普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù)

生物技術(shù)及應(yīng)用專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)第二節(jié)

普通光學(xué)顯微鏡的使用與維護(hù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解光學(xué)明視野顯微鏡的構(gòu)造、原理，維護(hù)和保養(yǎng)的方法；2、掌握顯微鏡的正確使用方法；3、學(xué)會(huì)使用油鏡觀察細(xì)菌的基本形態(tài)。顯微鏡的構(gòu)造

光學(xué)顯微鏡是由一組光學(xué)放大系統(tǒng)和機(jī)械支持及調(diào)節(jié)系統(tǒng)組成。（1）機(jī)械支持及調(diào)節(jié)系統(tǒng)

機(jī)械支持及調(diào)節(jié)系統(tǒng)是整個(gè)顯微鏡的骨架，對(duì)光學(xué)系統(tǒng)起支撐和調(diào)節(jié)作用，結(jié)構(gòu)包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、物鏡轉(zhuǎn)換器、鏡筒和粗、細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕等。鏡座：鏡座是顯微鏡的基座，可使顯微鏡平穩(wěn)地放置在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。鏡臂：鏡臂用于支撐鏡筒、鏡臺(tái)和調(diào)節(jié)系統(tǒng)。鏡臺(tái)載物臺(tái)：是放置標(biāo)本的地方，鏡臺(tái)載物臺(tái)上有標(biāo)本固定和位置移動(dòng)系統(tǒng)，用于固定標(biāo)本和在平面上移動(dòng)。標(biāo)本固定和位置移動(dòng)系統(tǒng)上附帶有游標(biāo)尺，可用于標(biāo)本定位。鏡筒：鏡筒是連接物鏡和目鏡的金屬筒，其上端插入目鏡，下端和物鏡轉(zhuǎn)換器相連接。物鏡轉(zhuǎn)換器：物鏡轉(zhuǎn)換器安裝在鏡筒下端，用于裝配物鏡，裝配有數(shù)個(gè)不同放大倍數(shù)的物鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)換器可以選擇到合適的物鏡。粗細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕：粗細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕位于鏡臂基部，可使載物臺(tái)上下移動(dòng)，用于調(diào)節(jié)焦距。（2）光學(xué)系統(tǒng)

光學(xué)系統(tǒng)架構(gòu)于機(jī)械系統(tǒng)上，包括目鏡、物鏡、聚光器和光源。請(qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｕ?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋?。?qǐng)?jiān)诖溯斎肽奈谋尽Ｄ跨R物鏡

使物鏡放大了的實(shí)像再放大一次，且物像由此進(jìn)入觀察者眼中。

對(duì)標(biāo)本進(jìn)行第一次成像，是顯微鏡中很重要的部件，其質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到成像的質(zhì)量。

根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)，可將其分為低倍鏡、高倍鏡和油鏡。低倍鏡有4×、10×、20×等，高倍鏡有40×、60×等，油鏡有90×，100×等。

顯微鏡的總放大倍數(shù)為物鏡放大倍數(shù)乘以目鏡的放大倍數(shù)。如在觀察某標(biāo)本時(shí)，物鏡的放大倍數(shù)為100倍，目鏡的放大倍數(shù)為10倍，則總的放大倍數(shù)為100×10=1,000倍。聚光器光源

將從光源來(lái)的平行光線聚焦于標(biāo)本上，以增強(qiáng)照明度，得到清晰明亮的效果，可以通過(guò)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)節(jié)聚光器上下移動(dòng)以適應(yīng)不同厚度的載玻片(0.9—1.3mm)。

光源有自然光源(反光鏡)和電光源兩種。有聚光鏡的顯微鏡，無(wú)論是使用高倍還是使用低倍鏡，均使用平面鏡，只有在光線不足時(shí)才使用凹面鏡。無(wú)聚光器的顯微鏡，在使用低倍鏡時(shí)用平面鏡，在使用高倍鏡時(shí)用凹面鏡。顯微鏡的成像原理

由光源射入的光線經(jīng)聚光鏡聚焦于被檢標(biāo)本上，由標(biāo)本反射或折射出的光線經(jīng)物鏡放大，在目的視場(chǎng)光柵處形成放大的實(shí)像。此實(shí)像再經(jīng)接目透鏡放大成虛像。顯微鏡的使用方法

將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方，調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使物鏡下降至載物臺(tái)1cm左右，通過(guò)調(diào)節(jié)光柵，升高或降低聚光器，調(diào)節(jié)反光鏡，使視野均勻明亮。

觀察水浸標(biāo)本時(shí)用較弱的光線，觀察染色標(biāo)本時(shí)宜用強(qiáng)光。打開顯微鏡箱，右手握住鏡臂，取出顯微鏡，左手托住鏡座，將顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，距離實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣約10cm。

使用前要檢查部位零件是否完好，用紗布將鏡身擦拭干凈，用擦鏡紙擦拭光學(xué)部件。（1）準(zhǔn)備取鏡檢查調(diào)節(jié)光線

將標(biāo)本置于載物臺(tái)上，·移動(dòng)推進(jìn)器，使觀察對(duì)象處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使物鏡降至距標(biāo)本約0.5cm處，從目鏡觀察。適當(dāng)調(diào)節(jié)光圈、下降聚光器，使視野亮度合適。

一邊觀察，一邊用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒(或下降載物臺(tái))，直到物像出現(xiàn)，后再只細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)物像清晰為止。

認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到典型的目的物，并將其移至視野中央，準(zhǔn)備用高倍鏡觀察。（2）低倍鏡觀察

檢查標(biāo)本必須先用低倍鏡觀察，因?yàn)榈捅剁R視野較大容易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定檢查的位置。

低倍鏡對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)后，用粗調(diào)節(jié)器降低載物臺(tái)，轉(zhuǎn)換高倍鏡。

從側(cè)面觀察，用粗調(diào)節(jié)器使物鏡降至與標(biāo)本幾乎接近，避免鏡頭與玻片相撞損壞鏡頭。

用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)至物像清晰為止，找到適宜觀察的部位區(qū)域，將此部位移至視野中心，準(zhǔn)備用油鏡觀察。

調(diào)節(jié)光圈、升降聚光器，使視野亮度適宜，用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起載物臺(tái)至物像出現(xiàn)。（3）高倍鏡觀察

①用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)降低2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方，在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上兩至三滴香柏油。

②從側(cè)面觀察，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)小心地上升，使油鏡鏡頭浸入到香柏油中，其鏡頭幾乎與標(biāo)本相接。

注意：不能壓在標(biāo)本上，不能用力過(guò)大，否則容易壓碎玻片，損壞鏡頭。（4）油鏡觀察③從目鏡觀察，調(diào)節(jié)大光圈，使聚光鏡上升，調(diào)節(jié)反光鏡，使視野明亮均勻。④用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒緩緩升起，直至視野出現(xiàn)物像為止，然后用細(xì)調(diào)節(jié)器校正焦距，獲得清晰物像。

如果油鏡已經(jīng)離開油面而仍未見物像，必須從側(cè)面觀察，用粗調(diào)節(jié)器將載物臺(tái)小心地上升，重復(fù)操作，直至物像看清為止。注意：禁止使用細(xì)調(diào)節(jié)器尋找物像。油鏡下的細(xì)菌形態(tài)

油鏡使用完畢后，將鏡筒升起，取下標(biāo)本片，用擦鏡紙擦去鏡頭上的油(擦3次)，再用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留油跡，最后用擦紙擦去殘留的二甲苯。（擦拭規(guī)則：1干2濕3干4驗(yàn)證）忌用手或其他紙、布等擦鏡頭，以免損壞鏡頭。（5）顯微鏡的維護(hù)

顯微鏡使用完畢后，用紗布擦凈顯微鏡的機(jī)械部件，將鏡頭轉(zhuǎn)成“八”字式，或?qū)⒆畹捅稊?shù)鏡頭轉(zhuǎn)至鏡筒下方，再降下鏡筒