第章細胞因子與黏附分子檢測

臨床免疫學檢驗技術第十六章

細胞因子與黏附分子檢測鄭曉群目錄第一節(jié)概述第二節(jié)臨床常用的測定方法第三節(jié)細胞因子與黏附分子測定的臨床應用第一節(jié)概述重點提示細胞因子與黏附分子概念細胞因子的作用特點細胞因子的生物學功能黏附分子的生物學功能概念細胞因子（cytokine）是由免疫細胞及組織細胞表達并分泌的，在細胞間發(fā)揮相互調(diào)控作用的一類小分子蛋白質(zhì)或多肽，通過與細胞表面相應受體的結合發(fā)揮生物學效應。概念黏附分子（adhesionmolecules，AM）是由細胞產(chǎn)生、介導細胞間或細胞與細胞外基質(zhì)間相互結合的分子，以受體-配體結合的形式發(fā)揮作用。一、細胞因子及其受體的特性與功能白細胞介素（interleukin，IL）干擾素（interferon，IFN）集落刺激因子（colonystimulatingfactor，CSF）腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF）生長因子（growthfactor，GF)趨化因子（chemokine）細胞因子的種類一、細胞因子及其受體的特性與功能低分子量的多肽或糖蛋白，大部分為單體，半衰期短。具有高效性、多效性、重疊性、網(wǎng)絡性、協(xié)同性和拮抗性。細胞因子的特性一、細胞因子及其受體的特性與功能參與調(diào)控免疫細胞的發(fā)育、分化和功能。參與調(diào)控機體的免疫應答。參與體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡等作用。細胞因子生物學功能一、細胞因子及其受體的特性與功能細胞因子與相應受體結合后發(fā)揮效應。由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三部分構成。組織反應性：受體的分布及密度。膜型受體與可溶型受體。細胞因子受體的共同特性二、黏附分子的特性與功能選擇素家族(selectinfamily)鈣黏素家族(cadherinfamily)整合素家族（integrinfamily)免疫球蛋白超家族（Immunogolobulinsuperfamily,IgSF)分類二、黏附分子的特性與功能缺少跨膜和胞內(nèi)部分，分子量小?？芍苯臃置诘窖汉推渌w液。具有黏附分子的結合活性。其水平的增高程度與疾病相關：膿毒血癥：可溶性E-選擇素，升高20倍～23倍。HIV感染：可溶性L-選擇素，升高2倍～3倍。可溶型黏附分子二、黏附分子的特性與功能參與免疫細胞的分化和發(fā)育參與免疫應答和炎癥反應參與傷口愈合、血栓形成淋巴細胞的歸巢參與調(diào)節(jié)細胞凋亡生物學功能第二節(jié)臨床常用的測定方法重點瞎提示基本既方法方法露學評折價注意希事項檢測醬水平基因娃水平穿：分雁子生物物學逮法蛋白辦水平活性埋：生擦物學僚方法含量垃：免平疫學嘆測定碌法一、壓酶聯(lián)迎免疫纖吸附太試驗夾心既法EL許IS益A：一步將法和名兩步妨法單克叛隆抗與體或迎多克驢隆抗胖體用于蠟細胞療因子昏檢測可溶濁型細炸胞因廊子受燦體或仍黏附她分子氧檢測首選臭方法基本記方法一、攻酶聯(lián)征免疫血吸附青試驗特異屯、簡底便成本蕉低、滑易于賣推廣可大污批量開同時追檢測煤且廢開棄物午便于優(yōu)處理敏感欄性偏貫低不能鏟判斷融細胞偽因子上的生蝦物學腰活性優(yōu)施點缺驕點一、緒酶聯(lián)西免疫賽吸附屑試驗檢測求標本門：建肝議采得用血婦漿（莖肝素永或ED傍TA抗凝塘血）檢測鮮條件絕：適遇時、曾適當治刺激驕劑、垮檢測另時點干擾牛因素剃：標畏本嚴皺重溶道血、恥污染等、分民泌與樹降解注意略事項二、化學瓦發(fā)光抵酶免婦疫試荷驗CL老EI熄A：雙抗訴體夾浮心法自動尋化分釋析體液敵中細壺胞因撥子或捎可溶架型細閃胞因芬子受太體的取定量基本即方法二、化學培發(fā)光故酶免谷疫試樓驗特異筑性好哄、靈味敏度決高、壁線性管范圍僑寬試劑秧穩(wěn)定智，可鵲自動勁化檢段測缺點犁是不雨能區(qū)懸分細之胞因綿子的鏟生物搏學活星性方法況學評宏價三、流式舍細胞辟術基于灘熒光門抗體謀染色掛技術烏并利原用流式侍細胞濕儀高分辨鄰力所乘建立提的方法訓。單個痰細胞訂水平泄的檢測飼。用于凈細胞滾內(nèi)細仇胞因瘋子、芒細胞壘表面惰黏附分子袋和細胞笑因子繡受體蘭的檢測犁?；驹椒ㄈ?、流式察細胞份術基本瓣步驟1．分嚇離和候培養(yǎng)頭待檢興細胞2．細竄胞破挑膜與嚷固定3．封截閉非圖特異淘性結籃合位緩點4．染替色與趁分析三、流式雜細胞劇術區(qū)分泳不同獨分泌感特性跑的細曲胞亞逢群：Th投1細胞IF統(tǒng)N-須γTh不2細胞IL隙-4細胞狡表面勵的黏事附分把子或柏細胞材因子土受體柄：直接或間戴接熒犁光抗粉體染竊色無需作細辭胞固禮定和根非特播異性陸結合扇位點少的封折閉三、流式盆細胞他術具有洲特異桐、高捕效、勾靈敏演等特殃點，想進行愈多參鏡數(shù)相平關分裕析接補近生屈物體文的分奴析條吼件，粥更準伐確反賽映體驚內(nèi)狀況藥。缺點后是流奴式細續(xù)胞儀慎較昂矮貴，須不易理普及使用牌。方法蘋學評程價三、流式塔細胞償術標本我處理雄：活來細胞透，保暗持良聲好狀賊態(tài)對照期選擇旦：未兆刺激燭對照侍、激狐活對陳照、移同型勝對照熒光翅素選眨擇：低表達--訊-P榆E、巡壽AP碑C高表達--密-F兩IT跟C注意瞧事項四、酶聯(lián)葬免疫率斑點闊實驗基本能方法EL畢IS隱PO善T每個勒斑點衡代表柿單個原分泌渴待測寧細胞周因子驕的細胞熔。斑點奇顏色型深淺炭與細筒胞分睜泌細叼胞因臉子的恭含量相關羞。四、酶聯(lián)組免疫顧斑點驗實驗優(yōu)于準傳統(tǒng)館分泌鍬細胞鄙的檢島測類似驚于體蠻內(nèi)的允實驗贈環(huán)境比常敘規(guī)EL負IS挺A法的橋靈敏狹度高20尿0倍引入喘生物東素與燦親合慎素放肌大系盾統(tǒng)，砍可大前大提貍高靈近敏度方法通學評欄價四、酶聯(lián)集免疫親斑點樂實驗選用暈的底瞎物應黑在反渡應后果形成菌不溶協(xié)性產(chǎn)繩物抗體哥：高扮親和另力、倒高特矩異性舅、低略內(nèi)毒斗素的索特點同時錯檢測春兩種構細胞祝因子靜，如IL符-2和IL六-4結核饞感染T細胞鎖斑點授試驗注意項事項五、狠免疫柄學測鬼定方聾法學崖評價影響狀因素視較少效，特份異性能高操作砌簡便效、快惹速，瞞易于才推廣大部葵分細怕胞因齡子均補有商魯品化滔試劑蜜盒，適方便蠅檢測重復選性好罷，實清驗結培果穩(wěn)翁定優(yōu)櫻點五、利免疫暈學測急定方廉法學攔評價所測丑定的檢只是祝蛋白粱含量拼，與著其生摸物活帖性不一晃定呈把正比忌。結果躍與所副用的扔抗體馳來源是及親元和力屬有很取大的關系曠。敏感臨性相友對較涼低，拴不如讓生物總學測央定法。干擾攏測定粗：標屬本中鹿可溶導性受棋體，轎某些挎細胞票因子促結合瘦蛋白方或載器體蛋猾白。缺我點第三摔節(jié)細胞殖因子檔與黏思附分膀子測鍛定的耗臨床價應用重點械提示臨床驅(qū)應用途原則特定臘疾病賞的輔哈助診匆斷一、礦臨床椅應用松原則全身廢免疫圓或炎堅癥狀疾態(tài)：遙血漿秋或血房誠清細胞逢分泌除細胞鴿因子隔特性普：外鼓周血拾單個醋核細端胞或牛相應登細胞炎癥耗局部淹細胞倍因子答的水盼平：泥局部出分泌鉗液細胞鋪內(nèi)定紙位檢壓測：典相應社細胞基因表表達抖水平往：相虧應細綱胞療效逢觀察辱和預醋后判蟲斷：彈急性經(jīng)期和矩恢復柱期雙冰份標益本細胞聲表面脅細胞奏因子女受體柳或黏戒附分谷子：赤細胞濱活性包或狀帖態(tài)標本辰的適編當選載取一、袋臨床挎應用臘原則不同灶的檢惹測目魯?shù)?，源選擇織適宜導的檢雜測方法哪。聯(lián)合扶應用濱不同碎的檢枝測方兆法，障綜合略分析曲檢驗結果鑒。生物碼活性染：生偉物學組方法基因肝水平襯：實預時RT飄-P于CR細胞度內(nèi)的際細胞獄因子吵：FC惱M方法堡的聯(lián)齡合應亡用一、傭臨床刺應用糠原則復雜撥的免研疫調(diào)需節(jié)或姿效應委網(wǎng)絡籮系統(tǒng)單一衰檢測簡：不獨能提掛供有誼效的騎疾病勝信息聯(lián)合魄檢測壓，綜豎合分巾析項目波的聯(lián)史合檢聾測二、倆特定謹疾病籃的輔掉助診降斷細胞增因子陰風暴變態(tài)僅反應晌性疾陸病自身買免疫鵝病免疫稿缺陷魯病器官降移植直排斥絨反應惡性辭腫瘤細胞符因子螞與疾武病二、憲特定肺疾病甜的輔銅助診岸斷動脈呢粥樣冤硬化腎臟身疾病肝臟氧疾病自身仙免疫啞病黏附織分子因與疾射病三、淡評估潑機體灘的免作疫狀糊態(tài)機體駝免疫叼應答國的強老弱，立可通叨過細泡胞因使子或封黏附弓分子續(xù)的表臺達水賠平來反映木。當疾聚病好船轉(zhuǎn)或帥恢復壺時，標其免值疫狀克態(tài)調(diào)雪整，擔細胞叛因子融或黏君附分蜘子也歸恢復正常虹。四、勾疾病恢療效摘監(jiān)測衫及指嫁導用唯藥人工泳重組渾細胞揮因子癥的應豆用選擇疊細胞奔因子牲的種潑類及膛劑量疾病陵療效航監(jiān)測細胞份因子香拮抗虹劑或僻抗體歌應用本章格小結細胞晌因子與黏評附分船子是照構成藏免疫黃應答輛的重喇要物扎質(zhì)基理礎，泄檢測這須些分嶼子可芳反映橋機體諷的免去疫狀態(tài)虧。免疫中學測臟定法凡是細胞述因子浩與黏扎附分續(xù)子常測用的良檢測聰方法釘，包括酶閑聯(lián)免在疫吸予附試味驗、化學泡發(fā)光酶免掏疫試碑驗、綿流式贏細胞嗓術和脖酶聯(lián)精免疫膏斑點實驗山。本章穿小結免疫柱學測伴定法蠟檢測縮慧的是冷細胞尚因子炮或黏清附分冤子的抄蛋白斑含量閣，具有裹特異課性