紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查

血液學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)

紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)紅細(xì)胞膜蛋白電泳分析血細(xì)胞表型分析紅細(xì)胞孵育滲透脆性試驗(yàn)酸化血清溶血試驗(yàn)蔗糖溶血試驗(yàn)紅細(xì)胞自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)常見實(shí)驗(yàn)室檢查酸化甘油溶血試驗(yàn)（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】紅細(xì)胞在不同濃度的低滲溶液中，水分通過紅細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)水滲透達(dá)一定程度時(shí)，紅細(xì)胞發(fā)生膨脹破裂。根據(jù)不同濃度的低滲鹽溶液中紅細(xì)胞溶血的情況，反映紅細(xì)胞對(duì)低滲鹽溶液的抵抗能力。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】紅細(xì)胞對(duì)低滲的抵抗能力與其表面積與容積的比值有關(guān)，比值小，說明紅細(xì)胞容積已脹大，對(duì)低滲抵抗力小，滲透脆性增加；反之抵抗力增大，滲透脆性降低。第九章溶血性貧血低滲鹽低滲鹽紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【參考區(qū)間】簡(jiǎn)易半定量法開始溶血：3.8～4.6g/L；完全溶血：2.8～3.2g/L。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（一）紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn)【臨床意義】增加主要見遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、橢圓形紅細(xì)胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血。降低主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血、阻塞性黃膽、脾切除術(shù)后等。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（二

）紅細(xì)胞自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】第九章溶血性貧血血液置于37℃溫箱孵育24h葡萄糖的消耗，貯備的ATP減少膜對(duì)陽(yáng)離子的主動(dòng)傳遞受阻，Na在紅細(xì)胞內(nèi)聚集紅細(xì)胞膨脹，孵育滲透脆性增加在孵育時(shí)，加入葡萄糖和ATP作為糾正物，觀察溶血可否有一定的糾正，稱為糾正試驗(yàn)。紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（二

）紅細(xì)胞自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)【參考區(qū)間】正常人紅細(xì)胞孵育48小時(shí)，不加糾正物的溶血率<4.0%，加葡萄糖或ATP糾正物的溶血率<0.6%（全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第四版）。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（二

）紅細(xì)胞自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)【臨床意義】遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP糾正。G-6-PD缺乏癥等戊糖旁路代謝缺陷的病人自身溶血率增加，能被葡萄糖糾正。丙酮酸激酶缺乏癥時(shí)不能利用葡萄糖產(chǎn)生ATP，溶血率增加，不能被葡萄糖糾正，能被ATP可糾正。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（二

）紅細(xì)胞自身溶血試驗(yàn)及其糾正試驗(yàn)【臨床意義】獲得性溶血性貧血或自身免疫性溶血時(shí)試驗(yàn)結(jié)果常各有不同，對(duì)診斷意義不大。本試驗(yàn)不夠敏感和特異，僅對(duì)遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥有較大診斷價(jià)值，其他多僅作為篩選試驗(yàn)。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（三）酸化甘油溶血試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】

第九章溶血性貧血遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥的紅細(xì)胞膜脂質(zhì)減少，表面積/體積的比值降低、細(xì)胞球形化，膜蛋白及膜脂質(zhì)有缺陷當(dāng)甘油存在于低滲溶液時(shí)，可阻止低滲溶液中的水快速進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，減慢溶血過程。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)逐步溶解而減少。它們?cè)趐H6.85的甘油緩沖液中比正常紅細(xì)胞溶解速度快，導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度降至50%的時(shí)間（AGLT50）明顯縮短。紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（三）酸化甘油溶血試驗(yàn)【參考區(qū)間】

正常人AGLT50>290s?！九R床意義】

遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥AGLT50明顯縮短（15～25s）。自身免疫性溶血性貧血、腎功能衰竭、妊娠等AGLT50也可縮短。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（三）酸化血清溶血試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】第九章溶血性貧血正常人的血清，在pH6.4～6.6條件下酸化，補(bǔ)體被激活PNH患者體內(nèi)存在對(duì)補(bǔ)體敏感的紅細(xì)胞，在此條件下發(fā)生溶血。而正常人的紅細(xì)胞不被溶解。將血清加熱56℃30min滅活補(bǔ)體后，血清失去溶血作用。紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（三）酸化血清溶血試驗(yàn)【參考區(qū)間】正常人為陰性【臨床意義】本實(shí)驗(yàn)是PNH的確證實(shí)驗(yàn)；其假陽(yáng)性和假陰性較少見，但如患者多次輸血而使其補(bǔ)體敏感紅細(xì)胞相對(duì)減少時(shí)，可呈弱陽(yáng)性或陰性。某些自身免疫性溶血性貧血患者溶血發(fā)作嚴(yán)重時(shí)也偶呈陽(yáng)性，此時(shí)，如果血清加熱破壞補(bǔ)體后，試驗(yàn)結(jié)果由陽(yáng)性轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮?，那么更支持PNH的診斷。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（四）蔗糖溶血試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】【參考區(qū)間】正常人為陰性第九章溶血性貧血PNH患者因紅細(xì)胞膜有缺陷而對(duì)補(bǔ)體敏感在離低子強(qiáng)度的蔗糖溶液中，補(bǔ)體與細(xì)胞膜的結(jié)合加強(qiáng)使對(duì)補(bǔ)體敏感的紅細(xì)胞膜造成缺損，紅細(xì)胞溶解破損紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（四）蔗糖溶血試驗(yàn)【臨床意義】本試驗(yàn)比酸溶血試驗(yàn)敏感，但特異性較差，是PNH簡(jiǎn)易過篩試驗(yàn)。再生障礙性貧血、巨幼紅細(xì)胞性貧血和自身免疫性溶血性貧血患者也可出現(xiàn)陽(yáng)性，故必要時(shí)需做酸化血清溶血試驗(yàn)加以鑒別。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（五）血細(xì)胞表型分析【實(shí)驗(yàn)原理】PNH是一種獲得性基因突變導(dǎo)致的克隆性疾病，其異常的血細(xì)胞膜糖化肌醇磷脂－錨連接蛋白如CD59,CD55等表達(dá)明顯減低或缺乏，細(xì)胞膜對(duì)補(bǔ)體的敏感性增強(qiáng)而引起溶血性貧血。用GPI連接蛋白如CD59的單克隆抗體作分子探針，流式細(xì)胞術(shù)分析紅細(xì)胞和白細(xì)胞膜CD59等分子的表達(dá)量和計(jì)數(shù)其缺乏表達(dá)（陰性）細(xì)胞的數(shù)量。第九章溶血性貧血紅細(xì)胞膜缺陷的實(shí)驗(yàn)室檢查（五）血細(xì)胞表型分析【參考范圍】PNH診斷的臨界值：CD59陰性的紅細(xì)胞大于5%和CD59陰性的中性粒細(xì)胞大于10%，非PNH者均小于5%；PNH患者CD59陰性的紅細(xì)胞大于9%，多數(shù)患者大于20%；CD59陰性的中性粒細(xì)胞均大于16%。第九章溶血性貧血