微生物限度檢查方法適用性驗證方案

目錄.概述 第2頁驗證目的 第2頁驗證頻次 第2頁適用范圍 第2頁參照標準 第2頁驗證小組人員及職責 第2頁.試驗前準備 第3頁驗證所需的文件資料 第3頁驗證條件 第3頁回收試驗 第5頁結果判斷 第7頁.概述驗證目的進行產品的微生物計數(shù)檢查時，應進行方法適用性試驗（即微生物回收試驗），以確認所采用的方法適合于微生物限度檢查。本次驗證的目的就是確認本法適合生產原料、初包裝材料、一次性婦用（殼聚糖）生物高分子止血吸附栓的微生物限度檢查。驗證頻次建立生產原料、初包裝材料一次性婦用（殼聚糖）生物高分子止血吸附栓的微生物限度檢查法時。檢驗方法更改時。原料、初包裝材料、產品發(fā)生變化或檢驗程序發(fā)生改變時。適用范圍生產原料、初包裝材料、一次性婦用（殼聚糖）生物高分子止血吸附栓的微生物限度檢查。參照標準2015版《中國藥典》第四部通則。1.5驗證小組人員及職責組長姓名部門/職務分工xxx總經理批準驗證方案和報告，領導和組織驗證工作組員xxx質量部負責人起草驗證方案、收集整理數(shù)據(jù)，完成驗證報告xxx技術部審核驗證方案并實施，審核驗證報告xxx質量部負責驗證過程中的檢測工作驗證方案實施進程安排方案制定日期2017年 月 日實施日期2017年 月 日報告日期2017年 月 日

.驗證前準備2.1驗證所需的文件資料序號文件名稱檢查情況存放部門1培養(yǎng)基管理制度2檢定菌種管理制度3微生物限度檢驗操作規(guī)程4手提式壓力蒸汽滅菌器操作及維護保養(yǎng)規(guī)程6生物潔凈安全柜操作及維護保養(yǎng)規(guī)程7微生物限度儀操作及維護保養(yǎng)規(guī)程8生化培養(yǎng)箱操作及維護保養(yǎng)規(guī)程9恒溫怛濕培養(yǎng)箱操作及維護保養(yǎng)規(guī)程結論：驗證： 日期：年月日 確認： 日期：年月日驗證條件環(huán)境要求微生物計數(shù)檢查在萬級潔凈區(qū)內的百級單向流空氣區(qū)域內進行，其全過程應嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)與工作臺面必須進行潔凈度驗證。2.2.2驗證所需主要儀器序號名稱檢查結果1手提式壓力蒸汽滅菌器2生物潔凈安全柜3微生物限度儀4生化培養(yǎng)箱5恒溫怛濕培養(yǎng)箱結論：驗證：日期：年月曰確認：日期：年月曰驗證用培養(yǎng)基所有培養(yǎng)基均采用即用型培養(yǎng)基，臨用時按使用說明使用。-表1-名稱批號生產廠家沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(TSA)結論：驗證： 日期：年月日 確認： 日期： 年月日驗證用菌株：菌種來源( )-表2-名稱代數(shù)接種日期傳代保存培養(yǎng)基轉種頻次培養(yǎng)條件保存溫度金黃色葡萄菌CMCC(B)26003TSA每月1次35℃/24-48h2-8℃銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSA每月1次35℃/24-48h2-8℃枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501TSA每月1次35℃/24-48h2-8℃白色念珠菌CMCC(F)98001SDA每月1次25℃/2-7天2-8℃黑曲霉CMCC(F)98003SDA每月1次25℃/2-7天2-8℃結論：驗證： 日期：年月日 確認： 日期：年月日2.2.5菌液制備-表3-

菌株名稱菌株狀態(tài)接種培養(yǎng)基培養(yǎng)條件稀釋液稀釋比稀釋結果金黃色葡萄球菌工作菌株TSB30-35℃/18-24hPH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液1:10菌懸液每1ml含困量小于100cfu銅綠假單胞菌TSB30-35℃/18-24h枯草芽抱桿菌TSB30-35℃/18-24h白色念珠菌SDB20-25℃/24-48h黑曲霉SDB20-25℃/5-7天含0.05%(ml/ml)吐溫80的PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液菌懸液每1ml含抱子數(shù)小于100cfu結論:驗證： 日期： 年月日確認： 日期： 年月日接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生抱梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30s35℃培養(yǎng)18s24小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20~25℃培養(yǎng)24s48小時，上述培養(yǎng)物用PH7.0無菌氟化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)小于l00cfu(菌落形成單位)的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，20~25℃培養(yǎng)5s7天，加入3s5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7無菌氟化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無菌試管內用含0.05%(ml/ml)聚山梨醋80pH7.0無菌氟化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氟化鈉溶液制成每lml含抱子數(shù)小于100cfu的抱子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應在2小時內使用；若保存在2s8℃可在24小時內使用。黑曲霉抱子懸液可保存在28℃,在驗證過的貯存期內使用?；厥赵囼灩┰囈褐苽涓鶕?jù)原料、一次性婦用（殼聚糖）生物高分子止血吸附栓的理化特性和生物學特性，取供試品，剪碎，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或0.9%的無菌氯化鈉溶液，浸泡，振搖，制成1：10的供試液A。若需要，調節(jié)供試液pH值至6?8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。根據(jù)初包裝材料的理化特性和生物學特性，取供試品用開孔面積為20cm2的消毒過的金屬板壓在內層面上，將無菌棉簽用氯化鈉溶液沾濕，在板孔范圍內擦抹5次，換1支棉簽再擦抹5次，每個位置用2支棉簽共擦抹10次，共擦抹5個位置100cm2。每支棉簽擦抹完后立即剪斷，投入盛有30ml氯化鈉注射液的試管中，全部擦抹棉簽投入后迅速搖晃1分鐘，靜置10分鐘，即得供試液A。若需要，調節(jié)供試液PH值至6---8。必要時用同一稀釋液將供試液進一步十倍系列稀釋。接種和稀釋按下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應不超過供試液體積的1%。為確認供試品中的微生物能被充分檢出，首先應選擇最低稀釋級的供試液進行計數(shù)方法適用性驗證。試驗組取供試液10ml,加入0.1ml試驗菌液，混勻，制成供試液B。使每1ml供試液B中含菌量不大于100cfu。供試品對照組取供試液A10ml,加入0.1ml沖洗液代替試驗菌液，混勻，制成供試液C。使每1ml供試液C中含菌量不大于100cfu。菌液對照組取沖洗液10ml代替供試液人，加入0.1ml試驗菌液，混勻，制成供試液D。使每1ml供試液D中含菌量不大于100cfu。接種計數(shù)方法傾注法平板計數(shù)。取上述4種制備好的供試液各1ml，置直徑90mm的無菌平皿中，注入15-20ml(18ml)溫度不超過45℃融化的TSA和SDA培養(yǎng)基，混勻，凝固，在規(guī)定的培養(yǎng)條件下倒置培養(yǎng)。陰性對照及空白對照為確認試驗條件是否符合要求，應進行陰性對照及空白對照試驗，陰性對照及空白對照試驗應無菌生長。如陰性對照及空白對照有菌生長，應進行偏差調查。