第八章 動物實(shí)驗(yàn)基本操作方法

第八章動物實(shí)驗(yàn)基本操作方法第1頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動物的抓取、固定、編號、標(biāo)記方法一、小鼠的抓取與固定第2頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第3頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三二、大鼠的抓取與固定抓取與固定方法同小鼠,但要防止被大鼠咬傷.第4頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三三、豚鼠的抓取與固定第5頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三

四、家兔的抓取與固定第6頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第7頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第8頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第9頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三

五、犬、貓等的抓取與固定

視頻第10頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三

六、實(shí)驗(yàn)動物的編號與標(biāo)記方法

在動物實(shí)驗(yàn)中，必須對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行編號、標(biāo)記以示區(qū)別。標(biāo)記方法應(yīng)滿足標(biāo)號清晰、耐久、簡便、易認(rèn)和適用的要求，現(xiàn)介紹幾種常用的標(biāo)記方法。1.染色法：染色法是用毛筆或棉簽蘸取有色化學(xué)染料，在實(shí)驗(yàn)動物體表不同部位涂上斑點(diǎn)，以示不同編號。編號的一般原則是：“先左后右，先上后下?！?.耳緣剪孔法3.烙印法4.掛牌法第11頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)動物的麻醉方法全身麻醉局部麻醉第12頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三在實(shí)施全身麻醉時(shí)，應(yīng)注意以下幾個(gè)問題：①貓、犬、豬或非人靈長類大動物禁食10～12h，不能少于8h。家兔或嚙齒類動物無嘔吐反射，術(shù)前無須禁食。被手術(shù)的動物在麻醉前可給予一定量飲水。②麻醉前不能使用瀉劑。因?yàn)闉a劑可導(dǎo)致血液的堿儲降低，從而增加血液和組織的酸度，在麻醉和失血情況下，易發(fā)生酸中毒，并能降低損傷組織的抗感染能力。③麻醉后的動物必須保持氣道的通暢和組織(眼球、舌、腸等器官)的營養(yǎng)。④犬做長時(shí)間實(shí)驗(yàn)前1h應(yīng)灌腸排除積糞。⑤應(yīng)檢查麻醉劑質(zhì)量、數(shù)量是否滿足要求，麻醉固定器具是否有破損(漏氣或堵塞)，有關(guān)麻醉中毒急救品和器材是否準(zhǔn)備齊妥，以應(yīng)急需。（一）麻醉前的準(zhǔn)備一、全身麻醉方法第13頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三全身麻醉的常用方法主要有吸入麻醉和非吸入麻醉。1．吸入麻醉吸入麻醉是將揮發(fā)性麻醉劑或氣體麻醉劑經(jīng)呼吸道吸人動物體內(nèi)，從而產(chǎn)生麻醉效果的方法。吸入麻醉常用的揮發(fā)性麻醉劑有乙醚、氯仿、氟烷、甲氧氟烷等。氣氣麻醉劑常用氧化亞氮、環(huán)丙烷等。乙醚的麻醉作用主要是抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，適用于中、小型實(shí)驗(yàn)動物全身麻醉。先將浸潤了乙醚的棉球(或海綿)放入小燒杯，再將小燒杯放入相應(yīng)大小密封的麻醉盒內(nèi)(可用大燒杯代替)，再將動物放入，通過透明的麻醉盒觀察動物的行為。開始時(shí)，動物出現(xiàn)興奮，進(jìn)而出現(xiàn)抑制，自行倒下，呼吸由快變慢，當(dāng)角膜反射遲鈍，肌張力下降，即可取出動物。實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)注意動物的反應(yīng)，適時(shí)追加乙醚吸人量，維持其麻醉深度和時(shí)間。

（二）麻醉的方法第14頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三2．非吸入麻醉非吸人麻醉的給藥常用注射方法，如靜脈注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、腹腔內(nèi)注射等。常用的麻醉藥有戊巴比妥鈉、硫噴妥鈉、氨基甲酸乙酯等。

戊巴比妥鈉是常用的一種動物麻醉劑，白色粉末，安全范圍大，毒性小，麻醉潛伏期短，維持時(shí)間較長。一般用生理鹽水配制。大鼠、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射；犬、貓、兔等動物既可腹腔注射，又可靜脈注射。操作時(shí)，一般先推入麻醉藥總量的2／3，密切觀察動物生命體征的變化，若已達(dá)到所需麻醉的深度，余下的麻醉藥則不用。以避免麻醉過深抑制延髓呼吸中樞導(dǎo)致動物死亡。在實(shí)驗(yàn)過程中，若動物出現(xiàn)蘇醒行為時(shí)，可追加麻醉藥，或吸入乙醚輔助麻醉。第15頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三

常用實(shí)驗(yàn)動物全身麻醉藥用法及劑量藥品動物給藥途徑劑量（mg/kg）濃度(%)用藥量(mL/kg)麻醉時(shí)間戊巴比妥鈉

氨基甲酸乙酯（烏拉坦）硫噴妥鈉氯仿乙醚

犬、貓、兔豚鼠大鼠、小鼠犬、貓、兔豚鼠大鼠、小鼠犬、貓、兔大鼠各種動物ivipipIpip、ivImimiv、ipiv、ip吸入3040~5040~5045750~10001350135025~5050~1003322252020211.01.4~1.72.0~2.52.33~47.07.01.3~255.0~10.0

2~4h2~4h15~30min第16頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三二、局部麻醉方法局部麻醉操作方法很多，可分為表面麻醉、局部浸潤麻醉、區(qū)域阻滯麻醉以及神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉等。

1．表面麻醉：利用局部麻醉藥的組織穿透作用，透過粘膜，阻滯淺表的神經(jīng)末梢。常用麻醉藥為利多卡因等。眼部用藥點(diǎn)滴，鼻內(nèi)用藥涂敷，咽喉氣管用藥噴霧，尿道灌注給藥。

2．區(qū)域阻滯麻醉：在手術(shù)區(qū)四周和底部注射麻醉藥阻斷疼痛的向心性傳導(dǎo)。常用藥為普魯卡因。

3．神經(jīng)干(叢)阻滯麻醉：在神經(jīng)干(叢)的周圍注射麻醉藥，阻滯其傳導(dǎo)，使其支配的區(qū)域無疼痛。常用藥為利多卡因。

4．局部浸潤麻醉：沿手術(shù)切口逐層注射局部麻醉藥，阻滯組織中的神經(jīng)末梢。常用藥為普魯卡因。

5．椎管內(nèi)麻醉：在椎管內(nèi)注射麻醉藥，阻滯脊神經(jīng)的傳導(dǎo)，使其支配的區(qū)域無疼痛。常適用于大型動物(如豬、馬、牛、羊等)，常用藥為普魯卡因、可卡因等。第17頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三三、動物麻醉的注意事項(xiàng)1．有些麻醉藥物，如乙醚，是揮發(fā)性很強(qiáng)的液體，易燃易爆，使用時(shí)應(yīng)遠(yuǎn)離火源。平時(shí)應(yīng)裝在棕色玻璃瓶中，儲存陰涼處，不宜放在冰箱中，以免遇電火花而引起爆炸。2．所有麻醉藥使用過量均可引起中毒，應(yīng)特別注意各種麻醉藥的劑量和給藥途徑，應(yīng)準(zhǔn)確按體重計(jì)算麻醉劑量。由于動物存在個(gè)體差異，文獻(xiàn)介紹的劑量僅能作參考使用。3．注射時(shí)，一般要求緩慢，并隨時(shí)觀察動物的肌張力、角膜反射、呼吸頻率、夾痛反射射等指標(biāo)。4．動物麻醉后，體溫下降，要注意保溫。5．萬一麻醉過量，應(yīng)根據(jù)不同情況，積極采取措施，如施行人工呼吸，給予蘇醒劑，或注射強(qiáng)心劑、咖啡因、腎上腺素、可拉明，也可靜脈注射5％溫?zé)崞咸烟侨芤骸５?8頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第三節(jié) 實(shí)驗(yàn)動物被毛的去除方法一、剪毛法二、拔毛法三、剃毛法四、脫毛法第19頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第20頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第四節(jié)

實(shí)驗(yàn)動物的給藥途徑和方法*經(jīng)口給藥*注射給藥*其他途徑給藥（呼吸道、皮膚、直腸等）第21頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三一、經(jīng)口給藥分為口服法、喂服法、灌胃法。下面主要介紹灌胃法。

灌胃法是用灌胃器將所應(yīng)投給動物的藥灌到動物胃內(nèi)，此法劑量準(zhǔn)確，但每天強(qiáng)制性操作和定時(shí)給藥會對動物造成一定程度的機(jī)械性損傷和心理上的影響，要減少這些不良影響，必須熟練掌握灌胃技術(shù)。

操作前，用灌胃針或灌胃管大致測一下從口腔至胃內(nèi)的位置(最后一根肋骨后)的長度，根據(jù)此距離估計(jì)灌胃針(或灌胃管)插入的深度。成年動物插入的深度一般是：

小鼠3cm，大鼠或豚鼠5cm，兔約15cm，犬約20cm。

第22頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三大鼠、小鼠的灌胃法用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃針并已吸好藥物)，將灌胃針從鼠的嘴角插入口腔，壓迫鼠的頭部，使口腔和食管成一直線，輕輕轉(zhuǎn)動針頭刺激鼠的吞咽，將灌胃針沿咽后壁慢慢插入食管，如動物掙扎厲害，退出灌胃針，待動物安靜下來，重新插入，灌胃針前端達(dá)到膈肌水平，即可慢慢推灌藥液，如很通暢，則說明已進(jìn)入胃內(nèi)。如不通暢，且動物掙扎厲害，須拔出重新操作。常用灌胃量：小鼠：0.2～1ml,大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml。第23頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第24頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三犬、兔和貓的灌胃法先將動物固定，再將開口器固定于動物口中，壓住舌頭，然后將灌胃管(常用導(dǎo)尿管代替)從開口器的小孔插入動物口中，再沿上腭壁順食管方向送入胃內(nèi)，插入動作要輕、慢，邊插邊密切注意動物的反應(yīng)。事先將灌胃管在水或生理鹽水中泡一下，這樣容易插入而不損傷食管。將灌胃管的外端浸入水中，如有氣泡逸出，則說明灌胃管誤入氣管，需拔出重新、插，插好后將注射器連于灌胃管慢慢將藥液推入。在正式推藥之前，亦可先用溫水試灌一次，如果水不從嘴角流出，灌注很通暢，動物不掙扎，則說明進(jìn)入胃內(nèi)，為避免灌胃管內(nèi)殘留藥液，需再注入5mL生理鹽水，然后拔出胃管，取下開口器。常用灌胃量：豚鼠1～5mL，兔80～150mL，犬200～500mI。

第25頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第26頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三二、注射給藥（一）皮內(nèi)注射局部去除被毛，消毒后，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內(nèi)，然后再向上挑起再稍刺入，即可注射藥物，注射時(shí)會感到有很大阻力。注射后可見皮膚表面鼓起一白色小丘，停留片刻再拔出針頭，以免藥液漏出。(二)皮下注射注射時(shí)，用左手拇指和食指輕輕提起動物皮膚，右手持注射器，將注射針刺入皮下，若針頭容易擺動則證明針頭已在皮下，推送藥液，緩慢拔出注射針，稍微用手指壓片刻針刺部位，以防藥物外漏。

皮下注射部位：小鼠選頸背部皮膚；大鼠選背部或側(cè)下腹部；豚鼠選大腿內(nèi)側(cè)、背部或肩部皮下脂肪少的部位；兔選背部或耳根部；貓、犬選大腿外側(cè)。第27頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第28頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三（三）肌肉注射肌肉注射比皮下和腹腔注射用得較少，但當(dāng)給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時(shí)，常采用肌肉注射。動物肌肉注射時(shí)，應(yīng)選用肌肉發(fā)達(dá)，無大血管經(jīng)過的部位，如兔、貓、犬、猴的兩側(cè)臀部或股部。（四）腹腔注射大鼠、小鼠腹腔注射時(shí)，左手抓取并固定好動物，將腹部朝上。右手持注射器將針頭在下腹部腹白線稍左或偏右的位置，從下腹部朝頭方向幾乎平行地刺入皮下，進(jìn)針3~5mm，再使針頭與皮膚呈45°角斜穿過腹肌，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹腔時(shí)，有落空感，然后固定針頭，保持針尖不動，回抽，無回血，無腸液、尿液，便可緩緩?fù)迫胨幰?。小鼠的一次注射量?.1~0.2ml/10g體重。大鼠一次注射量為：1~2ml/100g體重。兔的注射部位在腹部近腹白線lcm處，犬在臍后腹白線側(cè)邊1~2cm處。第29頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第30頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三(五)靜脈注射⒈大、小鼠靜脈注射常用尾靜脈注射。

大、小鼠尾靜脈共有3根(左、中、右)，一般常選用兩側(cè)的靜脈。注射前，先把動物固定在暴露尾部的鼠尾固定器內(nèi)(可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替)，拔去尾部靜脈走向的毛，置鼠尾于45~50℃的溫水中浸泡幾分鐘或用75％酒精棉球反復(fù)擦拭，以達(dá)到消毒、血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的。開始注藥時(shí)宜少量且緩慢，仔細(xì)觀察，如無阻力，表示針頭已進(jìn)入靜脈，同時(shí)可見靜脈血液被注射進(jìn)去的藥液向前推進(jìn)。如出現(xiàn)白色皮丘說明未刺人血管，應(yīng)拔出針頭重新穿刺。注射完，取一棉球或紗布用力按住注射部位并輕輕揉動。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡量從尾的末端開始，另外，左右兩根血管可交換選擇使用。

第31頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三⒉兔的靜脈注射一般采用外耳緣靜脈。給兔注射前，先將兔放入固定盒內(nèi)固定好，拔去注射部位的毛，用75%的酒精消毒，手指輕彈兔耳，使靜脈充盈。左手食指和中指夾住靜脈的近心端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)心端，環(huán)指及小指墊在下面，右手持注射器，盡量從靜脈的遠(yuǎn)心端刺入血管，回一下血，放松對耳根處血管的壓迫，移動拇指于針頭上以固定，放松示、中指，將藥液注入。注射完畢，用棉球壓住針眼，拔去針頭，繼續(xù)壓迫數(shù)分鐘。如需反復(fù)注射，應(yīng)盡量從耳的末端開始。第32頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三⒊豚鼠的靜脈注射一般采用前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈或者淺背側(cè)足中靜脈注射，此外豚鼠的耳緣靜脈也可注射。豚鼠的靜脈管壁較脆，注射時(shí)應(yīng)特別小心。⒋犬的靜脈注射犬的靜脈注射多采用前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈。注射部位剪毛后，用碘酒和酒精消毒皮膚，在靜脈血管的近心端用橡皮帶扎緊，使血管充盈，從靜脈的遠(yuǎn)心端將注射針頭平行刺入，如有回血，即可松開橡皮帶，將藥緩緩地注入。第33頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三三、其他途徑給藥⒈呼吸道給藥呈粉塵、氣體等狀態(tài)的藥物，均需要通過呼吸道給藥。如給動物乙醚作吸入麻醉，用鋸末煙霧制作慢性支氣管炎動物模型等。⒉皮膚給藥常用于鑒定藥物或毒物經(jīng)皮膚的吸收作用、致敏作用等。對兔和豚鼠，常采用背部一定面積的皮膚脫毛后，將一定的藥液涂在皮膚上，藥液經(jīng)皮膚吸收。⒊直腸給藥常用于動物麻醉。兔直腸內(nèi)給藥時(shí)，常采用灌腸用的膠皮管或114號導(dǎo)尿管進(jìn)行給藥。⒋腦內(nèi)給藥常用于微生物動物實(shí)驗(yàn)，將病原體等接種于被檢動物腦內(nèi)。第34頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三四、實(shí)驗(yàn)動物用藥量的確定⒈先用小鼠粗略的探索出中毒劑量或致死劑量，然后用小于中毒劑量，或取致死量的若干分之一為應(yīng)用劑量，一般可取1／10～1／5。⒉植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。⒊化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似藥物的劑量。⒋確定劑量后，動物也沒有中毒的表現(xiàn)（如體重下降、精神不振、活動減少或其他癥狀），可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實(shí)驗(yàn)。⒌用大動物實(shí)驗(yàn)時(shí)，開始的劑量可采用給鼠類劑量的1／15～1／2，以后可根據(jù)反應(yīng)調(diào)整。⒍確定動物給藥劑量時(shí)，要考慮動物的年齡和體質(zhì)狀況。⒎確定動物給藥劑量時(shí)，要考慮給藥途徑不同，所用劑量也不同。以口服量為100時(shí)，灌腸量應(yīng)為100～200，皮下注射量為30～50，肌肉注射量為25～30，靜脈注射量為25。第35頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)動物的采血方法一、大、小鼠的采血方法（一）尾部采血1．剪尾采血需血量少時(shí)常采用本法。用手輕揉，或侵入45°水中數(shù)分鐘，也可用二甲苯涂擦鼠尾，使尾部血管充盈。消毒后，用無菌紗布擦干，將尾尖剪去約5mm，從尾根向尾尖推擠，即可收集到少量血液。用此法每只鼠一般可采血10余次。小鼠每次可采血0.1ml，大鼠約0.4ml。2．切割尾動脈或尾靜脈用鋒利刀在尾靜脈或尾動脈切開一小口，血液自行流下，幾條血管可從鼠尾交替切割。此法主要適應(yīng)于大鼠。3．尾靜脈穿刺方法同大、小鼠的尾靜脈注射給藥。此法主要適應(yīng)于大鼠。第36頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三（二）眼眶后靜脈叢采血用7~10cm長的玻璃取血管，將其尖端折斷，使其鋒利。將取血管浸入1%的肝素溶液，干燥后使用。采血時(shí)，左手拇指及食指抓住鼠耳之間的皮膚使鼠固定，并輕輕壓迫頸部兩側(cè)，阻礙靜脈回流，使眼球充分外突，提示眼眶后靜脈叢充血。右手持取血管，將其尖端插入內(nèi)眼角與眼球之間（如圖所示），輕輕向眼底方向刺入，小鼠刺入2~3mm深，大鼠刺入4～5mm深，當(dāng)感到有阻力時(shí)即停止刺入，旋轉(zhuǎn)取血管以切開靜脈叢，血液即流入取血管中。采血結(jié)束后，拔出取血管，放松左手，出血即停止。亦可同時(shí)用消毒紗布輕壓眼部片刻，同一動物可反復(fù)交替穿刺雙眼多次。小鼠一次可采血0.2~0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。第37頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三(三)心臟采血⒈穿刺法麻醉，固定，消毒皮膚。在左胸3～4肋間用左手食指摸到心搏最強(qiáng)處，右手持注射器垂直胸壁由此進(jìn)針，插入心臟，心臟采血時(shí)，動作要迅速，縮短留針時(shí)間，以防止血液凝固。⒉開胸法打開胸腔，直接從見到的心臟內(nèi)抽血。亦可剪破心臟，直接用注射器或吸管吸血。（四）大血管采血把麻醉的動物固定好，分離暴露頸靜脈、頸動脈或股動脈、股靜脈，用注射器穿刺抽出所需血量。也可插入導(dǎo)管，反復(fù)采血。（五）摘除眼球采血此法常用于鼠類大量采血。采血時(shí)，用左手固定動物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用眼科彎鑷迅速夾住眼球根部，將眼球摘除，將動物頭朝下，提起動物，血液很快從眼眶內(nèi)流入已準(zhǔn)備好的容器中。此法一般只適用于一次性采血。

（六）斷頭采血用剪刀迅速剪掉動物頭部，立即將動物頭頸朝下，提起動物，血液可流人已準(zhǔn)備好的容積中。第38頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三⒈耳緣剪口采血消毒耳緣后，用刀片或剪刀割（剪）破耳緣，在切口邊緣涂上20％的檸檬酸鈉溶液，防止血液凝固，則血可自切口處流出。此法每次可采血0.5ml左右。⒉足背正中靜脈采血固定豚鼠，將其左肢或右肢膝關(guān)節(jié)伸直，足背消毒，找出足背正中靜脈，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手將注射器刺入靜脈，拔針后立即出血。⒊心臟采血同大、小鼠的心臟采血（穿刺法及開胸法）。二、豚鼠的采血方法第39頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三三、家兔的采血方法⒈耳緣靜脈采血具體方法同兔耳緣靜脈注射。本方法為兔最常用的采血方法．一次可采血血5～10ml，可多次重復(fù)使用。⒉耳中央動脈采血在兔耳中央有一條較粗的，顏色較鮮紅的中央動脈，由于兔耳中央動脈容易痙攣，故抽血前必須讓兔耳充分充血，采血?jiǎng)幼饕杆?，采血后?yīng)立即壓迫止血，此法一次可采血10～15ml。⒊心臟采血具體方法與大鼠、小鼠的心臟采血方法類似，經(jīng)左側(cè)3～4肋間垂直胸壁穿刺，約3cm即可。經(jīng)6～7天后，可重復(fù)心臟采血。第40頁，共49頁，2023年，2月20日，星期三1．前肢背側(cè)皮下頭靜脈采血

前肢背側(cè)皮下頭靜脈位于前肢背側(cè)，固定犬后，用橡皮管結(jié)扎使靜脈怒張。操作者位于犬的前面，注射器針頭由前肢的上l／3處刺入靜脈，直接抽取血液，抽時(shí)速度要稍慢。2．后肢外側(cè)小隱靜脈采血后肢外側(cè)小隱靜脈位于后肢脛部下1／3的外側(cè)淺表皮下。3．頸靜脈采血

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