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文檔簡介
一、色譜分析法:1、簡介:基于混合物各組分在體系中兩相的物理、化學(xué)性能差異(如吸附、分配差異等)而進(jìn)行分離和分析的方法。國際公認(rèn)俄國M.C.茨維特為色譜法的創(chuàng)始人。菠菜的葉綠體中色素的提取和分離
2、色譜法的應(yīng)用展示:(1)按流動(dòng)相和固定相的不同,色譜法分為氣相色譜法和液相色譜法。氣相色譜法的流動(dòng)相是氣體,液相色譜法的流動(dòng)相是液體(2)按吸附劑及其使用形式可分為柱色譜、紙色譜和薄層色譜。(3)按吸附力可分為吸附色譜、離子交換色譜、分配色譜(4)按色譜操作終止的方法可分為展開色譜和洗脫色譜。(5)按進(jìn)樣方法可分為區(qū)帶色譜、迎頭色譜和頂替色譜。3、色譜法的分類:紙色譜,以濾紙為載體,是以濾紙纖維及其結(jié)合水作為固定相,以有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相的分配色譜分離。紙上色譜分離具有設(shè)備簡單、操作方便、分離效率高、所需樣品量少等優(yōu)點(diǎn),但分離量少、回收困難,分離速度慢等;柱色譜,具有進(jìn)樣量大,回收容易等優(yōu)點(diǎn),但其分辨率不如紙上色譜和薄層色譜高;薄層色譜分離,將固定相在玻璃平板上鋪成薄層而進(jìn)行分離的一種分離技術(shù)。薄層色譜是柱色譜和紙上色譜兩者的結(jié)合。二、實(shí)驗(yàn)原理
含有Cu2+和Fe3+的溶液涂在濾紙一端,丙酮作展開劑,在濾紙的毛細(xì)作用下,展開劑攜帶Cu2+和Fe3+沿濾紙纖維向上移動(dòng)因?yàn)樗俣炔煌ㄎ胶腿芙饽芰Φ牟煌?,一段時(shí)間后,Cu2+和Fe3+距起點(diǎn)的距離會(huì)不同,從而達(dá)到分離的目的。三、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)及主要實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象
1.操作要點(diǎn)(1)裁紙(2)點(diǎn)樣(3)展開(4)顯色(5)
分離四:實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)裝置制作點(diǎn)層析試樣配展開劑層析操作顯色反應(yīng)操作步驟:操作要點(diǎn):濾紙剪成約1cm寬,10cm長(保證下端能浸入展開劑中1cm)的濾紙條,一端固定在橡膠塞上,在距濾紙條一端2cm處用鉛筆畫一小圓點(diǎn)。配試樣后,用毛細(xì)管蘸取試樣在“原點(diǎn)”處點(diǎn)直徑0.3-0.5cm的斑點(diǎn),晾干后再點(diǎn)。重復(fù)3-5次。也在濾紙下方距離底邊2cm處畫出混合液細(xì)線代替點(diǎn)樣。用丙酮9mL,6mol/L鹽酸1mL配成展開劑。展開劑不可沾到試管壁,點(diǎn)樣后的濾紙條不可接觸試管內(nèi)壁,濾紙條下端浸入展開劑中1cm,注意不要讓試樣點(diǎn)觸及展開劑。注意觀察濾紙條上色帶的變化,濾紙條取下后用氨氣熏,觀察顏色變化;氨熏應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行(1)層析過程中的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象(2)氨熏后的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象五、實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)及主要實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象
用小燒杯代替大試管。用鐵絲橫穿過濾紙,架在燒杯上方(如圖)。調(diào)節(jié)完濾紙高度后,蓋上培養(yǎng)皿形成氣室。
氯化鐵層,顏色較深硫酸銅層,顏色稍淺用紙層析法分離鐵離子和銅離子六、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、為防止水解,飽和FeCl3和CuSO4可加少量HCl或H2SO4酸化,不影響實(shí)驗(yàn)效果。2、氨熏需在通風(fēng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。3、層析速度開始較快,后逐漸減慢,大約10分鐘即可分離完全。1、藥品準(zhǔn)備:菠菜葉4-5克;石英砂1克(可用細(xì)砂代替);丙酮;層析液按石油醚9份、丙酮1份(體積比)配制,也可用20份石油醚、2份丙酮、1份苯配制,或用汽油代替2、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象3、
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