基因工程抗體

基因工程抗體1第一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五抗體研究的世代第一代多克隆抗體第二代單克隆抗體第三代基因工程抗體2第二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五傳統(tǒng)抗體抗原免疫所有抗體混合物123412341234脾臟淋巴結(jié)B細(xì)胞3第三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五

一.多克隆抗體（polyclonalantibody）：指由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的針對抗原物質(zhì)中多種抗原決定簇的多種抗體的混合物。如:免疫血清（含多種特異性抗體）。

實(shí)際意義：（1）預(yù)防、治療感染性疾病如：破傷風(fēng)抗毒素血清抗破傷風(fēng)胎盤球蛋白抗病毒感染（2）臨床診斷，缺點(diǎn)：特異性差。

4第四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五

二.單克隆抗體（monoclonalantibody,McAb）由單一克隆B細(xì)胞雜交瘤產(chǎn)生的，只識(shí)別抗原分子某一特定抗原決定簇的特異性抗體。特點(diǎn)：具有高度均一性。由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生：雜交瘤細(xì)胞由骨髓瘤細(xì)胞無限增殖；免疫B細(xì)胞合成、分泌特異性抗體。

5第五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五可生產(chǎn)有用抗體的

淋巴細(xì)胞

若與

癌細(xì)胞融合，則形成穩(wěn)定而可培養(yǎng)的細(xì)胞株。癌細(xì)胞可培養(yǎng)生長漿細(xì)胞Bcell可分泌抗體融合瘤HybridomaYYYYYYYYYYYYYYYYYY細(xì)胞融合兩組染色體混在一起也可以培養(yǎng)生長產(chǎn)生專一性抗體一個(gè)Bcell只產(chǎn)生一種抗體6第六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五7第七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五8第八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五鼠源單抗臨床應(yīng)用的障礙血清半衰期短，20h抗原抗體結(jié)合力、親和力不夠HAMA反應(yīng)：8－10天出現(xiàn)，20－30天高峰，anti-id封閉與抗原結(jié)合位點(diǎn)，抗鼠抗體加速單抗清除。過敏休克9第九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五影響單抗與靶細(xì)胞或抗原結(jié)合引起變態(tài)反應(yīng)和器官損害HAMA反應(yīng)的示意圖10第十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五基因工程抗體

單克隆抗體在診斷和治療中具有重要的作用。但是鼠源性的單抗用于臨床治療易產(chǎn)生人抗鼠抗體（Humananti-MouseAntibody,HAMA)。利用基因工程技術(shù)，對抗體進(jìn)行改造，減少鼠源性的成分，增加人源化的成分。利于單抗的臨床應(yīng)用。11第十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五第二節(jié)鼠單抗的人源化1.人鼠嵌合抗體：鼠單抗的可變區(qū)序列＋人抗體恒定區(qū)序列2.利用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)，通過定點(diǎn)突變，改變 可變區(qū)的氨基酸，減少鼠源性。12第十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五1人一鼠嵌合抗體(ChimericAntibodies)

人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。13第十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五

構(gòu)建嵌合抗體的大致過程是，將鼠源單抗的可變區(qū)基因克隆出來，連到包含有人抗體恒定區(qū)基因及表達(dá)所需的其它元件(如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、選擇標(biāo)記等)的表達(dá)載體上，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞、CHO細(xì)胞)中表達(dá)。構(gòu)建重組表達(dá)載體14第十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五2鼠單抗可變區(qū)的人源化

盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時(shí)它仍可能引發(fā)較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。為了進(jìn)一步降低抗體的鼠源成分，發(fā)展出CDR移植技術(shù)。

CDR移植即把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱CDR移植抗體或改型抗體，也就是人源化抗體。

15第十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五16第十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五

經(jīng)過CDR移植，抗體的免疫原性很低，而其抗原結(jié)合能力保持不變，結(jié)合半抗原及全抗原(如細(xì)胞表面受體、病毒等)的改形抗體都已有報(bào)道，到現(xiàn)在已有數(shù)百種人源化抗體。17第十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五18第十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五2002年完全人源化單抗humira獲得批準(zhǔn)上市，這是單克隆抗體藥物發(fā)展具有里程碑意義的大事，預(yù)示著單克隆抗體藥物一個(gè)迅猛發(fā)展的新時(shí)代的來臨。Humira是一種治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的單克隆抗體藥物。19第十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五第三節(jié)小分子抗體和融合蛋白抗體1.小分子抗體：改造基因，截取具有生物活性的區(qū)段，加以重組表達(dá)。2.融合蛋白抗體：抗體的部分基因片段＋其他蛋白的基因。其他蛋白如蓖麻蛋白或綠膿桿菌外毒素等。20第二十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五噬菌體抗體庫技術(shù)噬菌體抗體庫技術(shù)是抗體工程領(lǐng)域的重要進(jìn)展。在該技術(shù)出現(xiàn)以前，基因工程抗體主要是用DNA重組技術(shù)對已有單抗進(jìn)行改造。而抗體庫技術(shù)發(fā)展到了用基因工程技術(shù)克隆新的抗體，使抗體工程進(jìn)入了一個(gè)全新的時(shí)期。21第二十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五由于人雜交瘤-單抗體系的低效性，使人單抗的制備一直進(jìn)展緩慢?？贵w庫技術(shù)為人單抗的制備提供了有效的手段。對于能獲得體內(nèi)免疫的抗原，從被免疫者獲取淋巴細(xì)胞構(gòu)建抗體庫很容易得到高親和力的人源抗體。22第二十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五隨著抗體庫技術(shù)的成熟，大容量抗體庫的構(gòu)建，已能夠不經(jīng)免疫從總抗體庫篩選出高親和力的人源抗體。23第二十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五治療型單克隆體－基因時(shí)代明星單抗藥物主要集中在腫瘤和自身免疫疾病的治療。全球銷售額500億美元。美國占90%。國內(nèi)單抗藥物發(fā)展迅速，上市的國產(chǎn)單抗藥物有9個(gè)，處于臨床研究階段的有23個(gè)。銷售額10億美元。24第二十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五國際上已批準(zhǔn)上市的單抗適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段移植排斥大腸癌冠心病淋巴瘤移植排斥炎癥性腸病、類風(fēng)濕CD317-1A血小板受體ⅡbⅢaCD20CD25TNF-аOKT3PanorexReoProRituxanSimulectRemicade鼠單抗鼠單抗人－鼠嵌合抗體人－鼠嵌合抗體人－鼠嵌合抗體人－鼠嵌合抗體19861995(德國)1994199719981998、199925第二十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段移植排斥乳腺癌RVS感染AMLCLLCD25HER-2RSVF蛋白CD33CD52ZanapaxHerceptinSynagisMylotargCAMPATH人源化抗體人源化抗體人源化抗體人源化抗體－化療藥物交聯(lián)物人源化抗體1997199819982000200126第二十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五正在進(jìn)行臨床開發(fā)中的

基因工程抗體適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段銀屑病IL－8CD11a(IgG1)ICAM-3CD80CD2CD3ABX－IL8Anti-CD11aICM3IDEC-114MEDI-507Smartanti-CD3Human(人源)Humanized(人源化)HumanizedPrimatizedHumanizedHumanized(IgG)ⅡⅠ，Ⅱ臨床前ⅠⅠⅠ/Ⅱ27第二十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Complement(C5)TNF-аTNF-аTNF-аCD4CD45G1.1D2E7CDP870InfliximabIDEC-151MDX-CD4HumanizedHumanHumanized(Fab)Chimeric(IgG1)(嵌合)Primatized(IgG1)Human(IgG)ⅡⅢⅡFDA批準(zhǔn)（1999）ⅡⅠ28第二十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段克羅恩病，節(jié)段性回腸炎潰瘍性結(jié)腸炎自身免疫病TNF-аTNF-аа4?7CD4CD3InfliximabCDP571LDP－02OrthoCloneOKT4ASmartanti-CD3Chimeric(IgG1)Humanized(IgG4)HumanizedHumanized(IgG)HumanizedFDA批準(zhǔn)（1998）ⅡⅡⅡⅠ/Ⅱ29第二十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段系統(tǒng)性紅斑狼瘡多發(fā)性硬化癥C5CD40LCD40LComplement(C5)VLA-4CD40L5G1.1AntovaIDEC-1315G1.1MEDI-507AntegrenIDEC-131HumanizedHumanized(IgG)HumanizedHumanized(IgG)Humanized(IgG)HumanizedⅠⅡ(繼續(xù))ⅡⅠ/ⅡⅡⅡ30第三十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段自身免疫出血性病癥氣喘/變態(tài)反應(yīng)CD64(FcgR)IL-5IL-5IL-4IgECD23MDX-33SCH55700SB-240563SB-240683rhuMab-E25IDEC-152HumanHumanized(IgG4)HumanizedHumanizedHumanized(IgG1)PrimmatizedⅡⅡⅡⅡⅢⅠ31第三十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段移植物抗宿主疾病同種異體移植排斥CD147CD2CD2CD3CD3ABX-CBLBTI-322MEDI－507Orthoclone/OKT3SMATanti-CD3Murine(IgM)(小鼠)Rat(IgG)(大鼠)HumanizedMurine(Ig2a)HumanizedⅢⅡⅠ/ⅡFDA批準(zhǔn)（1996）Ⅰ/Ⅱ32第三十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段同種異體移植排斥CD25CD25?2-integrinCD4CD147ZenapaxSimulectLDP-01OKT4AABX-CBLHumanized(IgG1)Chimeric(IgG1)Humanized(IgG)Humanized(IgG)Murine(IgM)FDA批準(zhǔn)（1997）FDA批準(zhǔn)（1998）Ⅰ/ⅡаⅡⅢ33第三十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段同種異體移植排斥中風(fēng)青光眼抗凝血?jiǎng)〤D40LCD18?2-integrinTGF－?2FactⅦAntovaAnti-LFA-1LDP-01CAT-152CorsevinMHumanized(IgG)Murine[F(ab’)2]Humanized(IgG)HumanChimeric(Fab)Ⅰ/Ⅱ(繼續(xù))ⅢⅠ/ⅡаⅡⅠ34第三十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段冠狀血管成形術(shù)并發(fā)癥心肌梗死羅氏肉瘤病毒GlycoproteinⅡbⅢareceptorPDGF?RCD18FproteinReoProAbciximabCDP860Anti-CD18SynagisHumanized(IgG)Humanized[F(ab’)2]Humanized[F(ab’)2]Humanized(IgG1)Ⅰ/ⅡаⅡⅡFDA批準(zhǔn)（1998）35第三十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段艾滋病乙型肝炎巨細(xì)胞病毒中毒性休克一般癌癥Gp120HepBCMVTNF-аCD14VEGFPRO542OstavirProtovirMAK-195(SEGAND)IC14Anti-VEGFCD4fusionHumanHumanMurine[F(ab’)2]?Humanized(IgG1)ⅡⅡ(批準(zhǔn))ⅢⅢⅠⅢ36第三十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段卵巢癌結(jié)腸病肺病頭、頸部病變CA12517-1ACellsurfaceantigenAnti-idiotypicGD3epitopeEGFROvaRexPanorexBEC2IMC－C225MurineMurine(IgG2a)Murine(IgG)MerckKGaAChimeric(IgG0Ⅱ/Ⅲ德國批準(zhǔn)（1995）ⅢⅢ37第三十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段乳腺病慢性淋巴細(xì)胞白血病急性粒細(xì)胞白血病非何杰金淋巴瘤HER2/neuCD52CD33CD20CD22HerceptinCampath1/(LDP03)SmartRituxanLymphoCideHumanized(IgG1)Humanized

(IgG1)M195Chimeric(IgG1)Humanized(IgG)FDA批準(zhǔn)（1998）生物制品許可申請蛋白質(zhì)設(shè)計(jì)FDA批準(zhǔn)Ⅰ/Ⅱ38第三十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五適用病癥靶抗原抗體名稱抗體來源臨床階段非何杰金淋巴瘤黑色素瘤HLAHLADR抗id(GD2)*Smart1D10Oncolym(Lym-1)TriGemHumanizedRadiolabelledmurineMurineⅠⅡ/ⅢⅡ39第三十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期五