7-細(xì)胞化學(xué)染色

7-細(xì)胞化學(xué)染色第一頁，共59頁。瑞氏染色的原理瑞氏染料中含有堿性亞甲藍(lán)和酸性伊紅兩種成分,它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力,使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào),以利辨認(rèn).第二頁，共59頁。1.細(xì)胞核是由核糖核酸與強堿性的組蛋白,精蛋白形成核蛋白,與酸性染料伊紅有親和力,染成紅色.2.幼稚細(xì)胞的胞質(zhì)和核仁含有酸性物質(zhì),與堿性染料亞甲藍(lán)有親和力,染成藍(lán)色.主要的鑒別點:酸堿性第三頁，共59頁。各種原始細(xì)胞的鑒別鑒別點原淋原粒原單原紅原巨原漿胞體圓圓圓,不規(guī)則圓,突起圓,不規(guī)則原核形圓圓圓,不規(guī)則圓圓,不規(guī)則圓核位置中或偏中或偏中或偏中中或偏偏核仁小小大較大染色質(zhì)顆粒細(xì)顆粒網(wǎng)狀粗顆粒較細(xì)粗顆粒胞質(zhì)少較少較多較多較少豐富顏色藍(lán)藍(lán)灰藍(lán)深藍(lán)藍(lán)深藍(lán)顆粒無無無無無無其他空泡血小板空泡第四頁，共59頁。定義：細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合的一門科學(xué)。它是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的原理、應(yīng)用涂片染色的方法觀察細(xì)胞的化學(xué)成分及其變化的重要方法。第五頁，共59頁。各種類型血細(xì)胞的化學(xué)成分（酶，脂，糖，蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病理情況下,血細(xì)胞的成分可發(fā)生改變.研究的對象：細(xì)胞和組織中的化學(xué)物質(zhì)

研究的方法：根據(jù)細(xì)胞和組織中化學(xué)物質(zhì)的有無以及強弱判斷血細(xì)胞類型以及是否發(fā)生異常.第六頁，共59頁。

細(xì)胞化學(xué)染色的臨床應(yīng)用

1、輔助診斷急性白血病的細(xì)胞類型（不同系別，不同階段的細(xì)胞所含化學(xué)物質(zhì)不同）；

2、輔助血液系統(tǒng)疾病的診斷和鑒別診斷（IDA、 CML與類白）。第七頁，共59頁。一、鐵染色原理：正常人骨髓中的儲存鐵主要存在于骨髓小粒和幼紅細(xì)胞中。骨髓小粒中的含鐵血黃素稱細(xì)胞外鐵，其中的三價鐵與分子中的蛋白質(zhì)結(jié)合不牢，經(jīng)稀鹽酸處理后而游離，并能在酸性亞鐵氰化鉀溶液中產(chǎn)生普魯士藍(lán)反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)鐵也可用此法顯示。根據(jù)反應(yīng)的強弱了解骨髓中鐵的含量。

第八頁，共59頁。細(xì)胞內(nèi)鐵：中、晚幼紅細(xì)胞胞漿中有藍(lán)綠色顆粒,為鐵蛋白.鐵粒幼細(xì)胞：胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)綠色顆粒的幼紅細(xì)胞.環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)綠色顆粒在6個以上，并圍繞于核周排列成環(huán)形者，超過1/2區(qū)域.細(xì)胞外鐵：正常骨髓以含鐵血黃素形式儲存的鐵，主要存在骨髓小粒的巨噬細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)或外。正常情況下+~++第九頁，共59頁。細(xì)胞外鐵反應(yīng)強度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：顯微鏡檢查肉眼觀察————————————————著色程度形態(tài)大小分布情況————————————————陽性顯色不明顯淡染小稀疏（+~++）（綠~藍(lán)）（顆粒~小珠）（星狀排列）強陽性顯色明顯深染大密集（+++~++++）（藍(lán)~黑）（大珠~成堆）（片狀分布）————————————————第十頁，共59頁。++++第十一頁，共59頁。+++++第十二頁，共59頁。+--第十三頁，共59頁。第十四頁，共59頁。環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞第十五頁，共59頁。環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞第十六頁，共59頁。參考值1、細(xì)胞外鐵：（＋）～（＋＋）2、細(xì)胞內(nèi)鐵：觀察100個幼紅細(xì)胞,計算出鐵粒幼紅細(xì)胞百分比,陽性率為12％～44％,無環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞和鐵粒紅細(xì)胞。第十七頁，共59頁。鐵的生成和利用食物中的鐵經(jīng)吸收后在單核吞噬系統(tǒng)內(nèi)儲存,鐵通過幼紅細(xì)胞表面的鐵受體,轉(zhuǎn)至幼紅細(xì)胞內(nèi),與原卟啉結(jié)合形成血紅素.細(xì)胞外鐵:單核吞噬系統(tǒng)內(nèi)的鐵,反映骨髓的儲存鐵細(xì)胞內(nèi)鐵:幼紅細(xì)胞和紅細(xì)胞內(nèi)的鐵,骨髓可以利用的鐵.第十八頁，共59頁。幾種病理情況,

1.體內(nèi)鐵攝入不足或消耗過多:骨髓細(xì)胞內(nèi)外鐵均減少或消失(IDA)2.鐵利用障礙:幼紅細(xì)胞線粒體合成血紅素功能障礙,為鐵失利用,內(nèi)外鐵均增加(鐵粒幼細(xì)胞性貧血)3.鐵儲存于單核吞噬細(xì)胞內(nèi)不能被釋放入幼紅細(xì)胞內(nèi),為鐵失利用,外鐵增加,內(nèi)鐵減少(慢性炎癥貧血)第十九頁，共59頁。疾病鑒別意義：

缺鐵貧：外鐵明顯下降，甚至消失；內(nèi)鐵下降,鐵粒幼細(xì)胞減少。經(jīng)鐵劑治療后，鐵增加.鐵粒幼細(xì)胞貧血：內(nèi)、外鐵增加，且出現(xiàn)環(huán)鐵粒幼紅細(xì)胞增多,有時可見鐵粒紅細(xì)胞.第二十頁，共59頁。感染、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥、惡性腫瘤：外鐵增加,內(nèi)鐵減少。骨髓增生異常綜合癥:環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞大于有核紅細(xì)胞的15%,細(xì)胞外鐵也常增加.第二十一頁，共59頁。二、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）液中能水解基質(zhì)液中的α-磷酸柰酚，產(chǎn)生α-奈酚，其與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性灰黑色偶氮染料沉淀，定位于酶活性處。AKP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞內(nèi),其他細(xì)胞基本陰性.

第二十二頁，共59頁。陽性程度：

-——胞漿中無紫黑色顆粒+——胞漿中有一層棕黑色不透明或局限地方有紫黑色顆粒(約1/4)++——胞漿中顆粒占胞漿1/2或遍布整個胞漿，但較疏松+++——胞漿中顆粒占3/4，顆粒染色濃++++——僅見核影，其余均是黑色第二十三頁，共59頁。1.陽性率計算:100個中性桿狀,分葉核粒細(xì)胞中陽性細(xì)胞總數(shù).結(jié)果統(tǒng)計:第二十四頁，共59頁。積分：-——0分舉例：細(xì)胞數(shù)積分+——1分55*0——0++——2分55*1——5+++——3分1010*2——20++++——4分2020*3——606060*4——240——————————

AKP積分總分為325參考范圍：30~130分第二十五頁，共59頁。第二十六頁，共59頁。

參考值：陽性率﹤40%積分值30～130分第二十七頁，共59頁。生理變化：

AKP活性和年齡有關(guān)，新生兒、嬰幼兒高于成年人，老年人略低,應(yīng)激狀態(tài)下增加。病理變化：

（1）增高細(xì)菌感染、AA、類白血病、急淋、骨髓纖維化,真紅,慢淋,血小板增多癥,惡性腫瘤等（2）減低急慢粒、PNH、MDS、惡組,病毒感染等第二十八頁，共59頁。臨床意義:

1.慢粒(無繼發(fā)感染時)——積分明顯下降中性粒細(xì)胞類白血病——積分可大于200

2.細(xì)菌感染——NAP積分增加病毒性感染——無明顯變化（感染癥狀相似）3.急性白血病類型的鑒別：急?！狽AP明顯減低急淋——NAP增高急單——NAP正?；驕p低第二十九頁，共59頁。再障——NAP增高PNH——NAP減低第三十頁，共59頁。

慢粒與中性粒細(xì)胞性類白血病反應(yīng)的鑒別第三十一頁，共59頁。三、過氧化物酶染色（POX）

原理：細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能將底物的過氧化氫分解，產(chǎn)生新生氧。后者將試劑中的聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，再與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合，進(jìn)而生成棕黑色化合物沉淀于酶的所在部位。第三十二頁，共59頁。結(jié)果判斷:1.陰性：細(xì)胞胞漿中無藍(lán)色顆粒2.陽性：細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)藍(lán)色顆粒者。第三十三頁，共59頁。陽性程度參考標(biāo)準(zhǔn):-:無顆粒沉著+/-:顆粒細(xì)小,分布稀疏+:顆粒較粗,常呈局灶性分布++:顆粒粗大,分布較密,占胞漿1/2-2/3+++:顆粒粗大,成團塊狀分布++++:顆粒布滿整個細(xì)胞,可覆蓋胞核第三十四頁，共59頁。正常情況下：粒系：原?！缬琢！杏琢！墒炝＜?xì)胞多數(shù)（-）（+）陽性程度逐漸增強嗜酸陽性最強；嗜堿（-）單核系：原單——幼單——成熟單核細(xì)胞（-）（弱+）陽性顆粒細(xì)少而分散其他細(xì)胞:淋巴細(xì)胞,紅細(xì)胞,巨核細(xì)胞（-）,有時吞噬細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)第三十五頁，共59頁。第三十六頁，共59頁。疾?。?/p>

急粒（AGL）——原粒陽性或陰性,常為陽性（顆粒較粗大，呈局灶分布）,為+~++急早幼粒（APL）——呈強陽性反應(yīng)（++~+++）急單（AML）——原單,幼單多數(shù)陰性或弱陽性（顆粒細(xì)小、稀少、散在分布）第三十七頁，共59頁。急淋（ALL）——陰性。各階段淋巴細(xì)胞POX均呈（-）反應(yīng)，ALL骨髓中殘留的原粒細(xì)胞POX可為（+），但比例小于3%。急性紅白血病——原始粒細(xì)胞陽性或陰性,原單陰性或弱陽性,有核紅陰性第三十八頁，共59頁。應(yīng)用：是急性白血病形態(tài)學(xué)分型中最重要,首選的常規(guī)化學(xué)染色.第三十九頁，共59頁。對急淋和急非淋做出判斷，陽性率大于5%診斷為髓系，小于3%不能排除淋巴系。區(qū)別小型原始粒細(xì)胞和原淋鑒別急性非淋巴細(xì)胞性白血病的各亞型（M1與M5的鑒別）。鑒別急單（陽性~弱陽性）和異常組織細(xì)胞（陰性）

第四十頁，共59頁。第四十一頁，共59頁。四、過碘酸－雪夫反應(yīng)（糖原染色PAS）原理：多糖類物質(zhì)中的1，2-乙二醇基經(jīng)過碘酸氧化后產(chǎn)生醛基，此醛基進(jìn)而與雪夫(Schiff)液作用，使無色品紅變?yōu)榧t色的化合物，定位于胞漿中。第四十二頁，共59頁。正常情況下:1.粒系：原?！缬琢！墒炝＜?xì)胞（-）（+）(+++)隨細(xì)胞成熟，陽性程度逐漸增強，陽性為彌散性，細(xì)顆粒狀嗜酸（-）；嗜堿（+）2.單核系：原單——幼單——成熟單核（-）（+）（+~++）陽性為細(xì)顆粒狀，有時細(xì)胞邊緣顆粒較粗大

第四十三頁，共59頁。3.紅系：幼紅——成熟紅細(xì)胞（-）（－）4.淋巴系：小部分（－），多數(shù)呈（+），陽性率小于20％，陽性為粗大顆粒狀或塊狀5.巨核細(xì)胞和血小板：（+）呈顆粒狀或塊狀第四十四頁，共59頁。第四十五頁，共59頁。疾?。?/p>

(一)白細(xì)胞系統(tǒng)

急淋——原始淋巴陽性率升高，粗顆粒或塊狀急?！糠衷剂ｊ栃裕?xì)顆?；驈浬⒎植技眴巍讍慰申栃裕?xì)顆粒巨核細(xì)胞——粗顆?；驂K狀強陽性，協(xié)助ANLL（M7）的診斷2.慢淋——陽性率增加，粗顆?；驂K狀第四十六頁，共59頁。(二)紅細(xì)胞系統(tǒng)

1.紅白血病（M6），MDS有核紅可陽性2.各類貧血的鑒別：缺鐵貧、地貧——幼紅可呈（+）AA、溶貧、巨幼貧——（-）第四十七頁，共59頁。(三)其他：

幫助確認(rèn)一些特殊細(xì)胞

1.不典型巨核細(xì)胞——強陽性淋巴瘤RS細(xì)胞——陰性 2.戈謝細(xì)胞——強陽性尼曼皮克細(xì)胞——弱陽性~陰性腺癌骨髓轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞——強陽性紅色細(xì)顆粒、粗顆?；驂K狀第四十八頁，共59頁。第四十九頁，共59頁。第五十頁，共59頁。第五十一頁，共59頁。五、α-醋酸萘酚酯酶染色

（非特異性酯酶染色α-NAE）原理：血細(xì)胞內(nèi)的α-醋酸萘酚酯酶將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生α-萘酚，萘酚再與重氮鹽偶聯(lián)，形成不溶性有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。α-醋酸萘酚酯酶存在于單核細(xì)胞、粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞中，單核細(xì)胞的陽性可被氟化鈉抑制。第五十二頁，共59頁。結(jié)果判斷：

油鏡計數(shù)100個細(xì)胞，分別計算出陽性率和陽性積分以及抑制率抑制前陽性率-抑制后陽性率或陽性積分或陽性積分抑制率%=————————————%抑制前陽性率或陽性積分第五十三頁，共59頁。M3-NAS-DAE+NaF第五十四頁，共59頁。+NaFM5-NAS-DAE第五十五頁，共59頁。正常情況下：粒系——各期粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)，少數(shù)可弱陽性，不被NaF抑制單核系——原單（-）或（+），幼單~單核陽性，被NaF抑制淋巴系——多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性，不被抑制紅系——少數(shù)幼紅可陽性，不被抑制巨核、血小板——陽性，不被抑制第五十六頁，共59頁。疾病情況下:——————————————————————————急粒急早幼粒急單急淋ASDAE原?？沙拾籽≡缬琢＜?xì)胞白血病細(xì)胞原淋和幼淋（+）反應(yīng)（+）強陽性呈（+）較強細(xì)胞呈陰性或弱陽性NaF抑制不被抑制不被抑制被抑制不被抑制