在兩血滴上分別滴上抗A標準血清和抗B標準血清，用攪拌棒攪勻。手持玻片，前后旋轉搖動，促使血清與紅細胞充分混合，用肉眼觀察有無凝集。第二十三頁，共26頁。