基因?qū)嶒?yàn)診斷培訓(xùn)班 熒光定量PCR技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用

PCR熒光定量

技術(shù)在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用中山大學(xué)

中山醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室達(dá)安基因股份有限公司首席科學(xué)家朱振宇

醫(yī)學(xué)博士、教授、博士生導(dǎo)師Tel

020－37656430P

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.P

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.PCR發(fā)展簡(jiǎn)史PCR(Polymerase

Chain

Reaction)1983

Cetus

公司的Kary

Mullis于12月16日第一

次成功實(shí)驗(yàn)發(fā)明了PCR1985

關(guān)于PCR

的文章首次由Kary

Mullis及其同事等人

在《Science》上

發(fā)

表1989

12月《Science》雜志將PCR和它所使用的TaqDNA聚合酶命名為第一個(gè)“年度分子”。1993

Kary

Mullis，NobelPrizein

Chemistry1995

PerkinElmer

公司研制出熒光定量PCR技術(shù)九十年代中期P

CR臨床應(yīng)用在國(guó)內(nèi)全面展開(kāi)1998年

熒光定量P

CR技術(shù)開(kāi)始在中國(guó)應(yīng)用于臨床檢測(cè)P

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.PCR循環(huán)PCR循環(huán)次數(shù)與DNA產(chǎn)量關(guān)系循環(huán)次數(shù)DNA的鏈數(shù)12212224323810241020302102202301,048,5761,073,741,824

10億PCR特點(diǎn)：高效擴(kuò)增、忠實(shí)復(fù)制P

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.PCR反應(yīng)的特點(diǎn)?

靈敏度高?

快捷?

簡(jiǎn)便?

對(duì)樣品純度要求低?

可以相對(duì)定量P

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.FQ-PCRCt值的意義Ct值與濃度Ct值與重復(fù)性同一樣本在相同條件下同時(shí)進(jìn)行96次擴(kuò)增不同的模板達(dá)到熒光域值時(shí)的Ct值不同P

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.熒光定量PCR的臨床應(yīng)用§感染性疾病的診斷§母嬰傳播的控制與觀察§遺傳疾病的診斷§腫瘤的診斷§法醫(yī)學(xué)鑒定P

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.§早期診斷§病情評(píng)估和預(yù)后判斷§抗病毒藥物療效的觀察、指導(dǎo)§新藥驗(yàn)證P

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.臨床應(yīng)用一

感染性疾病1.病原體含量與病情之間的關(guān)系2.病原體含量與用藥之間的關(guān)系3.藥物及療法的研究與開(kāi)發(fā)4.新的病原體分子診斷標(biāo)準(zhǔn)5.新的愈后指標(biāo)6.傳染病發(fā)病的監(jiān)控、預(yù)測(cè)與預(yù)防P

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.臨床應(yīng)用二

腫瘤1.腫瘤標(biāo)志物：癌胚抗原、同功酶、抗體、激素、細(xì)胞因子、受體等2.腫瘤相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè)：包括癌基因抗癌基因、腫瘤轉(zhuǎn)移基因及轉(zhuǎn)移抑制基因P

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.三

遺傳病1.

等位基因檢測(cè)2.

多基因遺傳病的突變檢測(cè)3.

基因表達(dá)異常所致遺傳病檢測(cè)P

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.臨床應(yīng)用熒光定量P

CR在病原體檢測(cè)中的應(yīng)用一

肝炎病毒定量檢測(cè)二

性病病原體檢測(cè)三

結(jié)核桿菌及呼吸道病原體檢測(cè)四

優(yōu)生優(yōu)育(TORCH)相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)P

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.臨床應(yīng)用一

肝炎病毒定量檢測(cè)HBVHCVP

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.HBV（一）

乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb:

非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好P

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.HBV（二）

HBV-DNA與“兩對(duì)半”1.

“兩對(duì)半”

：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；FQ-PCR：檢測(cè)的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。2.

“攜帶者”、“大三陽(yáng)”、“小三陽(yáng)”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。P

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.HBV（二）

HBV-DNA與“兩對(duì)半”3.血清學(xué)指標(biāo)(－)不能排除HBV感染。HBsAg(－)HBeAg

(－)HBV-DNA(＋)HBV-DNA(＋)4.也可能出現(xiàn)HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。5.

HBsAb(＋)、

HBcAb(＋)、HBeAb

(＋)三抗體陽(yáng)性與HBV

DNA

2.5×

103

copy

/ml結(jié)果解釋。P

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.HBV(三)

HBV-DNA定量檢測(cè)的臨床意義1.HBV-DNA定量與HBV復(fù)制水平及傳染性2.HBV-DNA定量與乙肝藥物療效a.專家提出<103

copy/ml做為陰性或臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)b.HBV-DNA定量分析與干擾素治療(前、中、后)c.

拉咪呋啶3.HBV-DNA定量與預(yù)后a.含量高者急性肝炎患者易慢性化b.癌變的幾率明顯高于含量低者P

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.HBV感染與干擾素治療治療前：a:

治療前HBV低水平復(fù)制者對(duì)干擾素的反應(yīng)性明顯優(yōu)于高水平復(fù)制者。b:

治療前HBV

DNA含量特別高者大多沒(méi)有療效。c:

HBsAg轉(zhuǎn)陰的幾乎都是那些治療前血清HBVDNA

含量較低者。P

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.HBV感染與干擾素治療治療中：a:

病毒復(fù)制水平迅速降低者，有望治愈。b:

相反，治療期間HBV

DNA復(fù)制水平下降較慢，或下降幅度較小，或者變化不明顯者，大多是干擾素治療無(wú)效。P

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.?HBV感染與干擾素治療治療后：?

a:

治療結(jié)束后，采用PCR定量法檢測(cè)，HBVDNA

<103copy/ml

者，可能不再?gòu)?fù)發(fā)。b:

終止治療后HBV

DNA仍保持較低水平者，反跳的可能性較大。P

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.CHRONIC

HEPATITIS

BPoorResponse

toIFNTherapyALTHBV

DNAHBeAgHBs

AgNormalAlt0

1

2

3

4

5

61224MonthsafterStartof

TherapyP

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.HBV感染與拉咪呋啶治療拉咪呋啶：有顯著降低高病毒載量作用，近期療效頗有優(yōu)勢(shì)，但是長(zhǎng)期使用可導(dǎo)致HBV變異，患者易出現(xiàn)耐受性，而且容易出現(xiàn)停藥后反彈。P

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.拉米夫定抑制血清HBVDNA0-20-40-60安慰劑-80血清HBV

DNA;-100中位%變化拉米夫定0

4

8

12

16

20

24

28

32

36

40

44

48

52n=192n=404n=171n=359治療周數(shù)P

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.HBV(三)

HBV-DNA定量檢測(cè)的臨床意義4.HBV-DNA定量有助于指導(dǎo)懷孕與孕期，哺乳期檢查5.肝臟移植與HBV-DNAMazzaferro等報(bào)告：<103copy/ml

無(wú)一例再發(fā)肝炎>105copy

/ml

發(fā)生了嚴(yán)重HBV再感染6.血液制品和獻(xiàn)血員的篩選P

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.HCV（一）丙型肝炎病毒特點(diǎn)病毒特點(diǎn)：1.單正鏈RNA病毒2.E1和E2區(qū)基因高度變異性單鏈RNA感染特點(diǎn)：1.

HCV在血中含量極微2.

輸血后肝炎主要致病因子3.

免疫學(xué)標(biāo)志僅有抗-HCV，非中和抗體，產(chǎn)生時(shí)間不一4.

有一部分人感染HCV后，不產(chǎn)生抗-HCV5.

感染易于慢性化(50-85%)6.

疫苗研制尚不成功P

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.HCV(二)

HCV-RNA定量檢測(cè)的臨床意義1.早期診斷a.臨床以<

80copy/ml做為無(wú)感染或治愈標(biāo)準(zhǔn)。b.HCV感染1-3W，即可檢出HCV-RNA的存在。c.嚴(yán)格篩選獻(xiàn)血員,提高對(duì)窗口期感染者的檢出率。d.醫(yī)療糾紛中的“舉證倒置”，病人入院前后進(jìn)行HCV-RNA檢測(cè)。P

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.HCV(二)

HCV-RNA定量檢測(cè)的臨床意義2.

HCV-RNA載量與抗-HCV滴度、ALT水平之間的相關(guān)性?？?HCV滴度和ALT異常率隨著HCV-RNA載量升高而增加。3.

HCV-RNA是評(píng)價(jià)抗病毒治療效果的重要指標(biāo)。4.慢性丙型肝炎長(zhǎng)期抗-HCV陽(yáng)性，這時(shí)如果進(jìn)行HCV-RNA定量檢測(cè)可以鑒別活動(dòng)性、復(fù)制程度。P

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.STD二

常見(jiàn)性傳播疾病病原體一

淋球菌（NGH）二

沙眼衣原體（

CT

）三

解脲脲原體（UU）四

梅毒螺旋體（TP）五

單純庖疹病毒（HS

V）六

乳頭瘤病毒（HP

V）七

人類免疫缺陷病毒（HI

V）八

EV7

1

A16

通用型P

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.艾滋病艾滋病是英文AIDS（AcquiredImmunity

DeficiencySyndrome)的中文譯音，全稱是“獲得性免疫缺陷綜合征”。它可以由人類免疫缺陷病毒（HIV,Human-beingImmunity

Deficiency

Virus

），又稱艾滋病病毒引起的疾病。當(dāng)病毒侵入人體后，經(jīng)一段時(shí)間的潛伏期，破壞人體的免疫力，從而發(fā)病，病死率高，是一種嚴(yán)重的傳染病。P

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.艾滋病是一種有明確病原體的可通過(guò)人之間一定傳播途徑傳播的慢性傳染病，屬于《傳染病防治法》中規(guī)定的乙類傳染病P

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.HIV病毒：多亞型和多變異HIV-1和HIV-2M組、O組和N組亞性型：A-KCRF：基因重組亞型，主要是HIV-1型毒株亞型監(jiān)測(cè)的意義不同亞型與不同傳播途徑的關(guān)系：B主要通過(guò)男性同性性行為和靜脈注射吸毒傳播，C主要異性性接觸傳播流行地理和傳播線路的分析：東南亞區(qū)域的C亞型和B亞型重組亞型傳播效力變化及對(duì)流行的影響：東歐的B/A重組流行、泰國(guó)的A/E重組P

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.艾滋病病毒在外界的抵抗力HIV病毒一旦離開(kāi)宿主細(xì)胞在外界環(huán)境中生存能力很快消失HIV對(duì)環(huán)境中的物理因素和化學(xué)因素抵抗力均較弱，比乙型肝炎病毒（HBV）的抵抗力低得多對(duì)HBV有效得消毒和滅活方法均適用于HIVP

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.HIV感染的三種結(jié)局典型進(jìn)展者：8-10年潛伏期后成為艾滋病人，80%-90%快速進(jìn)展者：CD4細(xì)胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒載量一直維持較高水平，而且分離的HIV有均一性。長(zhǎng)期存活者（又稱長(zhǎng)期不進(jìn)展者）：維持15年以上，而且CD4計(jì)數(shù)維持正常，在所有感染者中比例一般在8%-10%。P

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.艾滋病的診斷HIV感染者：確定HIV感染的個(gè)體抗體檢測(cè)：初篩和確認(rèn)輔助診斷艾滋病病人：臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《HIV/AIDS的診斷標(biāo)準(zhǔn)和防治原則》GB16000-1995P

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.熒光定量PCR的應(yīng)用為艾滋病的初篩和輔助檢查提供了有力的工具P

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.NGH淋球菌感染與致病1.人是淋球菌的惟一宿主。2.

發(fā)病率最高，在所S

TD疾病中，高達(dá)60%左右。3.發(fā)病趨勢(shì)：a.男性多于女性。b.城市走向農(nóng)村，c.

高收入階層向低收入階層擴(kuò)展4.

人對(duì)淋球菌感染無(wú)天然抵抗力，免疫不持久，再感染和慢性患者普遍存在。5.如母親為淋病患者，嬰兒出生時(shí)易患上淋球菌性結(jié)膜炎P

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.CT沙眼衣原體感染與致病1.嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生。2.不僅可致眼部感染、肺部感染、也是S

TD的主要病原體。3.近年來(lái)在歐美等國(guó)，沙眼衣原體的感染率和危害性已超過(guò)淋球菌而居STD之首。4.

在我國(guó)，在非淋球菌性尿道炎中，居首位。5.泌尿生殖道感染，妨礙妊娠。6.盆腔感染，可致生殖能力損害。P

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.UU解脲脲原體感染與致病1.

合成尿素酶，分解尿素2.

在非淋球菌性尿道炎其感染率僅次于衣原體感染，居第二位。3.流產(chǎn)超過(guò)4次以上者，檢出率高達(dá)80%。4.

有30-

40%男性尿道炎是由感染UU所致。5.

與男性不育相關(guān)。男性不育患者精液中，脲原體檢出率高達(dá)66.6％。檢出率隨精子數(shù)減少和精子活動(dòng)力下降而升高。P

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.NGH/CT/UU熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義1.非培養(yǎng)或形態(tài)學(xué)檢查的診斷技術(shù)，快速、特異、敏感。2.對(duì)無(wú)癥狀或癥狀輕者，可以早期確診。3.對(duì)NGH、CT、UU

等混合感染者，診斷和鑒別診斷。4.指導(dǎo)用藥、考核療效。P

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.NGH/CT/UU熒光定量PCR診斷NGH/CT/UU的意義5.

不孕不育、優(yōu)生優(yōu)育。6.

流行病學(xué)調(diào)查，為性傳播疾病的監(jiān)控提供依據(jù)。7.

CT、UU是F

DA批準(zhǔn)的P

CR檢測(cè)試劑盒，可作為首選方法，在臨床推廣應(yīng)用。P

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.HPV人乳頭瘤病毒感染與致病1.

HPV具有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細(xì)胞，人是HPV的惟一宿主。2.

有100多個(gè)型。3.

低危型：HPV6、11引起良性病變(尖銳濕疣、喉乳頭瘤等)P

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.HPV人乳頭瘤病毒感染與致病4.

高危型：HPV16、18引起惡性腫瘤

(宮頸癌、肛門(mén)癌、口腔癌等)5.

免疫原性低，易形成持續(xù)性感染。6.

新生兒產(chǎn)道感染。P

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.HPVP

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.HPV熒光定量PCR檢測(cè)HPV的意義1.對(duì)典型病例可以明確診斷。2.對(duì)臨床表現(xiàn)和組織病理改變都不典型的病例同樣可以做出診斷。3.對(duì)亞臨床和隱性HPV感染做出診斷。4.

基因分型。5.

考核療效與預(yù)后。6.

病毒載量與患癌癥風(fēng)險(xiǎn)。P

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.HPVP

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.手足口?。╤a

nd-

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oot

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mout

h

di

s

eas

e，HF

MD）為全球性傳染病，世界大部分地區(qū)均有流行的報(bào)道。?

1957年在加拿大首次報(bào)告，新西蘭Se

ddon于1957年最早加以描述，1958年加拿大Robi

ns

on從患者糞便和咽拭中分離出CoxA16，同時(shí)患者血清抗體有四倍增長(zhǎng),初步查明CoxA16為本病病原；?

1959年提出HF

MD命名，HF

MD在全球廣泛流行，無(wú)明顯的地域分布。?

之后世界各地均經(jīng)常發(fā)生由各型柯薩奇、?？刹《竞虴V71引起的手足口病流行。?發(fā)熱,

不適,

咽喉腫痛,

口腔、手、腳側(cè)面及掌心、屁股出現(xiàn)小泡傳染性極高病程約1周P

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.HF

MD的病原u

手足口病可由多種腸道病毒所引起，其中包括CoxA5,A10,

A16,

A19,

EV71,以及部分?？刹《竞涂滤_奇B組病毒,以CoxA16

和

EV71最為常見(jiàn)u

傳播途徑:

糞-口途徑傳播:

唾液與糞便;

呼吸道傳播:

空氣飛沫;接觸傳播u

皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。u

HFMD為全球性傳染病，在全球廣泛分布，無(wú)明顯的地域分布,但近年EV71在東南亞一帶流行,引起較多的重癥和死亡病例。u

在80年代和90年代，中國(guó)手足口病的流行主要以CoxA16為主，2008年，CoxA16

和EV71

共循環(huán)引起手足口病爆發(fā),EV71在大部分省市為優(yōu)勢(shì)病毒。P

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.人腸道病毒感染的一般致病機(jī)制口腔/

呼吸道進(jìn)入途徑咽喉及下腸胃道傳播

飛沫、接觸、飲食扁桃體、深層淋巴結(jié)、腸道淋巴結(jié)先天性感染微病毒血癥肝臟、

心臟

神經(jīng)系統(tǒng)

呼吸系統(tǒng)

皮膚及黏膜肌肉胰臟、腎上腺病毒血癥神經(jīng)系統(tǒng)抗體產(chǎn)生、病毒血癥消失，病毒感染癥狀改善P

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.致病特點(diǎn)①隱性感染多見(jiàn)，很少引起腹瀉，嬰幼兒、免疫力低下的成人易感。②病毒在機(jī)體腸道中增殖，很少引起腸道癥狀，是以消化道為原發(fā)灶的全身感染。③不同人腸道病毒可引起相同癥狀，同一種人腸道病毒可引起不同臨床表現(xiàn)。④感染過(guò)程中形成病毒血癥。P

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.中國(guó)HFMD的流行1981年，我國(guó)在上海首次報(bào)道了HFMD病例1987年在中國(guó)分離到CVA161995年以來(lái)，我國(guó)陸續(xù)在武漢、深圳、上海、重慶、山東和安徽等地的HFMD患者中分離到EV71病毒。2007年，山東發(fā)生了手足口病爆發(fā)流行，累計(jì)報(bào)告HFMD病例39，606例，其中14例病例死亡。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EV71是引起山東臨沂HFMD的主要病原，同時(shí)還檢測(cè)到Echo3

和/或

CVA16。2008年全國(guó)出現(xiàn)HFMD爆發(fā)流行,以HEV71為優(yōu)勢(shì),CVA16還有其它EV共循環(huán)引起P

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.加強(qiáng)HF

MD病原檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的十分必要依據(jù)臺(tái)灣1998-

2008和中國(guó)大陸2007-

2008年的經(jīng)驗(yàn)掌握手足口病病原譜，特別是EV71感染所占的比例，對(duì)析判斷HF

MD疫情導(dǎo)致重癥和死亡的比例有重要的科學(xué)參考價(jià)值。P

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.手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)?

手足口病的診斷一般是通過(guò)采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行基因檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)抗體檢測(cè)、病毒分離和病毒鑒定，如果沒(méi)有采到合格的臨床標(biāo)本，或無(wú)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。?

很多血清型的腸道病毒能引起手足口病，不同細(xì)胞系對(duì)不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同時(shí)期腸道病毒的流行株也不同。?

通常用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為RD、HEp-2、Vero等，聯(lián)合使用上述的兩種或更多細(xì)胞有助于分離到更多的腸道病毒。P

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.病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)類型-病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法檢測(cè)抗體/

抗原ELI

S

A/

HI

/

PA

蛋白印跡每種方法各有優(yōu)勢(shì),依據(jù)病毒來(lái)定檢測(cè)策略中和試驗(yàn)病毒分離電鏡基因芯片檢測(cè)病毒ELI

SA免疫熒光檢測(cè)核酸RT

-

PCR

實(shí)時(shí)熒光定量PCRL

AMPNew

moleculartoolsforepidemiologystudies

and

diagnosis套式PCRP

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.三

結(jié)核桿菌與呼吸道病原體檢測(cè)?

TB：Tubercle

bacilli?

CP：Chlamydia

pneumonia?

MP：Mycoplasmal

pneumonia?

SARS：severe

acuterespiratory

syndrome?

H1N1甲型流感?

呼吸道合胞病毒P

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.TB結(jié)核桿菌流行現(xiàn)狀（1）l羅伯特·科赫（１８４３——１９１０），德國(guó)細(xì)菌學(xué)家，結(jié)核桿菌發(fā)現(xiàn)者l結(jié)核病是一個(gè)全球性的問(wèn)題，近年來(lái)在世界范圍內(nèi)出現(xiàn)流行，且呈增長(zhǎng)的趨勢(shì)P

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.結(jié)核桿菌流行現(xiàn)狀（2）?

我國(guó)結(jié)核病的疫情僅次于印度而居世界第二位?

2000年，全國(guó)人口結(jié)核感染率為44.5%，其中15～44歲人群占了53％

，每年約有25萬(wàn)人死于結(jié)核病P

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.結(jié)核桿菌引起的感染l肺部感染：原發(fā)性肺結(jié)核，開(kāi)放性肺結(jié)核。l肺外感染：腦、腎、骨、關(guān)節(jié)、生殖結(jié)核、腸結(jié)核、結(jié)核性腹膜炎、全身性結(jié)核。P

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.TB常規(guī)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法及不足1.痰涂片作抗酸染色：陽(yáng)性率低

、費(fèi)時(shí)2.細(xì)胞培養(yǎng)“金標(biāo)準(zhǔn)”：周期太長(zhǎng)(3-4W)3.血清學(xué)診斷：a.

接種BCG可出現(xiàn)陽(yáng)性b.

不能區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核病和治愈后留下?lián)p傷灶的病人c.

交叉反應(yīng)，假陽(yáng)性不能早期診斷！容易漏診、誤診！P

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.TB熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA的意義1.

能穩(wěn)定檢測(cè)10copy的TB-DNA，靈敏度高

，特異性強(qiáng)2.

早期、快速、準(zhǔn)確地診斷結(jié)核病。痰液、肺及支氣管灌洗液——肺結(jié)核血液——播散性結(jié)核和各臟器的結(jié)核病腦脊液——中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病宮頸拭子、尿道拭子——泌尿生殖道結(jié)核病P

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.TB熒光定量PCR檢測(cè)TB-DNA的意義3.熒光定量PCR檢出結(jié)核桿菌陽(yáng)性率顯著高于痰涂片抗酸染色和改良羅氏培養(yǎng)法。4.TB-DNA濃度可用于判斷療效：痰標(biāo)本中結(jié)核桿菌的數(shù)量呈逐漸下降趨勢(shì)

，TB-DNA拷貝數(shù)下降。根據(jù)病原體DNA濃度，對(duì)藥物治療及療效觀察提供參考依據(jù)P

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.CP/MP肺炎衣原體(CP)、肺炎支原體(MP)感染與致病n

CP、MP感染可致咽炎、支氣管炎和肺炎，潛伏期約2-3周，通常起病較緩慢。持續(xù)性咳嗽。n

MP肺炎約占非細(xì)菌性肺炎的1/3以上，或各種原因引起的肺炎的l0％。n

MP感染與小兒支氣管哮喘密切相關(guān)。n

CP感染與冠心病存在密切的關(guān)系n

肺癌、支氣管擴(kuò)張患者中CP感染率相對(duì)較高P

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.MP/CP/SARS熒光定量PCR用于非典型性肺炎的診斷意義：1.

直接檢測(cè)病原體，早期、快速、特異診斷非典型性肺炎。2.

治療方案與細(xì)菌、病毒感染的治療方案不同3.

流行病學(xué)調(diào)查。TB、MP、CP已被許多醫(yī)院尤其是婦幼保健醫(yī)院和兒童醫(yī)院納為肺部感染的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目P

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.甲型H1N1流感流行性感冒簡(jiǎn)稱流感，是由甲、乙、丙三種流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。甲型流感病毒根據(jù)其表面(H和N)結(jié)構(gòu)及其基因特性的不同又可分成許多亞型，至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有16個(gè)亞型(H1-H16)，神經(jīng)氨酸酶9個(gè)亞型(N1-N9)。P

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.“豬流感”更名為“甲型H1N1流感”世界衛(wèi)生組織4月30日宣布，從當(dāng)日起，該組織不再使用“豬流感”一詞指代當(dāng)前疫情，而開(kāi)始使用“A（H1N1）型流感”一詞。與之相對(duì)應(yīng)，我國(guó)的官方文件從5月1日起相繼用“甲型H1N1流感”代替原來(lái)的“人感染豬流感”。世界衛(wèi)生組織發(fā)言人說(shuō)，之所以更改叫法，是因?yàn)椤柏i流感”一詞容易誤導(dǎo)消費(fèi)者，美國(guó)和墨西哥等國(guó)的豬肉及豬肉制品已明顯受到其他國(guó)家進(jìn)口禁令影響。世界衛(wèi)生組織的聲明說(shuō)，根據(jù)目前掌握的科學(xué)依據(jù)，此次流行的病毒僅在人際間傳播，尚無(wú)證據(jù)表明它在豬群內(nèi)傳播，或由豬向人傳播，也無(wú)證據(jù)表明人因食用豬肉或相關(guān)產(chǎn)品染病。P

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.病

原

學(xué)甲型H1N1流感病毒屬于正粘病毒科，典型病毒顆粒呈球狀，直徑為80

nm~120

nm，有囊膜。囊膜上有許多放射狀排列的突起糖蛋白，分別是血凝素HA、神經(jīng)氨酸酶NA和M2蛋白。病毒顆粒內(nèi)為核衣殼,呈螺旋狀對(duì)稱,直徑為10nm。甲型H1N1流感病毒為單股負(fù)鏈RNA

病毒，基因組約為13.6kb，由大小不等的8

個(gè)獨(dú)立片段組成。P

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.流行病學(xué)特點(diǎn)傳染源主要為病豬和攜帶病毒的豬，感染豬流感病毒的人也被證實(shí)可以傳播病毒。感染這種病毒的動(dòng)物均可傳播。傳播途徑主要為呼吸道傳播，也可通過(guò)接觸感染的豬或其糞便、周?chē)廴镜沫h(huán)境或氣溶膠等途徑傳播。某些毒株如H1N1可在人與人之間傳播，其傳染途徑與流感類似，通常是通過(guò)感染者咳嗽或打噴嚏等。P

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.易感人群普遍易感?；颊叨鄶?shù)年齡在25歲至45歲之間，目前報(bào)道以青壯年為主，應(yīng)注意老人和兒童。P

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.臨床表現(xiàn)潛伏期一般1至7天左右，較流感、禽流感潛伏期長(zhǎng)。人感染甲型H1N1流感后的早期癥狀與普通人流感相似，包括發(fā)熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還會(huì)出現(xiàn)腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發(fā)紅等。P

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.部分患者病情可迅速進(jìn)展，來(lái)勢(shì)兇猛、突然高熱、體溫超過(guò)39℃，甚至繼發(fā)嚴(yán)重肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細(xì)胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征、呼吸衰竭及多器官損傷，導(dǎo)致死亡。P

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.實(shí)驗(yàn)室檢查1.

外周血象：白細(xì)胞總數(shù)一般不高或降低。重癥患者多有白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞減少，并有血小板降低；2.

血清學(xué)診斷：可使用間接ELISA、抗原捕捉ELISA、熒光免疫法等；3.

反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）：由于PCR技術(shù)具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已用于豬流感病毒基因的檢測(cè)和分子流行病學(xué)調(diào)查等；P

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.4

病毒分離：從患者呼吸道標(biāo)本中（咽拭子、口腔含漱液、鼻咽或氣管吸出物、痰或肺組織）分離甲型H1N1流感病毒。常用的方法有雞胚接種法和細(xì)胞培養(yǎng)法。現(xiàn)有的診斷方法中，病毒分離法是較敏感的，但需要2-3周時(shí)間。P

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.人感染豬流感的診斷標(biāo)準(zhǔn)1.

醫(yī)學(xué)觀察病例：曾到過(guò)甲型H1N1流感疫區(qū)，或與病豬及甲型H1N1流感患者有密切接觸史，1周內(nèi)出現(xiàn)流感臨床表現(xiàn)者。列為醫(yī)學(xué)觀察病例者，對(duì)其進(jìn)行7天醫(yī)學(xué)觀察（根據(jù)病情可以居家或醫(yī)院隔離）。P

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.2

疑似病例：曾到過(guò)疫區(qū)，或與病豬及甲型H1N1流感患者有密切接觸史（也可流行病學(xué)史不詳），1周內(nèi)出現(xiàn)流感臨床表現(xiàn)，呼吸道分泌物、咽試子、痰液、血清H亞型病毒抗體陽(yáng)性或核酸檢測(cè)陽(yáng)性。P

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.3.

臨床診斷病例：被診斷為疑似病例，且與其有共同暴露史的人被診斷為確診病例者。4.

確診病例：從呼吸道標(biāo)本或血清中分離到特定病毒；RT-PCR對(duì)上述標(biāo)本檢測(cè)，有甲型H1N1病毒RNA存在，經(jīng)過(guò)測(cè)序證實(shí)，或兩次血清抗體滴度4倍升高，可確診為人感染甲型H1N1流感。P

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.TORCH四

TORCH感染特點(diǎn)與檢測(cè)TOX:

Toxoplasma

gondiiRV:

Rubella

virusCMV:

Human

cytomegalovirusHSV:

Herpes

simplex

virusP

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.TORCHTORCH感染特點(diǎn)1.母-胎傳播的主要病原體2.引起胎兒畸形新生兒缺陷的重要原因3.自然狀態(tài)下呈隱性感染4.懷孕、多次輸血、AIDS等易發(fā)生顯性感染5.可致多發(fā)性、全身性感染6.只有風(fēng)疹可獲得長(zhǎng)久的免疫力，可用疫苗預(yù)防P

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.TORCH–TOX(一)

弓形蟲(chóng)感染與致病l

滋養(yǎng)體如弓形

，廣泛分布，人獸共患。l

寄生在有核細(xì)胞中，貓和貓科動(dòng)物是終宿主l

易感者多，免疫者少l

我國(guó)智力低下兒的弓形蟲(chóng)感染率28％畸形兒的弓形蟲(chóng)抗體IgM陽(yáng)性率12.25％l

艾滋病患者約有20％～80％合并弓形蟲(chóng)感染

，造成艾滋病死亡的一個(gè)重要并發(fā)病P

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.TORCH-CMV(二)

人巨細(xì)胞病毒感染與致病l

人群自然感染率達(dá)到60-90%，多為隱性感染l

免疫功能低下(懷孕、多次輸血、器官移植、AIDS)發(fā)生顯性感染l

可發(fā)生垂直傳播，是宮內(nèi)感染和胎兒畸形的主要病毒之一l

圍生期感染l

血、尿、乳汁、精液、分泌物中都可檢出病毒P

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.TORCH-RV(三)

人風(fēng)疹病毒感染與致病l

風(fēng)疹是一種世界性的病毒傳染病，

是造成畸胎及先天性疾病的病毒之一l

出疹前1周至出疹后5天均有傳染性l

人是風(fēng)疹病毒的唯一宿主l

風(fēng)疹感染后可獲得持久的免疫力，臨床顯性再感染并不多見(jiàn)。P

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.TORCH-RV(三)

人風(fēng)疹病毒感染與致病l

先天性風(fēng)疹感染往往發(fā)生在母體初次感染之時(shí)，可致先天性風(fēng)疹綜合癥(CRS)

三聯(lián)癥：白內(nèi)障、耳聾、心臟病。l

妊娠時(shí)體內(nèi)皮質(zhì)類固醇激素的增加以及細(xì)胞免疫功能的減弱，這種對(duì)正常人無(wú)害的再感染有可能造成病毒蔓延以至影響胎兒。P

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.TORCH-HSV(四)

人單純皰疹病毒感染與致病l

HSV原發(fā)感染多為隱性，大多無(wú)臨床癥狀或呈亞臨床表現(xiàn)l

HSV-1主要引起口唇皰疹，皰疹性結(jié)膜炎、腦炎，皮膚性皰疹l

HSV-2主要引起原發(fā)性生殖器皰疹

(80%)。l

HSV感染后大多數(shù)個(gè)體不能徹底消滅病毒，也不能阻止復(fù)發(fā)，病毒以潛伏狀態(tài)長(zhǎng)期存在宿主體內(nèi)。P

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.TORCH-HSV(四)

人單純皰疹病毒感染與致病l

妊娠期婦女因HSV-1被激活，可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，引起胎兒畸形、智力低下、流產(chǎn)等。l

圍產(chǎn)期感染可引發(fā)新生兒皰疹，死亡率高達(dá)50%以上。l

HSV常與HIV-1同時(shí)感染，并能促進(jìn)病情發(fā)展，引起嚴(yán)重的局部和播散性感染。目前認(rèn)為HSV是一種調(diào)節(jié)因素，能激活HIV復(fù)制l

與宮頸癌關(guān)系密切。P

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