蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測方法標(biāo)準(zhǔn)

#蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測方法標(biāo)準(zhǔn).范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶抑制法測定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。測試方法酶抑制率法.原理在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率和農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物(乙酰膽堿)水解，其水解產(chǎn)物和顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)在410nm處測定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。.試劑PH8.0緩沖溶液：分別取43.5g無水磷酸氫二鉀和2.2g磷酸二氫鉀，用510mL蒸餾水溶解。顯色劑:分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4°C冰箱中保存。底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.1mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過十天。乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化DA0值應(yīng)控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀??？蛇x用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的AA0值應(yīng)控制在0.3以上。4儀器

分光光度計(jì)或相應(yīng)測定儀。常量天平。恒溫水浴或恒溫箱步驟樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品運(yùn)，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，靜制十五分鐘，之間需振蕩幾次，待用。對照溶液測試：先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，依次加入0-1^酶液、0.1mL顯色劑、0.lmL底物搖勻，此時(shí)檢液開始顯色反應(yīng)，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值人A0。樣品溶液測試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作和對照溶液測試相同，但在加底物之前必須放置15分鐘，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值A(chǔ)At。6結(jié)果的表述計(jì)算結(jié)果計(jì)算檢測結(jié)果按公式計(jì)算：抑制率（%）=[（△4-△、）/AAJX100式中：AA°一對照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值；AAt—樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值；結(jié)果判定結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當(dāng)蔬菜樣品提取液對酶的抑制率三50%時(shí)，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽性結(jié)果。陽性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上。對陽性結(jié)果的樣品，可用其它方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。7附則酶抑制率法技術(shù)指標(biāo)

靈敏度指標(biāo)：酶抑制率法對部分農(nóng)藥的檢出限見表2酶抑制率法對部分農(nóng)藥的檢出限表2酶抑制率法對部分農(nóng)藥的檢出限農(nóng)藥名稱檢出限mg/kg農(nóng)藥名稱檢出限mg/kg敵敵畏0.1氧化樂果0.8對硫磷1.0甲基異柳磷5.0辛硫磷0.3滅多威0.1甲胺磷2.0」硫克百威0.05馬拉硫磷4.0敵百蟲0.2樂果3.0吠南丹0.057.1.2符合率：在檢出的抑制率三50%的30份以上樣品中，經(jīng)氣相色譜法驗(yàn)證，陽性結(jié)果的符合率應(yīng)該在80%以上。8說明蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時(shí)，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。當(dāng)溫度條件低于37度，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相應(yīng)延長，延長時(shí)間的確定，應(yīng)以膽堿酯酶空白對照測試3min吸光度變化差值在0.3以上，即可往下操作