栓素A2和前列環(huán)素在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣中的作用

栓素A2和前列環(huán)素在實(shí)驗(yàn)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣中的作用【摘要】目的:探討血栓素A2和前列環(huán)素在兔蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)致腦血管痙攣中的作用。方法:行兔枕大池單次注血制備SAH模型，分別于注血前、注血后第1天、第4天、第7天行CTA檢查，根據(jù)第4天和第7天的檢查結(jié)果分為痙攣組和未痙攣組。采兔耳緣動(dòng)脈血，放射免疫法測定血栓素B2(TXB2)和前列腺素F1α的表達(dá)，計(jì)算TXB2/PGF1α比值。結(jié)果:未痙攣組在注血后第1天、第4天以及第7天外周血TXB2、PGF1α和TXB2/PGF1α改變不明顯，與注血前比較差異均無顯著性。痙攣組外周血TXB2、PGF1α第1天升高不明顯，第4天和第7天均顯著升高，且TXB2較PGF1α升高幅度大，TXB2、PGF1α以及TXB2/PGF1α和注血前及未痙攣組比較差異有顯著性()。結(jié)論:TXA2和PGI2可能沒有參與急性腦血管痙攣的發(fā)生，但在遲發(fā)性腦血管痙攣發(fā)生中可能起重要作用。

【關(guān)鍵詞】血栓素A2腦血管痙前列環(huán)素

Abstract:Objective:ToexploretheeffectofTXA2andPGI2inacuteanddelayedcerebralvasospasm(CVS)aftersubarachnoidhemorrhage(SAH).Methods:ThirtyexperimentalSAHmodelsinrabbitswereestablishedbysingleinjectionofautologuousarterialbloodtocisternamagna.AccordingtotheresultofCTA,therabbitsweredivideintospasmgroupandunspasmgroup.TheconcentrationsofTXB2andPGF1αinperipheralbloodwereexaminatedwithradioimmunologictechniquesat1day，4and7daysafterSAH.Results:TheconcentrationofTXB2andPGF1αinspasmgroupshowednoincreasingonthe1dayafterSAH,butsignificantlyincreasedon4and7days().On4and7daysafterSAHtheconcentrationofTXB2andPGF1αinspasmgrouphadsignificantdifferencewithunspasmgroup().Conclusion:TXA2andPGI2mayhavenoeffectonthegenerationofacuteCVS，buttheymaypalyaroleintheoccuranceanddevelopmentofthedelayedCVSprocess.

Keywords:thromboxaneA2；cerebralvasospasm；prostaglandins

遲發(fā)性腦血管痙攣是蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)最嚴(yán)重的并發(fā)癥,其發(fā)生率高達(dá)30%～66%，是SAH致死和致殘的主要原因[1]，其發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，與多種血管活性物質(zhì)引起的血管舒張受損、炎癥和免疫反應(yīng)、機(jī)械性因素和內(nèi)皮受損有關(guān)[2，3]。血栓素A2和前列環(huán)素都是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，在正常生理狀態(tài)下，TXA2與PGI2處于相對(duì)平衡狀態(tài)以維持正常的血管緊張度并保持血管通暢,而TXA2與PGI2平衡的紊亂可造成血管的痙攣和閉塞。在體內(nèi)TXA2、PGI2極不穩(wěn)定，自發(fā)水解成穩(wěn)定的代謝產(chǎn)物TXB2、6-Keto-PGF1α，因此測定TXB2、6-Keto-PGF1α含量可推測TXA2和PGI2的含量。TXB2/PGF1α平衡失調(diào)可能是引起蛛血后腦血管痙攣的重要因素。我們通過建立枕大池單次注血制備SAH模型、多排螺旋CT血管造影判斷動(dòng)物SAH后腦血管痙攣發(fā)生情況，測定注血前以及注血后第1天、第4天、第7天的TXB2和PGF1α變化，探討TXA2和PGI2在蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣發(fā)病機(jī)制中的作用。

1材料和方法

材料日本大耳白兔30只，體重～kg，由溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。TXB2、6-Keto-PGF1α放射免疫試劑盒(購自北京301醫(yī)院放免研究所)。SN-695B型智能放免γ測量儀。Lightspeedpro16層螺旋CT掃描儀。

模型制備采用枕大池單次注血法[5，6]制備SAH模型。使用戊巴比妥靜脈麻醉后，于環(huán)枕交界處切開皮膚，使用18號(hào)靜脈留置針穿刺枕大池，獲得突破感，退出針芯可見清亮腦脊液流出，此時(shí)于耳緣動(dòng)脈抽取1ml未抗凝動(dòng)脈血，緩慢注射至基底動(dòng)脈周圍，術(shù)后慶大霉素針沖洗傷口，縫合皮膚，頭低15°位15min，待動(dòng)物醒后，觀察進(jìn)食量、肢體活動(dòng)情況及自潔性，剔除神經(jīng)功能嚴(yán)重?fù)p傷者。

影像學(xué)觀察及實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于注血前、注血后第1天、第4天、第7天，分別在戊巴比妥靜脈麻醉下，經(jīng)耳緣靜脈注射造影劑，行CTA檢查，測量血管直徑，根據(jù)注血后第4天和第7天有無發(fā)生痙攣分為痙攣組和未痙攣組，具體按照Liszczak標(biāo)準(zhǔn)判斷：痙攣程度以/基礎(chǔ)值×100%表示，痙攣組：可視性管腔縮窄20%或以上；未痙攣組：輕度血管痙攣其管腔縮窄小于20%或無痙攣征象。

標(biāo)本收集所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于注血前、注血后第1天、第4天和第7天抽取耳緣動(dòng)脈血6ml，加入EDTA-Na，以4℃、3500r/min，離心后去上清，-20℃保存。

TXB2、6-Keto-PGF1α放射免疫檢查所收集標(biāo)本按照TXB2、6-Keto-PGF1α放射免疫試劑盒說明書的加液步驟嚴(yán)格操作，以γ-放射免疫計(jì)數(shù)器測定放射值。以對(duì)照管測定值和空白管測定值的比率做標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和公式算出測定管的TXB2和6-Keto-PGF1α值。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法以統(tǒng)計(jì)軟件做t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

CTA血管直徑測量剔除神經(jīng)功能嚴(yán)重?fù)p傷2只。余28只在注血后第1天均發(fā)生急性血管痙攣。但經(jīng)第4天和第7天CTA檢查,其中10只急性血管痙攣緩解，血管直徑基本恢復(fù)正常，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物只在注血第1天出現(xiàn)食量下降，自潔性稍差等反應(yīng)，之后神經(jīng)功能恢復(fù)正常。另外18只出現(xiàn)遲發(fā)性的血管痙攣，第4天血管痙攣達(dá)到高峰，CTA檢查可見血管串珠樣、斷流改變，血管直徑發(fā)生顯著縮窄。

TXB2和PGI2變化未痙攣組在注血后第1天、第4天以及第7天外周血TXB2、PGF1α和TXB2/PGF1α改變不明顯，與注血前比較差異均無顯著性；痙攣組外周血TXB2、PGF1α第1天升高不明顯，第4天和第7天TXB2、PGF1α均顯著升高，且TXB2較PGF1α升高幅度大，TXB2、PGF1α以及TXB2/PGF1α和注血前及未痙攣組比較均明顯升高，見表1。

3討論

兔單次注血模型在注血后第1天均發(fā)生急性CVS，可能由注入血液的直接刺激和急性炎癥反應(yīng)引起。第4天和第7天CTA檢查發(fā)現(xiàn)，約36%未發(fā)生遲發(fā)性腦血管痙攣，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，說明單次注血模型不能得到可靠的血管痙攣模型，需結(jié)合動(dòng)物神經(jīng)功能和CTA或相關(guān)檢查方可確認(rèn)有無遲發(fā)性腦血管痙攣發(fā)生。

PGI2由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成，具有強(qiáng)烈舒張局部微小血管作用，TXA2主要由血小板合成，具有強(qiáng)烈收縮局部微小血管作用，TXA2與PGI2平衡的紊亂可造成血管的痙攣和閉塞，加重組織損傷。蛛血后蛛網(wǎng)膜下腔液中的氧合血紅蛋白及其他因素可以使血管壁合成PGI2、TXA2紊亂，發(fā)生TXA2/PGI2倒置，兩者平衡被破壞，從而引起血管痙攣。TsujiT等制作犬類SAH模型測得離體基底動(dòng)脈在內(nèi)皮被移除后，TXA2是導(dǎo)致血管縮窄的主要因素。TakeuchiH等[10]也發(fā)現(xiàn)SAH發(fā)生早期給予TXA2合成酶抑制劑，7d后行血管造影發(fā)現(xiàn)給藥組基底動(dòng)脈狹窄較未給藥組減輕。同樣SAH7d后給藥組血漿中TXB2的水平低于未給藥組，血管造影證實(shí)了蛛血早期可以通過減少血漿中TXA2來延緩血管痙攣。本實(shí)驗(yàn)痙攣組動(dòng)物注血后第1天在急性期血管痙攣中TXB2、PGF1α和TXB2/PGF1α無明顯升高，第4天出現(xiàn)血管痙攣高峰，基底動(dòng)脈直徑測量最小，同時(shí)期血漿中TXB2、PGF1α顯著增高，TXB2/PGF1α出現(xiàn)倒置，證實(shí)TXA2和PGI2沒有參與SAH后急性CVS，但在遲發(fā)性腦血管痙攣發(fā)生中可能起重要作用。

實(shí)驗(yàn)中相同量的動(dòng)脈血制備SAH，按照CTA檢查結(jié)果所示，36%動(dòng)物模型未發(fā)生血管痙攣，通過檢測發(fā)現(xiàn)痙攣組和未痙攣組兔血漿中TXB2、PGF1α在注血后第1天都無明顯變化，未痙攣組在第4天、第7天仍無明顯升高，而痙攣組在第4天、第7天卻出現(xiàn)了成倍的增高，與第1天和注血前有顯著差異；同時(shí)期痙攣組遲發(fā)性血管痙攣程度在第4～7天達(dá)到高峰[11]，在遲發(fā)性血管痙攣中TXB2/PGF1α不但隨時(shí)間而升高，而且其增高與CTA表現(xiàn)的血管痙攣程度基本一致，故可以通過觀察注血后第1天和以后的TXB2/PGF1α變化初步估計(jì)SAH后有無發(fā)生遲發(fā)性CVS。

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