醋酸纖維薄膜電泳法分離牛血清蛋白

醋酸纖維薄膜電泳法分離牛血清蛋白第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四二、實驗儀器

1、

牛血清

2、

醋酸纖維薄膜

3、

鑷子

4、

電泳儀

5、

電泳槽

6、

蓋玻片第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四三、實驗試劑

1、巴比妥—巴比妥鈉緩沖液（離子強度，PH8.6）：稱取巴比妥1.66g和巴比妥鈉12.76g，溶于蒸餾水并稀釋至1000ml。用pH計較正后使用。

2、

染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸餾水40ml混勻即可。

3、

漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸餾水50ml混勻即可。第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四四、試驗步驟

1、準備：用鑷子取薄膜一條，浸入緩沖液中，完全浸透后（大約3-5分鐘），用鑷子取出，將無光澤的一面向上，平放在干凈濾紙上，將濾紙對折，吸取多余的緩沖液（注意不要吸的太干）。

2、點樣：取蓋玻片一塊，用玻璃棒將血清均勻的涂在蓋玻片的一端面上，直直的在薄膜一端1/3處點樣。

3、電泳：將薄膜平貼于放在電泳槽上并已浸透緩沖液的濾紙上，無光澤面要向下放置，點樣端放在陰極，進行電泳。電泳條件：電壓90-110V，電流0.4-0.6A,通電60分鐘。

4、

染色：電泳完畢，將薄膜浸入染色液（回收）中10分鐘，進行染色。

5、漂洗：染色完畢，將薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景無色，在浸入蒸餾水中。

6、圖譜觀察：觀察圖譜，將各種血清蛋白質按實際比例大小繪于實驗報告紙上。第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四注意事項請帶試驗的老師試驗結束后，將鑷子回收。醋酸纖維薄膜在光下面能明顯區(qū)分有光澤面和無光澤面。電泳槽中間為正極，兩端為負極。染色液請用完后回收到原來的試劑瓶中。漂洗薄膜時，請做到“少量多漂”，即用少量的漂洗液去漂洗薄膜，多漂幾次，這樣既不浪費漂洗液，還達到了漂洗的效果。第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四實驗十二維生素C的定量測定（2，6-二氯靛酚滴定法）

一、原理維生素c又稱為抗壞血酸，其還原型能還原染料2，6-二氯靛酚鈉鹽，本身則氧化成脫氫抗壞血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成紅色，被還原后變?yōu)闊o色。因此可用2，6-二氯靛酚滴定樣品中含有的維生素C，當樣品中的維生素C被完全還原后，在滴加過量的2，6-二氯靛酚，溶液變?yōu)榈t色，即為終點。如無其他雜質干擾，則樣品液所還原的2，6-二氯靛酚的量與樣品中所含有維生素C的量成正比。第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四二、實驗儀器新鮮水果吸管容量瓶滴定裝置錐形瓶研缽漏斗第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四三、實驗試劑1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸餾水。2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸餾水。3、標準維生素C液：準確稱取10.0mg維生素C，溶于1%草酸溶液，并稀釋至100ml，貯于棕色瓶中，冷藏，最好臨用時配制。此溶液濃度0.1mg/ml.4、0.1%2，6-二氯靛酚溶液：稱取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氫鈉的熱水中，冷卻，加蒸餾水并稀釋至500ml，濾去不溶物，貯于棕色瓶中，冷藏。第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四四、實驗步驟1.樣品中抗壞血酸的提取：將水果用水洗干凈，用濾紙吸取表面水分。稱取2.0g，加2%草酸試劑10ml置研缽中研成漿狀。直接將漿狀物，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀釋并定容，混勻，靜止10分鐘，過濾（最初數毫升濾液棄去），濾液備用。第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四2.滴定1)標準液的滴定：準確吸取標準抗壞血酸溶液1.0ml于100ml錐形瓶中，加9ml1%草酸溶液，用2，6-二氯靛酚滴定至淡紅色。滴定終點要保持15秒鐘。有所用2，6-二氯靛酚的體積算出1ml染料相當于多少毫克抗壞血酸。2)樣品液的滴定：準確吸取濾液兩份，每份10ml，分別放入兩個100ml錐形瓶中，滴定方法同上。（2，6-二氯靛酚用完后，請回收回原來的試劑瓶中）第10頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四五、結果計算按下式計算100mg樣品中含抗壞血酸的毫克數：m=V*T/W*100V=滴定時所用染料ml數T=每毫升染料氧化抗壞血酸質量W=10ml樣液相當于含樣品的質量數第11頁，共12頁，2023年，2月20日，星期四注意事項1、滴定過程宜迅