GB坂崎腸桿菌檢驗

阪崎腸桿菌檢驗GB4789.40-2010目前一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點本標準與GB/T4789.40-2008相比，主要變化如下：——修改了標準的中英文名稱；——刪除了附錄A中A.3。目前二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點Enterobactersakazakii(ES)3目前三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點內(nèi)容第一部分：一般特征第二部分：流行病學(xué)特征第三部分：ES的檢驗4目前四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一部分：一般特征命名培養(yǎng)特征生化反應(yīng)抵抗力增殖能力致病性5目前五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點1980年之前一直被稱為黃色陰溝腸桿菌。DNA-DNA雜交生化反應(yīng)黃色素抗生素敏感性一、命名6目前六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點二、培養(yǎng)特征G－無芽孢桿菌，兼性厭氧，在6℃-47℃范圍內(nèi)均可生長，適溫35-37℃營養(yǎng)要求不高：

VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他與其他常見腸桿菌相似7目前七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點三、生化反應(yīng)

生化反應(yīng)結(jié)果D-山梨醇-產(chǎn)生吐溫80脂酶+細胞外Dnase+氧化酶試驗-黃色菌落+α-葡萄糖苷酶+8目前八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點ES及親緣關(guān)系較近的腸桿菌生化反應(yīng)比較試驗生化反應(yīng)1阪崎腸桿菌陰溝腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌成團腸桿菌日勾維腸桿菌賴氨酸脫羧酶－－＋－＋精氨酸雙水解酶＋＋－－－鳥氨酸脫羧酶＋＋＋－＋KCN生長＋＋＋v＋發(fā)酵:蔗糖＋＋＋(＋)＋衛(wèi)矛醇－(－)－(－)－核糖醇－(－)＋－－棉子糖＋＋＋v＋D-山梨醇－＋＋v－χ-甲基-葡萄糖甙＋(＋)－－－D-阿拉伯糖醇－(－)＋－＋黃色素＋－－(＋)－注：＋：90-100％；(＋)：75-89%；V：25-74％；(－)：10-24％；－：0-9％9目前九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第三部分

食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗?zāi)壳笆揬總數(shù)三十六頁\編于十三點主要內(nèi)容一、制訂的主要依據(jù)二、《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗》11目前十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點制訂的主要依據(jù)ISO2006年“乳和乳制品中阪崎腸桿菌的檢測”（Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakii）方法；美國FDA2002年頒布的“嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的分離和計數(shù)”（IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula）方法；2004年荷蘭乳及乳制品控制中心對各種阪崎腸桿菌檢測方法的比較研究；雀巢研究中心2005年環(huán)境樣品中阪崎腸桿菌快速檢測方法；阪崎腸桿菌快速檢測培養(yǎng)基DFI研究資料。目前十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點SN第一部分：分離與計數(shù)方法第二部分：PCR方法第三部分：熒光PCR方法目前十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點常見選擇性培養(yǎng)基DFI(Oxoid,UK)ESIA(AES,France)R＆F（R&FLaboratories，Switzerland）OKmedium其他：國內(nèi)阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基、CES(Merck,Germany)，NA+-MUG14目前十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點顯色培養(yǎng)基的特點-葡萄糖苷酶活性指示劑：5-溴-4-氯-3-吲哚-，D-吡喃葡糖甙（XGlc）4-甲基傘形酮--D-葡糖苷（-MUG）4-鄰硝基苯--D-吡喃葡糖甙15目前十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點16目前十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點選擇性培養(yǎng)基的選擇1.FDA方法使用VRBGA，ISO方法中使用ESIA，本方法中我們選用DFI。2.ESIA和DFI的基本原理相似，二者都是根據(jù)ES能產(chǎn)生α-葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產(chǎn)生有色菌落。3.VRBGA對ES的選擇性差，ES、陰溝腸桿菌和成團腸桿菌等多種腸道菌都可以在該平板上生長并產(chǎn)生粉紫色菌落，膽汁酸沉淀形成紫色暈圈。即：不能觀察到ES的特征性菌落。17目前十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點顯色培養(yǎng)基的選擇性較好DFI對ES的選擇性較好，ES形成的藍綠色特征性菌落易于辨認，而且：硫化氫指示劑可以區(qū)分ES和產(chǎn)生少量α-葡萄糖苷酶但H2S陽性菌株（如普通變形桿菌）。ES都可以在DFI平板上生長并產(chǎn)生藍綠色菌落其他常見菌在DFI平板的菌落顏色白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等黃色菌落：赫氏埃希氏菌黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：少量菌種ESIA:藍色，1-3mm182023/5/17目前十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點選擇性增菌肉湯的選擇FDA方法選擇EE肉湯，ISO方法選擇mLST-Vm，即在LST中加入Nacl和Vm。本標準使用mLST-Vm。EE肉湯適合所有腸道菌群的生長繁殖，這就可能對ES的生長產(chǎn)生競爭性抑制作用，降低檢出率。研究證明與其他腸桿菌科細菌（如沙門氏菌，大腸埃希氏菌等）相比，ES具有較高的耐滲透壓能力。加入0.5M的Nacl在保證ES良好生長的同時，可以有效地抑制上述其他細菌的生長。Vm可有效地抑制G+菌的生長。而較高的生長溫度可以進一步抑制其他細菌的生長。2023/5/17目前十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點二、食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗

阪崎腸桿菌檢驗20目前二十頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點本標準修改采用ISO/TS22964（1stedition2006-02-01）Milkandmilkproducts—DetectionofEnterobactersakazakiiFDAJuly2002;RevisedAugust2002IsolationandEnumerationofEnterobactersakazakiifromDehydratedPowderedInfantFormula21目前二十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一法：阪崎腸桿菌的檢驗

第二法：阪崎腸桿菌的計數(shù)

22目前二十二頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點第一法

阪崎腸桿菌的檢驗23目前二十三頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點阪崎腸桿菌檢驗程序報告TSA25℃±1℃，48h±4h生化鑒定挑取黃色菌落DFI瓊脂36℃±1℃，24h±2h挑取藍綠色菌落1mL+mLST-Vm10mL44℃±0.5℃，24h±2h檢樣100g（mL）+BPW稀釋液900mL36℃±1℃，18h±2h前增菌選擇性增菌選擇性分離生化鑒定100g（mL）目前二十四頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.1前增菌和增菌左圖：未混合；右圖：混合后。加樣入已預(yù)熱到44℃的BP中25目前二十五頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.2分離DFI36℃±1℃24h±2h26目前二十六頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點TSA：25℃培養(yǎng)后典型ES：黃色陰性對照E.coliATCC25922：白色菌落黃色素27目前二十七頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點5.3鑒定（生化反應(yīng)）生化試驗特征黃色素產(chǎn)生＋氧化酶－L-賴氨酸脫羧酶－L-鳥氨酸脫羧酶（＋）L-精氨酸雙水解酶＋檸檬酸水解(＋)發(fā)酵：D-山梨醇（－）L-鼠李糖＋D-蔗糖＋D-蜜二糖＋苦杏仁甙＋注：＋＞99%陽性；－＞99%陰性；（＋）90%－99%陽性；（－）90%-99%陰性。28目前二十八頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用推薦使用的ES生化鑒定方法有很多，主要有API20E，ID32E，BiologGN2MicroPlate，VITEKGNI+等。上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標準采用。在腸桿菌的生化鑒定中使用最廣泛的是API20E和VitekGNI+。29目前二十九頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點API20E生化鑒定板典型生化反應(yīng)圖示

API20E反應(yīng)編碼API20E結(jié)果評價3345373Excellentidentification3305173Excellentidentification3305363Verygoodidentification3305373Goodidentification30目前三十頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點VITEK-GNI+31目前三十一頁\總數(shù)三十六頁\編于十三點質(zhì)量控制選擇標