不同地方區(qū)域麻黃中麻黃堿含量的測(cè)定

中國(guó)是世界上惟一的天然麻黃堿生產(chǎn)國(guó)， 麻黃為我國(guó)特產(chǎn)中藥。我國(guó)麻黃的主要產(chǎn)地是內(nèi)蒙古，其次是新疆、山西、吉林、遼寧、寧夏、甘肅、陜西、河北、河南等地。草麻黃產(chǎn)量最大，麻黃商品主流；中麻黃次之，木賊麻黃產(chǎn)量最小。其他藥源：麗江麻黃 產(chǎn)云南，四川，貴州。表面具較粗深的縱溝紋。膜質(zhì)葉先端2裂。麻黃堿含量不少于0.6％。每年僅新疆地區(qū)，消耗麻黃草的用量在8～10萬(wàn)噸左右。由于生長(zhǎng)麻黃草的主產(chǎn)區(qū)是中國(guó)沙漠化最為嚴(yán)重的地方。而麻黃草又是這些地區(qū)的主要固沙植物，所以，近年來(lái)麻黃草的過(guò)度采挖，已經(jīng)對(duì)這些地區(qū)的生態(tài)環(huán)境造成了嚴(yán)重影響。因此。以化學(xué)合成手段生產(chǎn)符合市場(chǎng)要求的麻黃堿將是減少麻黃草的采挖，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，滿足市場(chǎng)需求的有效途徑。目前，化學(xué)合成手段生產(chǎn)麻黃堿面臨的主要問(wèn)題是如何低成本地得到光學(xué)純的產(chǎn)物。后面合成的時(shí)候我們?cè)倬唧w介紹。三種麻黃的性狀比較：草麻黃（1）呈細(xì)長(zhǎng)圓柱形，略扁，少分枝，直徑l～2mm。（2）表面淡綠色至黃綠色，有細(xì)縱棱線，觸之微有粗糙感。（3）節(jié)明顯，節(jié)間長(zhǎng)2～6cm。節(jié)上有膜質(zhì)鱗葉，裂片2（稀3），1/13下載文檔可編輯銳三角形，先端灰白色，反曲，基部連合成筒狀，紅棕色。（4）體輕，質(zhì)脆，易折斷。斷面近圓形，略呈纖維性，周邊黃綠色，中央髓部紅色或紅棕色，類圓形。（5）氣微香，味澀、微苦。選擇時(shí)：以干燥、莖淡綠、內(nèi)心充實(shí)紅棕、手拉不脫節(jié)、味苦澀者為佳。中麻黃：（1）多分枝，直徑1.5mm～3mm，有粗糙感。（2）節(jié)間長(zhǎng)2cm～6cm。（3）膜質(zhì)鱗葉長(zhǎng)2mm～3mm，裂片3（稀2），先端銳尖、斷面髓部呈三角狀圓形。2/13下載文檔可編輯莖節(jié)表面觀木賊麻黃：（1）較多分枝,直徑 1～1.5mm，無(wú)粗糙感。（2）節(jié)間上1.5cm～3cm，膜質(zhì)鱗葉長(zhǎng)1～2mm，裂片2（稀3），上部為短三角形，灰白色，先端多不反曲，基部棕紅色至棕黑色。3/13下載文檔可編輯三種麻黃的共性：①均具節(jié)與節(jié)間。②表面具縱棱線。③葉退化成膜質(zhì)鱗葉，基部聯(lián)合成筒狀。④折斷時(shí)有粉塵飛出。⑤斷面髓部紅棕色（玫瑰心）。⑥味苦澀（生物堿、鞣質(zhì)）?！静墒占庸ぁ壳锛静筛罹G色的草質(zhì)莖，陰干或晾至七成干時(shí)曬干。曝曬過(guò)久則色易變黃，受霜凍則色變紅，均影響藥效。本實(shí)驗(yàn)對(duì)不同溶劑提取麻黃的方法進(jìn)行比較，采用 HPLCc4法測(cè)定不4/13下載文檔可編輯同產(chǎn)地麻黃中麻黃堿的含量，為制劑越婢加術(shù)顆粒的麻黃藥材來(lái)源提供可靠保障。一，麻黃與麻黃堿的來(lái)源之異同：麻黃的來(lái)源：麻黃是一種藥用植物,為麻黃科植物草麻黃或木賊麻黃或中麻黃的干燥草質(zhì)莖。麻黃是一種與麻黃堿同效的草藥,而麻黃堿是其主要有效成分之一,5中國(guó)藥典6規(guī)定麻黃草中麻黃堿(C10H15NO)的含量018%以上才符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。麻黃堿的來(lái)源：麻黃堿可以從麻黃植物中提取麻黃堿,也可以有機(jī)合成法合成麻黃堿、微生物發(fā)酵生成麻黃堿、細(xì)胞培養(yǎng)法生成麻黃堿。二，麻黃的化學(xué)成分：麻黃主含生物堿,主要是1-麻黃堿、d-偽麻黃堿、麻黃次堿及甲基麻黃堿和去甲基麻黃堿等,另含少量的揮發(fā)油、有機(jī)酸等成分。其中主要藥用成分為麻黃堿和偽麻黃堿。麻黃堿是植物麻黃的主要藥用成分之一。三，麻黃與麻黃堿的藥理作用之異同：麻黃的藥理作用：（1）發(fā)汗作用：麻黃發(fā)汗作用已為幾千年臨床所證實(shí),古人也正是利用其發(fā)汗作用,治療風(fēng)寒束表、發(fā)熱無(wú)汗的表實(shí)證。實(shí)驗(yàn)證明,麻黃的揮發(fā)油有發(fā)汗作用,也曾有人觀察到在一般情況下,麻黃雖不能誘發(fā)人體出汗,但當(dāng)人處在溫?zé)岘h(huán)境中,用麻黃50~60mg、經(jīng)015~210h后, 汗腺分泌確比未用麻黃者更多、更快。其發(fā)汗作用, 有人認(rèn)為可能是由于麻黃阻礙了汗腺導(dǎo)管對(duì)鈉的重吸收而導(dǎo)致汗液分泌增加?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn), 麻黃根的生物堿部分能抑制低熱和煙堿所致的發(fā)汗, 此與臨床經(jīng)驗(yàn)相吻合。（2）平喘作用 麻黃平喘5/13下載文檔可編輯作用,沿用千年,但其作用及作用機(jī)理的探討,直至21世紀(jì)30年代始進(jìn)行。大量的試驗(yàn)研究證明,麻黃堿是平喘的有效成分。其平喘機(jī)理主要是通過(guò)以下環(huán)節(jié)實(shí)現(xiàn)的。(1)促進(jìn)腎上腺素能神經(jīng)和腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞釋放去甲腎上腺素和腎上腺素而間接發(fā)揮擬腺素的作用。(2) 因其化學(xué)結(jié)構(gòu)與腎上腺素相似 , 亦可直接與支氣管平滑肌上的B-腎上腺素受體結(jié)合, 使支氣管平滑肌松弛。 (3) 阻止過(guò)敏介質(zhì)的釋放。(4) 直接興奮A-腎上腺素受體, 使末梢血管收縮, 從而可緩解支氣管粘膜的腫脹 , 對(duì)哮喘的發(fā)作和預(yù)防有效。麻黃堿的平喘作用與腎上腺素相比 , 其特點(diǎn)是顯效較慢, 而作用溫和、持久, 且口服有效。（3）利尿作用 麻黃有一定的利尿作用 , 以d-偽麻黃堿作用最顯著。利尿作用的機(jī)理, 有人認(rèn)為是由于其擴(kuò)張腎血管使腎血流增加的結(jié)果, 也有人認(rèn)為是阻礙腎小管對(duì)鈉離子重吸收的緣故。 （4）升高血壓 麻黃堿能興奮腎上腺素能神經(jīng)而使心跳加快 , 心肌收縮力增強(qiáng), 心輸出增加, 血管收縮, 血壓升高。因其同時(shí)興奮 A、B-腎上腺素受體。故收縮壓的升高較舒張壓明顯 , 其升壓特點(diǎn)是緩慢、溫和、持久, 反復(fù)應(yīng)用易產(chǎn)生快速耐受體。（5）興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng) 麻黃對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有興奮作用 , 以麻黃堿最為突出 , 治療劑量即能興奮大腦皮質(zhì)和皮質(zhì)下中樞 , 引起精神興奮、失眠等癥狀, 并可縮短巴比妥類催眠作用時(shí)間, 亦能興奮中腦, 延腦呼吸中樞和血管運(yùn)動(dòng)中樞。（6）解熱、抗病毒。麻黃堿的藥理作用：對(duì)心血管系統(tǒng)的作用(1)對(duì)心臟的影響麻黃堿通過(guò)激動(dòng)B受體,加快心率,增加收縮力。(2)對(duì)血管及血壓的影6/13下載文檔可編輯響麻黃堿激動(dòng)A受體而收縮動(dòng)脈。麻黃堿和偽麻黃堿均有升高血壓、增加心輸出量的作用。對(duì)胃腸道、氣管、輸精管等平滑活動(dòng)的影響麻黃堿激動(dòng)A受體增強(qiáng)小鼠輸精管的自發(fā)收縮活動(dòng) , 同時(shí)麻黃堿作用于突觸前膜受體, 而增強(qiáng)電刺激致小鼠輸精管的收縮 [1,2] 。激動(dòng)B受體, 舒張氣管平滑肌, 且麻黃堿與異丙腎上腺素有交叉脫敏現(xiàn)象。對(duì)神經(jīng)肌肉傳遞的作用低濃度麻黃堿可通過(guò)選擇性激動(dòng)B2受體,而拮抗高K去極化引起的大鼠膈肌麻痹。對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用麻黃堿興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)。儀器與試藥1．1儀器島津(SHIMADZU)LC高效液相色譜儀，SHIMADZULC一20AT多功能紫外檢測(cè)儀，SHIMADZUSPD一20A型泵，LCsolution Lite色譜工作站，海爾冰箱，萬(wàn)用電爐(北京市永光明醫(yī)療儀器廠 )，電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司 )，循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，1／10萬(wàn)分析天平(上海精天電子儀器廠)，超聲波清洗器(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司，型號(hào)KQ一500E)，回流裝置。1．2試藥甲醇(上海沃凱)色譜純，乙腈(上海沃凱)色譜純，甲醇，磷酸二氫鉀，三乙胺，磷酸，95％乙醇，鹽酸均為分析純，娃哈哈純凈水，氫氧化鈉，鹽酸麻黃堿對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)1241—200102，含量>99．9％)，蒸餾水。1．3藥材4種麻黃藥材來(lái)源于哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)中藥標(biāo)本館，經(jīng)該校生藥研究室魏東華教授鑒定均為麻黃科植物草麻黃 (Ephedraesinicastapf) 的干燥草質(zhì)莖。7/13下載文檔可編輯方法和結(jié)果2．1色譜條件色譜柱為INERTSILODS—SP柱(4．6mnl×150mm，5m)，檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm，流動(dòng)相：乙腈一(0．02mol／L磷酸二氫鉀+0．02％三乙胺+0．2％磷酸水溶液)(10：90)，流速：1ml／min，進(jìn)樣量10l。2．2溶液制備2．2．1對(duì)照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品 4mg，置50ml量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，得 80g／ml對(duì)照品溶液。2．2．2樣品溶液的制備分別精密稱取產(chǎn)地為山西、河北、陜西、內(nèi)蒙的麻黃粗粉各5g，各置于250ml圓底燒瓶中，加70％乙醇50ml回流1h，過(guò)濾，重復(fù)回流3次，合并濾液，最后制成每100ml相當(dāng)麻黃生藥lg的4份不同產(chǎn)地的麻黃樣品溶液。對(duì)照品和樣品色譜圖如 圖 1 。1．鹽酸麻黃堿圖1對(duì)照品(A)樣品(B)HPLC色譜圖2．3線性關(guān)系考察精密吸取8Og／ml對(duì)照品溶液l0、8、6、5和2．5Tn1分別置10m1量瓶中，甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為8/13下載文檔可編輯80、64、48、40和20g／IIll 的對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液各10l進(jìn)樣，記錄色譜峰峰面積，以鹽酸麻黃堿對(duì)照品的含量(g)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值l，為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程為Y=5E+0．6X+119445(r=0．9997)，線性范圍為0．2—0．8g02．4精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10，分別自上述色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿峰面積積分值，RSD值為0．71％。理論塔板數(shù)為2354，表明儀器的精密度良好。2．5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取山西樣品溶液，于配制后 0、2．5、5．0、7．5、10．0和l2．5h自上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，共測(cè)定 5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿峰面積積分值， RSD值為1．53％。表明山西樣品溶液在l2．5h內(nèi)穩(wěn)定。2．6加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知麻黃堿含量的山西麻黃 5份，每份2．5g，分別準(zhǔn)確加入鹽酸麻黃堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，依照樣品溶液的制備方法制備成 5份樣品，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄麻黃堿峰面積，計(jì)算麻黃堿平均回收率 (r／,=5)為98．21％，RSD值為0．79％。2．7提取方法的確定本實(shí)驗(yàn)在考察含量測(cè)定的同時(shí)，注重提取方法的研究。本實(shí)驗(yàn)對(duì)水蒸氣蒸餾法，酸水回流法，乙醇回流法，鹽酸乙醇回流法，半仿生法進(jìn)行了對(duì)比[引。2．7．1水蒸氣蒸餾法取麻黃粗粉10g，置圓底燒瓶中，加100ml水，冷浸10min，回流3次，分別為1、0．5和0．5h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。9/13下載文檔可編輯2．7．2酸水回流法取麻黃粗粉10g，置圓底燒瓶中，加100ml水，O．75ml鹽酸，冷浸10min，回流3次，分別為l、0．5和0．5h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。2．7．3乙醇回流法取麻黃粗粉 10g，置圓底燒瓶中，加60％乙醇100ml，回流3次，每次1h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于 6O℃干燥，稱重。2．7．4酸水乙醇回流法取麻黃粗粉 l0g，置圓底燒瓶中，加60％乙醇100ml，0．75ml鹽酸，回流3次，分別為1、0．5和0．5h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重"J。2．7．5半仿生法取麻黃粗粉1Og，置錐形瓶中，加100ml水，加鹽酸調(diào)至pH=1，煎煮0．5h，過(guò)濾，濾渣加80ml水，加氫氧化鈉調(diào)至pH=10，煎煮2次，每次0．5h，每次過(guò)濾，合并濾液，濃縮，于60℃干燥，稱重。精密吸取按上述5種方法提取的麻黃浸膏適量，分別加入甲醇適量制成每100ml相當(dāng)麻黃生藥1g的樣品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液和上述5種樣品溶液各10l，按照“2．1”項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算麻黃堿含量，結(jié)果半仿生法從麻黃中提取的鹽酸麻黃堿含量最高，乙醇回流法次之，其次為鹽酸乙醇回流法，酸水回流法，水蒸氣蒸餾法?？紤]到乙醇回流法較半仿生法差距不甚顯著，且半仿生法對(duì)實(shí)驗(yàn)器材要求較高，由此確定了乙醇回流法為提取麻黃較好的方法，其原因在于游離的麻黃堿在提取和干燥的過(guò)程中易蒸發(fā)損失，水的沸點(diǎn)比乙醇高，因而損失較多，乙醇可減少蒸發(fā)損失，提取/13下載文檔可編輯量也較高 引。見表1。表1提取方法結(jié)果比較2．8樣品含量測(cè)定結(jié)果精密吸取“ 2．2．2”項(xiàng)下方法制備的四種不同產(chǎn)地麻黃樣品溶液l0l，按“2．1”項(xiàng)下色譜條件，分別注入液相色譜儀，每份測(cè)定3次，記錄峰面積，計(jì)算樣品溶液中麻黃堿含量。結(jié)果見表2/13下載文檔可編輯討論：HPLC法測(cè)定麻黃堿含量的報(bào)道較多， 色譜條件多樣，本實(shí)驗(yàn)分別考察了5種流動(dòng)相：甲醇一水、乙腈一水、乙腈一0．1％磷酸水溶液、乙腈一0．2％磷酸水溶液、乙腈～(0．02mol／L磷酸二氫鉀+0．02％三乙胺+0．2％磷